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玻璃化技术冻贮小鼠桑椹胚的研究
胚胎冷冻保存(embryo cryopreservation)在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中显得日益重要,克服冷冻损伤,提高复温后胚胎的存活率,是胚胎冻存面临的主要问题.玻璃化技术(vitrification)是近10多年来发展起来的一项胚胎冻存新技术.本实验采用玻璃化技术,以NIH小鼠的优质桑椹胚进行冻存,与常用的DS液为冷冻保护剂的慢速冷冻法比较,并进行胚胎移植,观察玻璃化技术的冻存效果.
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人类胚胎冻贮的研究进展
人体外受精(in vitro fertilization,IVF)及卵浆内单精子显微注射( intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术的发展,促进了胚胎冻贮的研究.1983年Trounson等[1]首次报道冻贮人类胚胎获得成功,随后,各种冷冻方法及冷冻保护剂被相继运用到胚胎冷冻中,现对胚胎冷冻的原理、冷冻保护剂、冷冻方法、冷冻胚胎的辅助孵化和共培养及冷冻胚胎的移植等综述如下.
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两种玻璃化液冻存小鼠2细胞胚胎效果分析
目的 研究EDS-40及EFS-40玻璃化液对冻贮小鼠2细胞胚胎的效果.方法 (1)EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试.(2)随机将2细胞小鼠胚胎,在25℃室温下分别加入.EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中.(3)各组均冻存3个月,在25℃的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率.结果 两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40组冷冻复温后的存活率分别为77.98%、84.31%;EFS-40、EDS-40组冻胚的卵裂率分别:66.98%、78.43%.结论 EDS-40玻璃化液冻贮小鼠2细胞胚胎可以达到与EFS-40相似的效果.
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EDS-40玻璃化液冻存小鼠囊胚的实验研究
目的 研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠囊胚的效果.方法 (1) EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试.(2)随机将小鼠囊胚,在25°C室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液, 玻璃化后装管并迅速投入液氮中.对照组置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻.(3)各组均冻存3个月,在25°C的水浴中复温后, 用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率.结果 两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40及对照组冷冻复温后的存活率分别为: 82.14%、86.78%、69.6%; EFS-40、EDS-40及对照组冻胚的卵裂率分别为: 66.96%、80.99%、54.4%.结论 EDS-40较EFS-40玻璃化溶液冻存小鼠囊胚效果更好.
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两种玻璃化液冻存小鼠早期囊胚的效果分析
目的 研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠早期囊胚的效果.方法 ①EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试.②随机将小鼠早期囊胚,先10％ EG中预处理2min后分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液管并迅速投入液氮中.③各组均冻存3个月,复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率,囊胚培养12h后行移植,观察妊娠率及产仔率.结果 两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果；EDS-40及EFS-40冷冻复温后的存活率分别为:75.4％、64.2％,差异有统计学意义(P＜0.05)；EDS-40及EFS-40组冻胚移植后的妊娠率及产仔率分别为:53.33％、23.08％,45.45％,18.18％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EDS-40较EFS-40玻璃化溶液冻存小鼠早期囊胚效果更好.
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EDS-40玻璃化液冻存小鼠4细胞胚胎的研究
目的 研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠4细胞胚胎的效果.方法 ①EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试.②随机将4细胞小鼠胚胎,在25℃室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中.对照组置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻.各组均冻存3个月后,在25℃的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率.结果 两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果；EFS-40、EDS-40及对照组冷冻复温后的存活率分别87.8％、93.47％、80.77％；EFS-40、EDS-40及对照组冻胚的卵裂率分别:79.83％、86.53％、69.23％.结论 EDS-40玻璃化液冻贮小鼠4细胞胚胎的效果明显优于EFS-40,是一种理想的玻璃化液.
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两种玻璃化液冻存小鼠桑椹胚的研究
目的:研究EDS-40和EFS-40两种玻璃化溶液对小鼠桑椹胚冻存的影响.方法:随机选用NIH小鼠优质桑椹胚,先对两种玻璃化溶液EDS-40(40%乙二醇+18%葡聚糖+0.5 mol蔗糖)和EFS-40(40%乙二醇+18%聚蔗糖+0.5 mol蔗糖)行毒性测试;再在20℃±5℃室温下,将小鼠桑椹胚分别加入到两种玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中,冻存2-3个月.各组均在25℃的水浴中复温,胚胎用解冻液(S-PBS)和培养液反复洗涤后移入含Ham's F12培养液培养48 h,观察胚胎形态及发育.部分胚胎体外培养12-14 h后行胚胎移植,观察妊娠及产仔情况.结果:两种玻璃化溶液的毒性有显著性差异,EDS-40较EFS-40毒性低(X2=6.415,P＜0.05),透明带完好率两组间无显著性差异(X2=2.189,P＞0.05).胚胎优良率(X2=7.51,P＞0.01)和发育率(X2=5.556,P＜0.05)EDS-40较EFS-40更好,两组间妊娠率(X2=1.937,P＞0.05)及产仔率(X2=0.245,P＞0.05)无显著性差异.结论:EDS-40较EFS-40玻璃化溶液毒性低,冻存胚胎效果更好.
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EDS-40玻璃化液冻贮人2～8细胞胚胎效果的研究
目的:研究EDS-40玻璃化液冻贮人2-8细胞胚胎的效果.方法:将EDS-40与EFS-40玻璃化液对照进行研究,随机选用人2-8细胞胚胎,分别加入EDS-40及EFS-40玻璃化液处理后装管并迅速投入液氮中冻贮,均冻贮2-3个月后解冻复苏,观察胚胎存活率.结果:EDS-40玻璃化液冻贮人胚胎的存活率高于EFS-40玻璃化液(51.6%vs46.6%),但无明显统计学差异(p＞0.05).结论:EDS-40液是一种较好的新玻璃化液,其冻贮人胚胎后胚胎的复苏存活率高于经典的EFS-40液.
