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FAK反义寡聚脱氧核苷酸对FN诱导Hela细胞MMP-2表达的影响
目的:利用反义核酸技术探讨纤黏连蛋白(fibronectin,FN)诱导Hela细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)基因表达的机制.方法:无血清培养Hela细胞,以不同浓度及作用时间的FN诱导Hela细胞中MMPs基因表达,并用反义寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)封闭焦点黏着激酶(focal adhesion kinase,FAK),用酶谱分析方法检测MMPs的活性.结果:FN浓度为0μg/mL时,Hela细胞无MMP-2基因表达;FN浓度为5μ/mL～10μg/mL、作用时间为12 h,MMP-2活性大;当在培养液反义ODN后,MMP-2活性明显降低.结论:MMP-2基因表达与FN的浓度以及作用时间有关;FN可通过其整合素受体的信号转导通路启动Hela细胞中MMP-2基因表达、降解ECM,从而促进肿瘤的浸润和转移.
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黄芪和葛根素对2型糖尿病KKAy小鼠的肾脏保护作用及纤黏连蛋白表达的影响
目的 从肾功能和肾组织形态改变方面观察黄芪注射液联用葛根素注射液对2型糖尿病KKAy小鼠肾脏的保护作用及二者对肾组织纤黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达影响.方法 将雄性KKAy小鼠分为模型组、黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组,同龄雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组.定期监测血糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、血清尿素及尿酸,HE及Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化观察肾组织FN表达情况.结果 从20周龄开始,模型组小鼠空腹血糖、血脂、血清尿素及尿酸较正常组明显升高,治疗组小鼠上述指标较模型组明显改善.HE及Masson染色见模型组肾小球硬化,肾小管上皮细胞胞浆空泡明显,肾间质胶原组织增多,治疗组小鼠以上病变明显减轻；免疫组化显示模型组FN表达较正常组明显升高,治疗组各周龄小鼠肾脏组织FN的表达与模型组比较均减少.结论 黄芪注射液联用葛根素注射液能改善2型糖尿病KKAy小鼠的肾功能,减轻肾脏的病理改变,减少系膜区FN的表达,具有保护肾脏作用.
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单味中药抗肾间质纤维化的研究进展
肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各种慢性肾脏疾病发展到终末期肾衰竭的共同路径,是由多种原因引起的细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)成分在肾间质内过度沉积.其主要病理改变为正常肾单位的丢失,取而代之以大量成纤维细胞及肌成纤维细胞的增生,细胞外基质如胶原纤维和纤黏连蛋白的产生和堆积而导致肾小管间质纤维化,终致肾脏功能丧失.
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整合素在胚胎发育中的表达及其作用
从精、卵结合,受精卵分裂、分化、增殖、迁移,胚层分化、组织、器官的形成,直至胎儿的发育、成熟这一过程中,细胞粘附分子起着重要作用.人胚的桑椹胚期、牛胚8细胞期、鼠胚在脱透明带前即有整合素的表达,使得胚胎能够通过整合素α5β1、αvβ3与配体纤黏连蛋白(FN)、整合素α6β1、αvβ3与配体层粘连蛋白(LN)及整合素αvβ3与配体玻粘连蛋白(VN)等粘附.此外,胚泡的形成、胚层的分化、组织及器官的发育等也离不开相应的整合素分子的参与作用[1].
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锌离子促进人骨髓间充质干细胞增殖并增强其纤黏连蛋白表达的实验研究
目的 探索适宜的锌离子浓度,以促进人间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)在无血清培养基中的黏附和增殖.方法 将人骨髓MSC培养于含胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠的α-MEM中,体系中加入不同浓度硫酸锌.培养72 h后,MTT实验测定490 nm光密度值,观察细胞增殖状态.蛋白印迹杂交比较含锌离子(1×10-5 M)培养体系与未加锌离子培养体系两组细胞纤黏连蛋白含量的差异.结果 MTT结果显示,在一定浓度范围内,锌离子促进人骨髓MSC增殖,作用呈浓度依赖性,适宜浓度为1×10-5 M;蛋白印迹实验表明,在该浓度刺激下细胞培养72 h后,纤黏连蛋白表达量显著升高.结论 锌离子可作为人无血清培养基中的一个成分,可提高入骨髓MSC的贴壁生长能力.
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干细胞因子结合基质蛋白对毛囊无色素黑素细胞黏附与移行的调节作用
目的:研究干细胞因子(stem cell factor,SCF)结合基质蛋白对毛囊无色素黑素细胞(amelanotic melanocytes,AMMC)黏附与移行的调节作用.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的黏附率.48孔细胞趋化小室测定细胞移行.使用罗丹明标记的鬼笔环肽标记肌动蛋白(F-actin),共聚焦显微镜观察SCF对细胞骨架的调节作用.结果:纤黏连蛋白(FN)、板层素(LN)和Ⅳ型胶原(CⅣ)均以浓度依赖方式促进了AMMC的黏附,其中FN和LN对AMMC促黏附作用相近.SCF减少了AMMC对FN和CⅣ的黏附,对FN的作用更为明显,而对LN起促黏附作用.FN和CⅣ对AMMC有趋化作用,LN无明显作用.SCF作用后可明显使FN对AMMC的趋化作用增强.SCF单独对AMMC有趋化作用,结合FN后,作用明显加强.未黏附在FN上的AMMC胞质内无明显应力纤维;黏附在FN上以后,胞质内可见F-actin排列规则并聚集成束,形成束状应力纤维;SCF作用后,胞体内应力纤维更加致密.结论:SCF调节了AMMC在基质蛋白FN、LN和CⅣ上的黏附与移行,尤其是SCF与FN具有协同促移行作用,这可能是白癜风复色过程中AMMC从外毛根鞘向表皮移行机制的一部分.
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纤黏连蛋白对舌鳞癌细胞株基质金属蛋白酶-2表达及侵袭力影响的研究
目的 探讨纤黏连蛋白(fibronectin,FN)对舌鳞癌细胞株基质金属蛋白酶(MMP)-2表达及侵袭力的影响.方法 对体外培养的舌鳞癌细胞用不同浓度的FN作为刺激因素,采用免疫组化检测癌细胞中MMP-2蛋白含量的变化;采用RT-PCR技术检测癌细胞中MMP-2 mRNA含量的变化;采用Western blot技术检测癌细胞上清液中MMP-2蛋白含量的变化;采用Transwell小室观察细胞的侵袭能力.结果 不同浓度的FN(10、5、1μg/ml)作用于人舌鳞癌细胞,MMP-2mRNA、MMP-2蛋白表达和细胞的侵袭能力随FN浓度的降低而降低,差异有显著性(P<0.05),且有剂量依赖关系.结论 FN可以诱导舌鳞癌细胞MMP-2的表达及增强其侵袭力.
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重组FN多肽CH50抑制黑色素瘤B16细胞体内转移的研究
目的 研究重组纤黏连蛋白(FN)多肽CH50对小鼠黑色素瘤B16细胞体内转移的影响,以探讨CH50多肽抑制肿瘤转移的可能分子机制.方法 体外培养黑色素瘤B16细胞,用荧光染料CFSE标记,接种脾脏后24 h取脾、肝、肺做冰冻切片,观察肿瘤细胞在3种组织中的侵袭情况.从脾脏接种B16细胞,建立体内肿瘤转移动物模型,采用基于流体动力学的体内基因转染方法于小鼠体内表达CH50多肽,RT-PCR检测CH50 mRNA在肝组织的表达,Western印迹检测CH50多肽的表达.通过比较原位肿瘤结节及转移结节在数量、大小、分布上的差异及检测原位肿瘤组织中MMP-2、MMP-9表达差异,观察CH50多肽的治疗效果.结果 注射24 h后即可在脾脏形成荧光结节.pCH510质粒通过尾静脉注射后,可在肝组织中检测到CH50 mRNA及CH50多肽的表达.从脾脏接种B16细胞后第14天可在脾脏形成原发肿瘤,至第35天肝脏表面已形成转移瘤结节,成功建立了体内器官间(脾转肝)肿瘤转移动物模型.体内转染表达CH50多肽能抑制肿瘤生长、侵袭和转移,抑制原位肿瘤结节中MMP-2、MMP-9的表达.结论 CH50多肽可以通过对MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用来抑制黑色素瘤B16细胞的成瘤能力和体内侵袭、转移能力.
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纤黏连蛋白重组多肽CH50抑制黑色素瘤MMP-2和MMP-9表达、激活的研究
目的 研究纤黏连蛋白重组多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力的影响,探讨CH50多肽抑制肿瘤生长、侵袭的机制.方法 体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞、小鼠腿部皮下注射B16细胞建立肿瘤动物模型.采用明胶电泳法检测B16细胞和黑色素瘤组织中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达和激活;以CH50多肽体外处理B16细胞或体内表达CH50,观察CH50下调MMPs表达以及对肿瘤细胞侵袭能力的抑制作用.结果 B16细胞在体外培养条件下主要表达MMP-2,而在肿瘤微环境中则同时表达MMP-2和MMP-9.肿瘤组织中MMPs的表达明显高于体外培养B16细胞.CH50多肽对体外培养B16细胞的MMPs表达和激活无明显抑制作用,但处理后的B16细胞进入体内后表达MMPs的能力受到明显抑制.体内转染表达的CH50多肽亦可明显抑制肿瘤表达MMPs、并抑制肿瘤侵袭能力.结论 纤黏连蛋白重组多肽CH50可以抑制肿瘤微环境中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达和激活,从而抑制黑色素瘤生长及侵袭能力.
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近距离小剂量放疗对血管平滑肌细胞纤黏连蛋白及弹性蛋白基因表达的影响
目的:探讨近距离小剂量放疗对血管平滑肌细胞(VSMC)纤维黏连蛋白(FN)和弹性蛋白基因表达的影响及其机制.方法:以7、14、28 Gy 60Co射线辐射培养的大鼠主动脉VSMC弹性蛋白及FN mRNA表达的影响·无辐射为对照组.结果:7 Gy放疗组对VSMC弹性蛋白及FN mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义,而14、28Gy放疗组FN mRNA分别为0.72±0.12和0.49±0.09,与对照组(0.95±0.07)比较差异有统计学意义(P<0.05).14和28 Gy辐射后细胞弹性蛋白mRNA水平分别为1.93±0.25及2.16±0.22,与对照组(1.07±0.11)比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:14、28 Gy60Co射线辐射可以抑制FN nRNA及加强弹性蛋白mRNA的表达.
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细胞外基质黏附分子表达与成釉细胞瘤生物学特性的关系
[目的]探讨细胞外基质黏附分子层粘连蛋白(LN)和纤黏连蛋白(FN)与成釉细胞瘤复发和侵袭的关系.[方法]采用免疫组织化学LABC方法检测28例成釉细胞瘤组织中LN和FN的表达.[结果]在28例成釉细胞瘤中,LN和FN在基底膜的阳性表达率分别为46.4%和39.3%,复发性成釉细胞瘤LN和FN在基底膜的阳性表达率明显低于原发性成釉细胞瘤(P<0.01).LN和FN的表达形式相似,阳性着色部位均位于基底膜及部分肿瘤细胞的胞浆,在基底膜连续着色的部位,靠近基底膜的肿瘤外周细胞胞浆染色较强,中央内层细胞胞浆染色弱或无,而在基底膜着色缺失的部位,靠近基底膜的肿瘤外周细胞胞浆染色弱或缺失.[结论]LN和FN在基底膜表达缺失与成釉细胞瘤的复发密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一.
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肝癌组织中FN和PTEN的表达及其临床意义
目的:探讨抑癌基因纤黏连蛋白(fibronectin,FN)、张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义.方法:收集215例HCC、癌旁组织和19例正常肝组织,用RT-PCR、Western blot、免疫组化SP法检测FN、PTEN mRNA和蛋白表达,分析FN和PTEN表达与HCC临床病理特征的关系.结果:肝癌组织中FN mRNA和蛋白表达均明显高于癌旁组织及正常肝组织(F=142.334,P=0.000);而PTEN低于癌旁组织及正常肝组织,且在癌旁组织中的表达亦明显低于正常肝组织(F--80.861,P=0.000).FN表达阳性患者组较阴性患者组生存时间短;而PTEN表达阳性患者较阴性患者生存时间长,且在1年以后两者生存期有统计学意义(P＜0.05).结论:HCC癌组织中FN、PTEN在肝癌组织中存在异常表达,两者异常表达可能在肝癌的发生发展、侵袭转移中起一定的促进或抑制作用.
关键词： 肝细胞性肝癌 纤黏连蛋白 张力蛋白同源基因蛋白 基因表达 -
抑癌基因FN及PTEN在肝细胞肝癌中的表达及临床意义探讨
目的 探讨纤黏连蛋白(fibronectin,FN)和张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinomas,HCC)组织中的表达及与其临床病理特征间的关系.方法 采用Western blot及免疫组化方法检测83例HCC组织及其癌旁组织、47例肝硬变组织和11例正常肝组织中FN及PTEN的表达情况,并分析FN及PTEN的表达与HCC临床病理特征间的关系.结果 HCC癌组织中FN蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织、正常肝组织及肝硬变组织(P＜0.05),而PTEN蛋白的表达结果与之相反(P＜0.05);癌旁组织中FN蛋白表达阳性率亦高于肝硬变组织及正常肝组织(P＜0.05),PTEN蛋白的表达结果与之相反(P＜0.05).在合并癌栓、伴淋巴结转移、AFP阳性及肿瘤病灶多发的HCC癌组织中FN蛋白表达阳性率较高(P＜0.05),而FN蛋白在HCC癌组织中的表达与患者性别、年龄、HBsAg状态、肿瘤分化程度及大小均无关(P＞0.05).在高-中分化HCC、合并癌栓、AFP阳性、伴淋巴结转移和肿瘤直径≥2 cm的HCC癌组织中PTEN蛋白表达阳性率较低(P＜0.05),而PTEN蛋白在HCC癌组织中的表达与患者性别、年龄、HbsAg状态及肿瘤数目无关(P＞0.05).结论 FN和PTEN在HCC癌组织中异常表达,其在HCC的发生、发展和侵袭转移中可能起一定的促进或抑制作用.两者异常表达可作为HCC恶性程度和侵袭转移的分子生物学标志物.
关键词： 纤黏连蛋白 张力蛋白同源基因蛋白 肝细胞肝癌 基因表达 -
整合素-β1、PKC与胶质瘤细胞骨架结构改变及侵袭性的实验研究
目的:探讨整合素β1(β1-integrin)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)与细胞骨架结构改变的关系及其对人脑胶质瘤细胞的生物学行为的影响和作用机制.方法:以U251胶质母细胞瘤细胞为研究模型,应用抗Inβ1抗体抑制内源性Inβ1作用,应用PKC激活剂PMA、PKC抑制剂Calphostin C干扰PKC的功能,通过细胞黏附实验、迁移实验和体外侵袭实验,检测及PKC对人恶性胶质瘤细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响.通过免疫荧光化学染色结合激光共聚焦显微镜和扫描电镜方法,观察细胞微丝F-actin和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等骨架蛋白数量、分布和细胞表面伪足情况,比较整合素β1、PKC对微丝、GFAP等骨架蛋白的影响.结果:PKC激活剂PMA增加U251MG细胞在FN上的黏附能力(P<0.05),但PKC抑制剂Calphostin C 及抗整合素β1抗体对细胞黏附能力无明显影响.PKC激活剂PMA增加U251MG细胞在FN的运动、迁移能力(P<0.01),PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体减弱U251MG细胞在FN上的运动、迁移能力(P<0.01).PMA可促进U251MG细胞的体外侵袭能力(P<0.01),Calphostin C及抗整合素β1抗体可减弱此作用(P<0.01).U251MG细胞内可见散在的微丝结构,在PKC激活剂PMA 处理的细胞内,难以见到清晰的细胞微丝骨架,并常见大量絮团状的F-actin小体,但对GFAP的表达和结构并无影响.PKC抑制剂Calphostin C使微丝沿细胞膜成簇状排列,而抗整合素β1抗体可使细胞内F-actin微丝形成束状纤维(应力纤维),粗壮而密集,且GFAP表达增强.扫描电镜观察显示,加入PMA后,U251细胞表面的伪足数量明显增加,而PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体处理的细胞内,伪足数量明显减少,甚至消失.结论:整合素β1与FN协同作用,可改变U251MG细胞微丝骨架结构、数量和排列分布,以及细胞表面伪足结构和数量,从而影响肿瘤细胞的运动、迁移及体外侵袭能力,激活PKC信号通路是其作用途径之一.PKC参与了FN介导的细胞黏附作用,但整合素β1受体与FN介导的细胞黏附关系不密切.PKC参与了整合素β1受体与FN相互作用所介导的细胞运动迁移及体外侵袭作用.
