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药用植物组织培养与脱落酸
脱落酸在植物的许多生理过程中起着至关重要的作用,而且它在药用植物生物技术领域研究中的地位不断提升.文章对脱落酸在药用植物组织培养和种质离体保存、改变药用植物次级代谢物的积累等方面的各种作用进行了综述.
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降香黄檀种子和离体胚超低温保存研究
以降香黄檀的成熟种子和离体胚为材料,探讨了含水量对其存活的影响,以及快速冷冻法和玻璃化冷冻法对种子和离体胚超低温保存的影响.结果发现,种子含水量由15.04％降至8.14％时,其发芽率和生活力分别由82.67％,85％降至18.35％,25％;种子含水量由15.04％降至9.37％时,经玻璃化冷冻和快速冷冻后其发芽率由82.67％分别降至37.50％,25.37％,其中含水量12.35％的种子发芽率为63.58％,50.45％,较其他含水量的高;含水量为26.32％的种胚,经玻璃化冷冻和快速冷冻后,其发芽率由95.67％分别降至58.31％,33.82％,含水量在14.17％ ～ 21.34％时,其发芽率有所下降,但下降幅度不大.实验结果表明,种子超低温保存佳条件为含水量12.35％,玻璃化冷冻;离体胚超低温保存佳条件为含水量15.04％,玻璃化冷冻.结论是含水量对超低温保存后降香种子和种胚的发芽率影响显著;玻璃化冷冻法显著优于快速冷冻法.
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微波在生物材料超低温保存中的作用
超低温保存生物材料的降温和复温过程中,冰晶的形成将损伤细胞,影响冻存效果.相对于常规冷冻方法,应用微波技术更能抑制冰晶生长,提高冻存质量.微波具有良好的穿透性,可使冷冻材料较为均匀地受热.在生物材料降温时,微波场产生扭矩影响水分子集束的结构,使其不利于冰晶的增长,从而阻断了冰晶的形成,增强生物材料的玻璃化能力.在复温过程中,极性分子(如水)吸收微波能量转化为热量,产生较高的复温速率,能阻止重结晶的发生,获得较好的复温效果.
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冻存保护剂浓度对乳猪肝细胞-80℃低温保存的影响
目的:探索适宜于乳猪肝细胞-80℃长期低温保存的冻存保护剂浓度.方法:体外分离乳猪肝细胞,以含不同浓度二甲基亚砜(DMSO,浓度分别为50、100、150和200mL/L)的低温保存液-80C分别保存肝细胞30 d与60 d.复苏后接种培养,对其存活率、贴壁率、白蛋白及尿素合成能力等进行检测,并观察其形态结构变化.结果:不同DMSO浓度的低温保存液保存复苏后猪肝细胞的活力及形态学表现均有所不同,其中含50 mL/L DMSO低温保存液组保存效果差;100mL/L组次之;150 mL/L组佳.150 mL/L DMSO低温保存液组保存60 d肝细胞复苏后的存活率为81%,贴壁率是79%,较mL/L与100mL/LDMSO组有显著性差别(P＜0.05),150 mL/l DMSO组复苏后接种培养肝细胞的形态与未冻存组无明显差别,均保持较强的合成尿素及白蛋白能力.结论:150 mL/L DMSO浓度适合于乳猪肝细胞的-80℃长期超低温保存,保存时间对其活力无明显影响.冷冻保存;冻存保护剂;二甲基亚砜.
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海藻糖对液氮深低温保存的同种瓣caspase-3表达的影响
目的 探讨海藻糖作为深低温冷冻保护剂对液氮保存的同种带瓣大动脉组织细胞caspase-3表达的影响.方法 在液氮中冻存时间点分为12、15、18个月,依据冻存液不同分为5组,分别是:0.1 mol/L DMSO(对照组),0.1 mol/L海藻糖(实验组1),0.1 mol/L海藻糖+0.1 mol/L DMSO (实验组2),0.2mol/L海藻糖+0.1 mol/LDMSO(实验组3),0.3 moL/L海藻糖+0.1 mol/L DMSO(实验组4).采用RT-PCR和Western Blot方法分别测定caspase-3的相对表达量.新鲜组作为阴性对照.结果 在每个时间点下(P<0.05),细胞凋亡轻的是新鲜组,较好的是实验组2和实验组3,其次依次为实验组4、实验组1,凋亡严重的是对照组.结论 海藻糖和DMSO的联合运用能够很好的抑制caspase-3的表达.0.1 mol/L海藻糖+0.1 mol/LDMSO和0.2mol/L海藻糖+0.1 mol/L DMSO 能大限度的抑制caspase-3的表达.
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超低温保存自体粉碎颅骨成形骨瓣植入术
一、资料与方法1.一般资料:本组68例,男50例,女18例,年龄4～68岁,平均33.5岁.颅骨损伤的原因:交通事故伤48例,坠落伤9例,打击伤7例,跌伤4例,均为闭合性颅脑损伤.
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乙二醇为主体的玻璃化溶液对小鼠桑椹胚的超低温保存
本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体,添加葡聚糖和海藻配制成的玻璃化溶液(EDT20,EDT30及EDT40),在室温(20 ℃或25 ℃)下对小鼠体内受精的桑椹胚进行玻璃化冷冻保存.毒性试验表明,30%葡聚糖溶液(D),0.5mol/L海藻糖溶液(T),以及两种物质的混合液即DT溶液,对胚胎均无化学毒性作用,乙二醇是化学毒性的主要来源.且随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长,对胚胎的化学毒性也增大.小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻试验中,20 ℃室温下胚胎冷冻效果好于25 ℃,但差异无显著意义(P>0.05).在20℃室温下,胚胎于EDT30中平衡1 min,后直接投入液氮中一步法冷冻后胚胎体外发育率、移植妊娠率和产仔率分别为94.00%、45.00%、38.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05).若将胚胎在10%EG中平衡5 min,再移入EDT30中平衡30 s二步法冷冻效果佳,解冻后囊胚发育率、移植妊娠率和产仔率分别为96.00%、57.00%、52.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05).
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超低温保存自体颅骨与数字化三维成形钛网颅骨修补的临床疗效比较
目的：研究数字化三维成形钛网与超低温保存自体颅骨两种材料在颅骨修补中的临床应用效果。方法：使用回顾性分析方法，研究数字化三维成形钛网及自体颅骨两种材料用于修补额颞顶部颅骨缺损174例患者的临床资料。自体颅骨组66例，数字化三维成形钛网组108例。结果：自体颅骨组并发症发生率为12.1%，塑形满意度为95.4%；数字化三维成形钛网组并发症发生率为9.2%，塑形满意度83.5%。两组并发症发生率比较差异无统计学意义（P>0.05），两组塑形满意度上比较差异有统计学意义（P<0.05），自体颅骨组塑形满意度高于数字化三维钛网组。结论：超低温保存下自体颅骨修复颅骨缺损并发症少、塑形满意高，是一种简便、经济、安全、可行的方法。
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CryoMed 1010型自控程序降温仪维修一例
自控程序降温仪是细胞移植、细胞或组织的超低温保存中不可缺少的仪器,是进行细胞学研究的必需工具,在脊髓移植、器官移植手术中起着重要的作用.它的工作原理是:以液态氮为制冷剂,利用液氮挥发时快速降温的特性,通过微机程序控制液氮的挥发量,将挥发室内的温度从常温快速降至-90℃或更低温度,为脊髓、器官移植等手术材料的储备和异地开展提供了便利条件.
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桔梗试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生
目的 为桔梗Platycodon grandiflorum种质资源的保存提供一条新途径.方法 采用玻璃化法研究了桔梗试管苗茎尖超低温保存及植株再生.结果 桔梗嫩梢在培养基(MS+5%DMSO+103 g/L蔗糖)上培养3 d,切取2～3 mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡20 min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理90 min,投入液氮保存1 d后,40℃水浴化冻,含410 g/L蔗糖的MS培养基洗涤20 min,接种于含0.6 mg/L KT、0.2 mg/L BA、0.05mg/L NAA的MS培养基表面的滤纸上,暗处理1 d后转移到新鲜的上述再生培养基中,暗培养1周后转到正常光下,80%以上成活,植株生长正常.结论 桔梗种质资源的玻璃化法超低温保存操作简单、成活率高、再生植株正常,可用于生产实践.
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佛手茎尖玻璃化超低温保存和植株再生
目的 为佛手种质资源的保存提供一条新途径.方法 对佛手茎尖进行了玻璃化超低温保存,并对保存后的茎尖进行微嫁接试验,获得再生植株.结果 佛手茎尖在含5%DMSO和5%蔗糖的MS培养基上预培养48h后,切取3～4 mm的茎尖,室温(25℃)下装载液(60%PVS_2)预处理30 min,0℃下玻璃化液PVS_2处理80 min,投入液氮保存24 h后取出,在40℃水浴快速化冻,室温下分别用1.2 mol/L蔗糖和MT基本培养基洗涤2次,每次10 min.保存后的茎尖经TTC法检测,成活率达81.25%;将茎尖嫁接到黑暗培养基的砧木上,再生率可达52.94%,且再生植株生长和分化正常,经PCR检测不含黄龙病病原.结论 玻璃化超低温保存方法可用于佛手种质资源保存.
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海藻糖保护同种带瓣大动脉的适浓度
背景:目前液氮低温保护组织和器官技术已经非常成熟,其保护剂一直以来争论不一.目的:观察不同冷冻保护剂对液氮深低温冻存同种带瓣大动脉组织细胞凋亡和代谢的影响,求佳的冷冻保护剂及冷冻保护剂的适浓度.方法:取新西兰大白兔带瓣主动脉、肺动脉标本,其在液氮中冻存12,5,8个月,存液分别使用0.1 mol/L二甲基亚砜,.1 mol/L海藻糖,.1 mol/L海藻糖+0.1 mol/L二甲基亚砜,.2 mol/L海藻糖+0.1 mol/L二甲基亚砜,.3 mol/L海藻糖+0.1 mol/L二甲基亚砜.标本复温后,疫组织化学方法检测标本的细胞凋亡情况,萄糖消耗量测定法检测组织细胞的代谢水平.结果与结论:免疫组织化学和葡萄糖消耗量测定结果均显示经0.1 mol/L海藻糖+0.1 mol/L二甲基亚砜,.2 mol/L海藻糖+ 0.1 mol/L二甲基亚砜冻存液处理的标本冻存效果好,次是经0.3 mol/L海藻糖+0.1 mol/L二甲基亚砜处理和经0.1 mol/L海藻糖单独处理的标本,独使用0.1 mol/L二甲基亚砜处理的标本冻存效果差.说明海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉活性有很好的保护作用,独使用海藻糖优于单独使用二甲基亚砜,合应用海藻糖和二甲基亚砜效果更好,联合应用的海藻糖佳浓度范围是0.10～0.20 mol/L.
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医学研究中生物样本的低温冷冻处理及其进展
低温冷冻保存是活体组织长期保存的一种有效方法,主要是通过降低细胞代谢率来达到保存目的.一般而言,0℃-196℃之间的保存均属于低温保存,但以-20℃-40℃冰箱保存、-60℃-80℃深低温冰箱保存和液氮(-196℃)超低温保存形式居多.
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茅苍术种质资源的超低温保存
目的:为茅苍术种质资源的保存提供一条新途径.方法 :采用干冻法研完了茅苍术种子超低温保存,采用玻璃化法研究了试管苗茎尖的超低温保存.结果 :采用干冻法冻存的茅苍术种子发芽率在70%以上,采用玻璃化法冻存的茅苍术试管苗茎尖,再生率在30%以上.结论 :超低温保存可用于茅苍术种子及试管苗茎尖的保存,为茅苍术种质资源的长期保存提供了理论依据.
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一种实用菌种的保存方法
菌种保存是细菌学检验、教学与科研的基础之一.菌种保存方法有多种,理想的为真空冷冻干燥法[1],但操作技术难度大,花费高,需特殊设备,一般单位不宜做到.而常规琼脂斜面保存法[2],常因传代次数多,易污染,易变异,给保存带来诸多不便.近几年来我们采用卵黄液普通安瓿熔封法超低温保存菌种,效果很好.现介绍如下:
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青天葵组培物超低温保存研究
目的 用超低温方法保存青天葵组培物.方法 采用单因子比较法、均匀设计法考察生长周龄、冷冻保护剂、预培养时间、降温方式、化冻方式等因素对青天葵组培物超低温保存后细胞生活力的影响.结果 青天葵组培物较佳的超低温保存程序为:5周龄的组培物,在4℃进行低温锻炼12 d,以12.5% DMSO+0.25%LH为冷冻保护剂.在4℃静置处理30 min,然后在-18℃,停留1 h后投入液氮中保存,材料取出后,在20%化冻,无洗涤后,再接种,组培物能够存活并继续生长.结论 超低温保存方式可以成功保存青天葵组培物种质资源.
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自体颅骨超低温下保存再植的临床应用
目的 进一步证实超低温下保存的自体颅骨为颅脑外伤患者去骨瓣减压术后理想的颅骨修复材料.方法 186例颅脑损伤患者行支骨瓣减压术,骨瓣于术后立即保存于超低温冰箱,术后1～6个月行颅骨修复时行再植手术.结果 组织学切片发现所有保存颅骨都保持存活,颅骨形态结构无明显变化,通过颅骨X光照片示再植后颅骨绝大多数呈骨性愈合.结论 一定时间内颅骨在超低温下能有效保持存活,再植后大多数能形成骨性愈合.超低温下保存的自体颅骨是颅脑外伤减压术后理想的颅骨修复材料.
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超低温保存自体颅骨植入术42例分析
目的分析42例超低温保存自体颅骨植入术的优越性.方法对42例患者进行术后观察及随访.结果切口均Ⅰ期愈合,具有生物活性和美观的效果,无排斥反应和免疫反应,不易感染等优点.冷冻1、3、6及12个月后选取的颅骨标本,电镜下组织结构与新鲜颅骨标本组织结构大致相同,未见颅骨细胞破坏.颅骨修补术前移植骨瓣的细菌培养均为阴性.术后随访3～12个月,平均6.5个月,所有病例均无并发症发生.头颅X线及头颅螺旋CT检查,12个月后均达骨性愈合.结论超低温保存自体颅骨再植术是修补颅骨缺损的有效方法之一.
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超低温下保存自体颅骨再植的临床研究
目的为去骨瓣减压术后的颅脑损伤病人寻找一种理想的颅骨修复材料方法骨瓣于术后立即保存于超低温冰箱,待病人能作颅骨修复时行再植手术.结果通过组织学切片发现所有保存颅骨都保持存活,颅骨形态结构无明显变化,再植后颅骨绝大多数呈骨性愈合.结论较长时间内颅骨在超低温下能有效保持存活,再植后大多数能形成骨性愈合.
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野葛种质的玻璃化法超低温保存
野葛的玻璃化法超低温保存技术实验结果表明:采用无菌苗置4℃冰箱低温锻炼5 d;在无菌条件下切取1.5 cm的带芽茎段,转至含5%二甲基亚砜+5%蔗糖的培养基内,置4℃冰箱预培养1 d;用60%的PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖)和100%的PVS2分别在0℃条件下过渡和脱水各30 min,随即投入液氮;保存24 h后,在40℃水浴中快速化冻90 s,用含1.2 mol/L蔗糖的MS培养液洗涤2次,每次停留10 min;转至再生培养基MS+BA 2 mg/L+NAA 1 mg/L暗处培养7 d后再置于光下培养,成活率可达57%-58%.所获再生苗与常温苗形态差异不大.
