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蔗糖预处理去核:一种可靠的无损害小鼠卵母细胞MII期核去除法
小鼠是发育生物学中为有用的实验动物模型,特别是在核移植方面.自从1983年Mc-Grath等[1]报道成功地进行小鼠的核移植以来,已采用小鼠的4-8细胞期的早期胚胎细胞[2]、桑椹胚[3]、内细胞团和滋养层细胞[4]以及体细胞[5]进行了核移植,并获得了后代.作为核移植的受体,可采用去核的合子[1],2-细胞期胚胎[6,7]和去核卵母细胞[8].其中以去核卵母细胞使用为广泛,它可接受各个时期以及不同类型的供体细胞[9].但MII期小鼠卵母细胞的核(纺锤体)不能在相差显微镜下观察到[10].
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乙二醇为主体的玻璃化溶液对小鼠桑椹胚的超低温保存
本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体,添加葡聚糖和海藻配制成的玻璃化溶液(EDT20,EDT30及EDT40),在室温(20 ℃或25 ℃)下对小鼠体内受精的桑椹胚进行玻璃化冷冻保存.毒性试验表明,30%葡聚糖溶液(D),0.5mol/L海藻糖溶液(T),以及两种物质的混合液即DT溶液,对胚胎均无化学毒性作用,乙二醇是化学毒性的主要来源.且随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长,对胚胎的化学毒性也增大.小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻试验中,20 ℃室温下胚胎冷冻效果好于25 ℃,但差异无显著意义(P>0.05).在20℃室温下,胚胎于EDT30中平衡1 min,后直接投入液氮中一步法冷冻后胚胎体外发育率、移植妊娠率和产仔率分别为94.00%、45.00%、38.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05).若将胚胎在10%EG中平衡5 min,再移入EDT30中平衡30 s二步法冷冻效果佳,解冻后囊胚发育率、移植妊娠率和产仔率分别为96.00%、57.00%、52.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05).
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重组人白细胞介素-1β对冷冻后小鼠桑椹胚体内外发育率的影响
本试验探讨了重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)对小鼠桑椹胚玻璃化冷冻后体内外发育的影响.结果表明:当rhIL-1β添加浓度为5、50、500IU/ml时,对解冻后的胚胎经体外培养,发育率(87%~100%)与对照组(94%)相比无显著性差异(P>0.05).而浓度提高到1000IU/ml时,胚胎的发育受到抑制.解冻后胚胎在含有5、50、500IU/ml浓度的rhIL-1β培养液中培养3~4h后移植于假妊娠3d的受体鼠,移植妊娠率(86%、100%、83%)高于对照组(56%),特别是50IU/ml处理组与对照组有极显著差异(P<0.01).而浓度为1000IU/ml处理组的胚胎移植妊娠率(30%)低于对照组.试验证明,添加浓度为5~500IU/mlrhIL-1β的培养液,对解冻后胚胎的体外发育率无影响,而且能够显著提高移植妊娠率.
关键词: 重组人白细胞介素-1β 冷冻 玻璃化 桑椹胚 小鼠 -
整合素在胚胎发育中的表达及其作用
从精、卵结合,受精卵分裂、分化、增殖、迁移,胚层分化、组织、器官的形成,直至胎儿的发育、成熟这一过程中,细胞粘附分子起着重要作用.人胚的桑椹胚期、牛胚8细胞期、鼠胚在脱透明带前即有整合素的表达,使得胚胎能够通过整合素α5β1、αvβ3与配体纤黏连蛋白(FN)、整合素α6β1、αvβ3与配体层粘连蛋白(LN)及整合素αvβ3与配体玻粘连蛋白(VN)等粘附.此外,胚泡的形成、胚层的分化、组织及器官的发育等也离不开相应的整合素分子的参与作用[1].
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胚胎干细胞体外诱导分化为黑色素细胞的研究进展
胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESs)是从早期胚胎内细胞团(Inner cell mass,ICM)或桑椹胚中分离出的高度未分化的全能细胞.ES细胞体外诱导分化为黑色素细胞的过程能更明确皮肤黑色素细胞和视网膜黑色素上皮细胞(Retinal pigreented epithelium,RPE)的基因选择性表达程序.
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超顺磁性氧化铁示踪神经干细胞移植的回顾与现状
干细胞(stem cell,SC)是一类具有自我更新和多潜能分化能力的细胞,来源于胚胎或某些成年的组织器官中,通常讲的干细胞多指胚胎干细胞(embryo stem cells,ESCs),主要来源于桑椹胚的卵裂球、囊胚的内细胞团(inner cell mass,ICM)、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)等.
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玻璃化技术冻存小鼠桑椹胚的研究
研究玻璃化技术对小鼠桑椹胚冻贮的影响.按随机分组原则,分为实验组与对照组,对照组为未冻贮直接培养胚胎移植.实验组随机选用NIH小鼠优质桑椹胚,在25℃室温下,加入自行研制的EDS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中,与加入EFS玻璃化溶液及采用缓冻法的DS液冻存2~个3月后,复温进行比较,观察胚胎形态及胚胎发育情况.
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两种玻璃化液冻存小鼠桑椹胚的研究
目的:研究EDS-40和EFS-40两种玻璃化溶液对小鼠桑椹胚冻存的影响.方法:随机选用NIH小鼠优质桑椹胚,先对两种玻璃化溶液EDS-40(40%乙二醇+18%葡聚糖+0.5 mol蔗糖)和EFS-40(40%乙二醇+18%聚蔗糖+0.5 mol蔗糖)行毒性测试;再在20℃±5℃室温下,将小鼠桑椹胚分别加入到两种玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中,冻存2-3个月.各组均在25℃的水浴中复温,胚胎用解冻液(S-PBS)和培养液反复洗涤后移入含Ham's F12培养液培养48 h,观察胚胎形态及发育.部分胚胎体外培养12-14 h后行胚胎移植,观察妊娠及产仔情况.结果:两种玻璃化溶液的毒性有显著性差异,EDS-40较EFS-40毒性低(X2=6.415,P<0.05),透明带完好率两组间无显著性差异(X2=2.189,P>0.05).胚胎优良率(X2=7.51,P>0.01)和发育率(X2=5.556,P<0.05)EDS-40较EFS-40更好,两组间妊娠率(X2=1.937,P>0.05)及产仔率(X2=0.245,P>0.05)无显著性差异.结论:EDS-40较EFS-40玻璃化溶液毒性低,冻存胚胎效果更好.
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人胚胎干细胞研究进展
人体的发生过程为:精子和卵子受精,形成合子,合子卵裂成卵裂球,于受精后72 h形成桑椹胚,并于受精后5~7 d成为囊胚.囊胚由滋养层和内细胞群组成,滋养层将分化成胎盘及胎儿附属结构;内细胞群则再分化为内胚层、中胚层和外胚层.内胚层分化发育成胎儿的消化道、呼吸道上皮和腺体、肝、胆、胰;中胚层发育分化成胎儿的结缔组织、血液、肌肉、骨骼、泌尿生殖系统;外胚层则分化发育成胎儿的体表结构和神经系统.
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药物抑制非肌肉肌球蛋白Ⅱ对小鼠囊胚发育的影响
目的 探讨非肌肉肌球蛋白Ⅱ(non-muscle myosinⅡ,NMⅡ)ATP酶抑制剂(-)-Blebbistatin对小鼠早期胚胎体外发育过程及其干性相关基因表达的影响.方法 采用SPF级ICR品系小鼠,对10只雌鼠采用孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素进行诱导超数排卵,雌鼠与雄鼠1:1合笼.分别于E 0.5、E 1.5、E 2.5(受孕0.5、1.5、2.5天)收集胚胎.桑椹胚随机分为对照组和实验组,对照组液滴为20μl Ksom培养基,实验组液滴为加入25μM(-)-Blebbistatin的20μl Ksom培养基,体外培养24小时.进行免疫荧光标记,观察小鼠胚胎中微丝骨架的分布情况,以及桑椹胚中nanog、Oct4、sox2、ssea1和estrogen等5个干性相关基因的表达情况.结果 小鼠早期胚胎的发育经历细胞分裂后裂球数目增加、桑椹胚致密化、囊胚期囊胚腔的扩张过程.(-)-Blebbistatin组胚胎则无法形成囊胚腔进入囊胚时期,大多数胚胎裂球松散,整体呈扁塌状.实验共重复3次,实验组胚胎共62枚,均未能形成囊胚;对照组胚胎共60枚,全部形成囊胚.(-)-Blebbistatin抑制NMⅡ后小鼠胚胎干性相关基因nanog,Oct4,sox2,ssea1,estrogen的表达均明显低于对照组(P值均﹤0.05).结论 抑制NMⅡATP酶活性会阻滞小鼠囊胚的体外发育,并降低干性相关基因的表达.
关键词: 非肌肉肌球蛋白Ⅱ blebbistatin 桑椹胚 囊胚腔 细胞骨架