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消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤组织形态学的影响
目的 通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,从组织形态学变化,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制.方法 采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分为模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-氟脲嘧啶(5-Fu)组,每组8只,观察各组荷瘤鼠肿瘤生长情况、抑瘤率、大体及超微结构变化.结果 (1)模型组、消痰散结方低、中、高剂量组动物实验前后体重变化与5-Fu组相比差异有显著统计学意义(P<0.01).(2)消痰散结方低、中、高剂量组抑瘤率分别为36.62%、44.82%、58.11%,呈现出剂量依赖效应,且消痰散结方高剂量组抑瘤率高于5-Fu组(51.82%),但差异无统计学意义.(3)光镜下模型组可见肿瘤细胞增生明显,核大畸形,核仁深染,核质比大,核分裂相多见;消痰散结方组肿瘤细胞数目减少,核质比小,瘤组织可见片状坏死;5-Fu组可见大片状坏死.(4)电镜下模型组细胞增殖、分裂多见;消痰散结方各剂量组凋亡细胞居多,可见细胞核固缩等典型的凋亡形态学变化;5-Fu组可见异染色质边集,并可见细胞坏死.结论 消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤有较好的抑制肿瘤生长作用,可明显地促进胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞增殖,有效抑制胃癌发展.
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消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞E-Cad表达的影响
目的:观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子E-Cad表达的影响,初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节.方法:制备消痰散结药物血清,体外培养MKN-45人胃癌细胞,拟消痰散结方药物血清干预培养细胞,采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中E-Cad的表达.结果:中药组胃癌组织中E-Cad表达水平明显高于空白对照组.结论:消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达,从而影响细胞的粘附性机制有关.
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消痰散结方对胃癌微血管密度及VEGF-A/VEGFR-2的影响
目的：研究消痰散结方对胃癌MVD及VEGF-A/VEGFR-2表达的影响。方法对20例自愿进行单纯中药抗肿瘤治疗的胃癌患者，留取消痰散结方进行干预前及干预6个月后的胃癌（癌组织、癌旁近端、远端）标本。采用免疫组化SP法检测CD34标记微血管密度MVD，Western Blot、RT-PCR检测VEGF-A/VEGFR-2的表达。结果消痰散结方对胃癌组、癌旁近端组、远端组微血管密度MVD和VEGF-A/VEGFR-2有不同程度的下调作用。胃癌组消痰散结方治疗后微血管密度和VEGF-A/VEGFR-2下降幅度大（ P<0.05），有统计学意义；近端组、远端组治疗后微血管密度和VEGF-A/VEGFR-2略有下降，无统计学意义（ P>0.05）。结论消痰散结方治疗胃癌的部分作用机制可能与其抑制VEGF-A/VEGFR-2信号通路降低微血管密度有关。
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消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的影响
目的：探讨消痰散结方对 MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的作用机制。方法采用 MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源，采用OB胶黏合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。20只模型裸鼠分为模型组和中药组。中药组予消痰散结方干预6周后，测瘤质量，计算抑瘤率并检测5个微卫星不稳定位点(D17S250、D2S123、D5S346、Bat-25和Bat-26)。结果中药组的瘤质量明显低于模型组(P＜0.01)，其抑瘤率为40.84%。模型组的肿瘤组织中能扩增到5个微卫星位点，其中微卫星位点D2S123、D5S346出现某些延长和缩短。使用消痰散结方干预6周后，微卫星位点D2S123、D5S346的变异趋于稳定。结论消痰散结方能抑制MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤的微卫星不稳定。
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消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中 血管内皮生长因子D表达的影响
目的 观察消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中血管内皮生长因子D(VEGF-D)表达的影响,探讨消痰散结方防治胃癌淋巴转移的作用机制.方法 30只裸鼠建立MKN-45人胃癌原位移植模型,并随机分为生理盐水组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组及消痰散结方组,每组10只,分别给予生理盐水、5-Fu和消痰散结方干预后,采用免疫组织化学和RT-PCR方法 检测瘤组织VEGF-D蛋白及mRNA的表达.结果 消痰散结方可不同程度下调肿瘤组织中VEGF-D蛋白和mRNA水平的表达,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 调控淋巴管生长因子VEGF-D蛋白和mRNA的表达是消痰散结方防治胃癌淋巴转移的可能机制之一.
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消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞超微结构的影响
目的：观察消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞超微结构的影响,探讨其治疗胃癌的作用机制。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用0B胶黏合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。40只模型裸鼠分为空白对照组、模型组、消痰散结方组、替加氟组,每组10只。消痰散结方组给予消痰散结方灌胃,替加氟组给予替加氟灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,空白对照组正常饮食喂养。干预6周后,测瘤质量,计算抑瘤率。透射电镜观察药物作用后移植瘤细胞超微结构。结果消痰散结方组瘤质量明显低于空白对照组及模型组(P＜0.05,P＜0.01),其抑瘤率为46.2%；电镜观察可见胃癌细胞出现典型细胞凋亡的形态学改变。结论消痰散结方具有诱导MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞凋亡的作用,提示诱导细胞凋亡是消痰散结方治疗胃癌的可能作用机制之一。
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消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45皮下移植瘤模型血清蛋白质组表达的影响
目的 观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45皮下移植瘤模型血清蛋白质组表达的影响.方法 30只BALB/c-nu/nu裸鼠随机分为正常组、模型组、干预组,采用瘤块接种方法造模.正常组自由饮食,模型组、干预组分别给予生理盐水、消痰散结方灌胃.运用蛋白质组学的双向凝胶电泳技术,观察3组之间的血清蛋白质组表达差异,筛选出与消痰散结方作用相关的差异表达蛋白质,并对其进行质谱鉴定,确认差异表达蛋白质的身份.结果 去除血清中高丰度蛋白质后获得分辨率高、重复性稳定性好的血清2-DE图谱.与正常组比较,模型组中找到25个差异表达蛋白点,其中12个表达上调,13个表达下调.与模型组比较,干预组中找到19个差异表达蛋白点,其中14个表达上调,5个表达下调.3组间比较共找到差异表达蛋白点9个,与正常组比较,在模型组中表达上调、在干预组表达回调至正常组水平的3个,终鉴定为结合珠蛋白、泛素蛋白连接酶、组蛋白甲基转移酶;与正常组比较,在模型组中表达下调、在干预组表达回复至正常组水平的有6个,其中3个鉴定为载脂蛋白A1、过氧化物酶1、超氧化物歧化酶.结论 消痰散结方对载脂蛋白A1、过氧化物酶1等功能蛋白表达的综合性调节可能是其发挥抗胃癌作用的重要机制.
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温中消痰方对寒邪干预S180荷瘤鼠相关因素的影响
目的 探讨温中消痰方对寒邪干预S180荷瘤小鼠的影响及对部分相关性指标进行研究.方法 用温中消痰方治疗冰水干预的S180荷瘤小鼠,同时用消痰散结方组及化疗组作为对照,观察温中消痰方治疗后小鼠形态学,肛温的变化及各组肿瘤的生长速度、体积的变化.并用放免法检测小鼠血浆中血栓素B2(TXB2)的表达情况.结果 温中消痰方组动物畏寒的形态学表现较其它组出现晚、历时短,肛温下降幅度较小;温中消痰方组、消痰散结方组、化疗组(FT-207)的抑瘤率分别为86.69%、75.29%、87.55%;温中消痰方组TXB2水平与消痰散结方组、化疗组相近,与寒模组比较差异显著(P＜0.01),与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 温中消痰方对寒邪干预S180荷瘤小鼠肿瘤的生长有抑制作用,并下调TXB2的表达,其抑瘤率和FT-207、消痰散结方相近.
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消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态的影响
目的 探讨消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响及其机制.方法 30只裸鼠右前肢腋部皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型.造模后的荷瘤鼠随机分为模型组(10只)、消痰散结组(10只)和多西环素组(10只),分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠.剥取肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率;计数肿瘤中VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白的表达.结果 消痰散结组和多西环素组裸鼠移植瘤质量明显低于模型组(P<0.01).消痰散结组和多西环素组VM个数分别为(24.50±3.03)和(14.70±1.34),与模型组(33.10±2.64)比较,差异有统计学意义(P<0.01).消痰散结组和多西环素组MMP-2和MMP-9蛋白的阳性表达低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 消痰散结方可抑制裸鼠移植瘤VM的形成,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关.
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中药消痰散结方联合NP方案治疗中晚期非小细胞肺癌33例
肺癌是临床常见恶性肿瘤之一,近年来,肺癌的发病率逐渐升高,已成为严重威胁人类生命健康的主要因素.肺癌以非小细胞肺癌占多数,由于发现时多已发生转移,临床常采用化疗为主要治疗手段.我们多年来应用中药消痰散结方联合NP方案化疗治疗晚期非小细胞肺癌取得了满意的疗效,现报告如下.
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消痰散结方对胃癌组织中癌基因ras及cerbB2在mRNA水平表达的影响
目的:探讨消痰散结方对胃癌组织中ras及cerbB2癌基因在mRNA水平表达的影响.方法:用40只BALB/c无胸腺裸鼠,建立人胃腺癌SGC-7901原位移植模型,建模次日随机分为对照组、化疗组、中药组、中药加化疗组,分别给予生理盐水、5-氟脲嘧啶(5-Fu)、消痰散结方及5-Fu加消痰散结方,共给药3周,12周左右拉颈处死.应用RT-PCR法检测各组胃癌组织中ras及cerbB2表达情况.结果:各组移植瘤组织ras/β-肌动蛋白(β-actin)值及cerbB2/β-actin值与对照组相比,均有显著性差异(P<0.01),且中药组作用优于化疗组,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:消痰散结方对SGC-7901胃癌组织中ras及cerbB2癌基因在mRNA水平表达有明显下调作用,这可能是消痰散结方抑瘤抗转移作用机理的一个重要环节.
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肿瘤自分泌相关因子TGFβRⅡ对MKN-45人胃癌调控作用的体外及体内研究
目的 从肿瘤自分泌相关因子TGFβRⅡ探讨消痰散结方对MKN-45人胃癌调控作用.方法 采用体外细胞培养和体内动物实验的方法,Weston blot法检测不同组别TGFβRⅡ的蛋白含量;real-time PCR法检测不同组别TGFβRⅡ的基因表达.结果 体外实验中TGFβRⅡ的蛋白含量分别为空白对照组0.342±0.032、空白药物血清组0.359±0.043、消痰散结方血清组0.825±0.143、替加氟血清组0.969±0.077,四组间比较差异有统计学意义(P<0.01),消痰散结方组与空白对照组、空白药物血清组比较差异均有统计学意义(P<0.01);real-time PCR法检测体外实验中不同组别TGFβRⅡ的基因表达:空白药物血清组6.17±0.77、消痰散结方血清组6.64±0.97、替加氟血清组9.13±2.12,虽组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但替加氟组与消痰散结方组均有上调其表达的趋势,替加氟的上调趋势更明显.体内实验中各组TGFβRⅡ的蛋白含量分别为空白对照组0.597±0.04、生理盐水组0.692±0.091、消痰散结方组0.639±0.099、替加氟化疗组0.465±0.064,四组间表达差异有统计学意义(P=0.035),进一步两两比较,替加氟组与生理盐水比较差异有统计学意义(P=0.042).表明替加氟组不能上调体内实验瘤中TGFβRⅡ的蛋白表达,消痰散结方组与空白对照组比较虽然差异未见统计学意义,但有上调趋势.体内实验各组TGFβRⅡ的基因表达分别为空白模型组1.56±0.39、消痰散结方组3.30±1.17、替加氟化疗组6.44±3.50,不同组别TGFβRⅡ的基因表达差异有统计学意义(P<0.01),替加氟组表达高于模型组及消痰散结方组(P<0.05),消痰散结方组与模型组虽然表达差异无统计学意义,但有明显的上调趋势.结论 消痰散结方对TGFβRⅡ蛋白和基因表达均有不同程度的上调作用,表明消痰散结方的治疗胃癌的作用可能是通过上调胃癌自分泌因子TGFβRⅡ发挥作用.
关键词： 胃肿瘤 自分泌因子TGFβRⅡ 消痰散结方 -
消痰散结方对裸鼠人胃癌血管生成的影响
目的:探讨中药消痰散结方对实验性裸鼠人胃癌血管生成的影响.方法:建立裸鼠人胃癌原位种植模型,将动物随机分为空白对照组、中药组和联合组(n=10),中药组予消痰散结方0.2 mL灌胃,联合组同时予5-FU溶液0.2 mL腹腔注射.第11周结束实验,动物行超声探查,利用TOMTECimaging system对超声图像进行三维重建,计算肿瘤组织的三维超声血管容积指数(Ⅵ),处死动物,取瘤组织,Envision法免疫组化染色CD34,计数微血管密度(MVD).结果:与空白对照组(2.14±0.43 g)相比,中药组(1.12±0.38 g,P＜0.05)和联合组(0.77±0.26 g,)瘤质量明显减低(P＜0.05);联合组比中药组瘤质量明显减低(P＜0.05).中药组和联合组的血流较空白对照组明显减少.中药组和联合组Ⅵ和MVD与空白对照组相比,明显减低(Ⅵ:18.87%±3.74%,14.97%±3.61%vs 31.00%±4.06%,P＜0.05;MVD:27.3±8.8,25.8±8.6 vs 49.3±15.3,P＜0.05).结论:消痰散结方可以明显抑制裸鼠人胃癌原位种植瘤的血管生成.
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中药消痰散结方对人胃癌裸鼠原位移植瘤VEGF,KDRmRNA表达的影响
目的:研究消痰散结方(以下简称消方)对裸鼠人胃癌原位种植瘤生长转移的抑制作用及其对(vascular endothelialgrowth factor,VEGF),(kinase insert domain receptor,KDR)表达的影响.方法:建立人胃癌裸鼠原位种植高转移模型,实验动物随机分为4组(荷瘤对照组、消痰散结方组、5-FU化疗组、联合组),于接种第12 wk处死动物,取肝脏及淋巴结,作组织病理学检查,观察消方对肿瘤转移的抑制率,同时留取部分标本运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对VEGF、KDRmRNA作定量检测.结果:所有荷瘤鼠胃壁均有肿瘤生长,且有不同程度的远处转移.RT-PCR检测发现,消方组、化疗组、联合组癌组织内VEGF、KDRmRNA含量均显著低于荷瘤对照组(P＜0.01),且消方组中癌组织VEGF、KDRmRNA表达量较化疗组、联合组亦明显降低(P＜0.01),具有统计学意义.结论:消方具有一定抑制胃癌转移的作用.其作用机制之一可能是下调了肿瘤组织VEGF、KDRmRNA表达水平而起到抗胃癌浸润转移的作用.
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中药消痰散结方抑制裸鼠原位移植人胃癌SGC-7901的生长转移
目的:研究中药消痰散结方对裸鼠原位移植人胃癌生长转移的抑制作用.方法:建立裸鼠原位移植人胃癌模型;实验分组:对照组、中药组、化疗组、联合组各10只;观察和比较各组肿瘤抑制率和肿瘤转移情况.用免疫组化法定性生分析和比较肿瘤转移相关指标P21 ras,P185,VEGF蛋白,KDR蛋白的表达,用RT-PCR法定量分析和比较各组ras,cerbB 2,VEGF,KDR的表达.结果:中药组、化疗组和联合组的抑瘤率分别为72.0%、51.3%、70.1%;在远处淋巴结转移率和脏器转移率方面,与对照组相比,中药组、化疗组和联合组均减少了转移的发生,有显著性生差异(P＜0.05).中药组、化疗组、联合组在不同程度上下调了ras,cerbB2,VEGF和KDR在蛋白水平和mRNA水平的表达.结论:消痰散结方具有抑制裸鼠原位移植人胃癌生长和转移的作用,其作用机制可能与下调了肿瘤转移相关基因ras,cerbB2,VEGF,KDR的表达有关.
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消痰散结方对结肠癌干细胞样细胞凋亡的影响及相关机制研究
目的 探讨消痰散结方对结肠癌干细胞样细胞(CCSCs)凋亡的影响及相关机制.方法 采用无血清培养法由HCT116结肠癌细胞诱导培养CCSCs,通过检测CCSCs标志物CD44进行鉴定.消痰散结方浸膏冻干粉末溶解在细胞培养液中,制备消痰散结方保存液.以不同浓度消痰散结方(0.125、0.25、0.5、1.0 mg/mL)作用CCSCs 72 h,Annexin-V/PI双染色结合流式细胞术检测各浓度消痰散结方对CCSCs的影响.Western blot检测药物干预后Bax、Bcl-2蛋白表达变化.结果 HCT116细胞在无血清培养下成球生长,CCSCs中CD44+胞占(49.69±1.89)％.消痰散结方可诱导CCSCs,其凋亡率与对照组(0 m/mL)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其凋亡效应呈浓度依赖性.消痰散结方作用后,Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,以0.5、1.0 mg/mL两组浓度效应更为显著.结论 从HCT116结肠癌细胞成功诱导富集CCSCs,消痰散结方能剂量依赖性地诱导CC-SCs,其机制可能与促凋亡蛋白Bax表达增强、抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱相关.
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消痰散结方对裸鼠胃肿瘤中ICAM-1表达的影响
观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子ICAM-1表达的影响.建立裸鼠MKN45人胃癌模型,采用免疫组化SP法检测胃癌组织中ICAM-1的表达.结果,中药组胃癌组织中ICAM-1表达水平明显低于空白对照组.说明,消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能与影响粘附分子的表达,进而影响细胞的粘附性机制有关.
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中医药治疗胃癌实验研究简况
胃癌发病机制仍不明确,中医药对胃癌具有较好的防治作用.刺五加皂苷、南蛇藤提取物、左金丸醇提物,三物白散,菝葜、红藤、藤梨根三药联合可有效促进胃黏膜细胞凋亡减少、增殖增加;吴茱萸碱、蛇六谷提取物、通莲汤、人参皂苷、重楼总皂苷、蟾毒灵可有效调控信号传导通路;半夏泻心汤、消痰散结方有改善细胞微环境功能;君子扶正汤和环磷酰胺联合应用及灵芝合剂、健脾复方、紫草素具有调节免疫功能作用;粉防己碱、贝母素乙、柳茶水提物、温郁金正丁醇提取物等可以逆转胃癌多耐药.中医药治疗胃癌实验研究多为套用现代医学模式、低水平重复、多向性、分散研究,创新不足;中西医结合研究较少,中医药与现代研究关联性不足,相关因子及信号通路选择与中医证候缺乏关联性,未突出中医药理论指导与特色.中医药防治胃癌机制研究前景广阔.
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消痰散结方对原位移植胃癌裸鼠生长及血清IL-8、TGF-β的影响
目的:研究消痰散结方对原位移植胃癌裸鼠生长及血清IL-8、TGF-β的影响,探讨该方抑制胃癌转移机制.方法:建立裸鼠原位移植SGC7901胃癌模型,随机分为模型组、生理盐水组、消痰散结方组、5-氟脲嘧啶组.另取10只正常组做空白对照.观察裸鼠生长情况,计算抑瘤率;应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清(IL-8、TGF-β)的浓度.结果:消痰散结方组和化疗组抑瘤率分别为41.07％和60.71％,与模型组及生理盐水组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组较其他组血清IL-8、TGF-β浓度显著上升,中药组与模型组相比,显著下调血清IL-8、TGF-β的浓度,差异均有统计学意义(P＜0.05),与化疗组相当,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:消痰散结方有较好抑瘤效果,能够下调原位移植胃癌裸鼠血清IL-8、TGF-β浓度,这可能是该方抑制胃癌转移的机制之一.
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清痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中MT1-MMP表达的影响
目的:观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞MT1-MMP表达的影响,初步探讨消痰散结方抑制胃癌浸润转移的作用机理.方法:建立裸鼠MKN-45人胃癌模型,采用免疫组化S-P法检测胃癌组织中MT1-MMP的表达.结果:中药组胃癌组织中MT1-MMP表达水平明显低于生理盐水组和空白对照组.结论:消痰散结方抑制胃癌细胞浸润转移的作用机理可能与其影响膜型金属蛋白酶的表达,减少对细胞外基质和基底膜的降解有关.
