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蟛蜞菊内酯抑制K562/A02细胞P-糖蛋白的表达
目的 探讨蟛蜞菊内酯对白血病耐药株K562/A02细胞P-糖蛋白表达的影响.方法 以白血病耐药株K562/A02为研究对象,分别加入0.2、2.0、20.0 μmol/L蟛蜞菊内酯,预处理24 h后收集细胞,四甲基偶氮唑盐比色法测定经蟛蜞菊内酯处理后K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性,蛋白质印迹法分析经蟛蜞菊内酯处理后白血病耐药株K562/A02细胞P-糖蛋白表达的变化.结果 0.2、2.0、20.0 μmol/L浓度的蟛蜞菊内酯对K562/A02的耐药性具有明显逆转作用,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率为23.5％、47.1％和67.7％;不同浓度蟛蜞菊内酯对P-糖蛋白的表达于用药后分别下降25.4％、46％、55.6％.结论 蟛蜞菊内酯具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能与下调K562/A02细胞P-糖蛋白的表达有关.
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正交试验优选香草固齿酊的提取工艺
目的:优选香草固齿酊的提取工艺.方法:采用乙醇渗漉法,以提取液中α-香附酮、蟛蜞菊内酯的含量及干膏得率为指标,采用HPLC测定含量,烘干法测定浸膏得率,正交试验优选提取工艺条件,对乙醇体积分数、浸渍时间等因素进行考察.结果:佳提取工艺为60％乙醇浸渍渗漉24 h,流速5 mL· min-1.结论:该优选工艺稳定可行,适用于工业化生产.
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基于5种特征性成分综合评价二至丸的质量
目的:建立二至丸中5种特征性成分特女贞苷、红景天苷、酪醇、木犀草素、蟛蜞菊内酯同时检测的含量测定方法, 并据此评价所收集的11批二至丸样品的质量.方法:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm), 流动相乙腈 (A) -0.2％甲酸水溶液 (B) 梯度洗脱 (015 min, 10％30％A;1525 min, 30％33％A;2530 min, 33％A) .流速1 mL·min-1, 检测波长225 nm和349 nm, 柱温30℃.结果:5个成分的分离度良好, 红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草素和蟛蜞菊内酯的线性范围依次为202.5512 153, 84.555 073, 244.3014 657.72, 2.56153.72, 2.32139.2 ng.加样回收率平均值处于95.61％103.47％, RSD均＜2.0％.结论:建立的含量测定方法简便、准确, 重复性好, 可用于市售二至丸样品的含量测定和质量控制.11批样品中5个特征性成分含量差异较大, 特女贞苷含量差异＞60倍, 低值0.15 mg·g-1, 高值10.22 mg·g-1, 其原因可能与原料质量和执行标准等因素有一定关系.
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高效液相色谱法同时测定二至丸中4种成分的含量
目的:建立同时测定二至丸中女贞苷、特女贞苷、蟛蜞菊内酯、齐墩果酸含量的高效液相色谱法.方法:采用DIKMA C18色谱柱(4.6 mm× 200 mm,5μm),流动相乙腈-磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,进样体积20 μL,柱温30℃,检测波长215 nm.结果:女贞苷、特女贞苷、蟛蜞菊内酯、齐墩果酸的质量浓度与峰面积分别在2.008～80.32(r=0.999 6),5.872 ～234.88(r =0.999 7),0.9 ～36(r=0.9999),13.24～529.6 mg·L-1(r =0.999 6)呈良好线性；平均回收率分别为99.25％,98.70％,96.23％,101.5％,RSD均小于3％.结论:该方法简便、快速、准确,可作为二至丸质量控制的一个有效方法.
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二至丸处方提取物化学成分的研究
目的 对二至丸处方提取物的醋酸乙酯萃取部位和水饱和正丁醇萃取部位进行化学成分研究.方法 采用柱色谱法进行分离和纯化,经过波谱分析进行结构鉴定.结果 从二至丸处方提取物的醋酸乙酯和水饱和正丁醉部位共分离得到11个单体化合物,分别鉴定为齐墩果酸(1)、熊果酸(2)、木犀草素(3)、芹菜素(4),槲皮素(5)、特女贞苷(6)、蟛蜞菊内酯(7)、去甲蟛蜞菊内酯(8)、甘露醇(9)、女贞苷G13(10)和木犀榄苷二甲酯(oleoside dimethyl ester,11).结论 化合物1～11均为首次从该复方中得到.
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基于UPLC-Q/TOF-MS的中药水蜜丸制剂二至丸多成分稳定性研究
目的 在遵循人用药品注册技术要求国际协调会(International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use,ICH)制剂稳定性指导原则的指导下,在采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)联用技术对中药传统水蜜丸制剂二至丸进行多成分定性定量研究的基础上,进行二至丸长期稳定性和加速稳定性研究,并考察了制剂影响因素对制剂稳定性的影响.方法 采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min,采用电喷雾电离源(ESI),正、负离子模式扫描.在遵循ICH制剂稳定性指导原则的指导下,进行了18个月的长期稳定性试验[温度(25±2)℃,相对湿度(RH)(60±5)％],加速稳定性试验[温度(40±2)℃,RH (75±5)％]和制剂影响因素试验(包装材料类型和密封条件).结果 采用以上方法共鉴定出二至丸中20个化学成分(红景天苷、蟛蜞菊内酯、10-羟基木犀榄苷二甲酯、木犀榄苷-11甲酯、马钱苷酸、松果菊苷、女贞苦苷、橄榄苦苷酸、毛蕊花苷/异毛蕊花苷、女贞苷、特女贞苷、ligustroflavone、特女贞苷异构体、阿富汗丁香苷F、异女贞苷、女贞酸、橄榄苦苷、女贞苷-G13、青藤碱、3-O-顺式-对-香豆酰委陵菜酸),并对其进行定量及归一化半定量研究.在长期稳定性研究中,20个成分均保持稳定;然而在加速稳定性试验条件下,11种成分(10-羟基木犀榄苷二甲酯、松果菊苷、女贞苦苷、橄榄苦苷酸、毛蕊花苷、女贞苷、特女贞苷、ligustroflavone、女贞酸、女贞苷-G13、青藤碱)的量明显下降.制剂影响因素试验结果显示采用钠钙玻璃包装材料替代现有市售聚酯包装,在密封或敞口条件下,制剂中各成分稳定性均显著提高.在采用相同包材时密封条件对制剂稳定性也存在显著性影响.结论 通过较为系统的中药传统口服制剂类型水蜜丸的制剂稳定性研究,为中药制剂质量控制水平和临床用药安全提供技术支持.
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HPLC法同时测定天麻首乌片中12种活性成分
目的 建立HPLC梯度洗脱法同时测定天麻首乌片(TSP)中12种活性成分芍药苷、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、天麻素、阿魏酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、丹参酮ⅡA、特女贞苷、欧前胡素、芦丁、蟛蜞菊内酯和大黄素的量.方法 采用HPLC法,Hypersil GOLD C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,体积流量1.0 mL/min,梯度洗脱;进样量为10μL.结果 12种活性成分芍药苷、二苯乙烯苷、天麻素、阿魏酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、丹参酮ⅡA、特女贞苷、欧前胡素、芦丁、蟛蜞菊内酯和大黄素分别在3.12～31.20μg/mL (r=0.999 5)、4.98～49.80 μg/mL (r=0.999 4)、1.05～10.50 μg/mL (r=0.999 5)、0.99～9.90μg/mL (r=0.999 2)、1.11～11.10 μg/mL (r=0.999 2)、3.24～32.40 μg/mL (r=0.999 2)、3.63～36.30 μg/mL (r=0.999 2)、1.13～11.30 μg/mL (r=0.999 3)、1.9～19.0 μg/mL (r=0.999 5)、1.55～15.50μg/mL (r=0.999 5)、1.48～14.80 μg/mL (r=0.999 5)、102.8～1028.0 μg/mL (r=0.999 9)质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于2.0％;平均加样回收率和相应的RSD分别为99.88％、1.55％,101.25％、0.98％,99.67％、1.29％,102.04％、1.17％,101.17％、1.67％,98.27％、1.51％,100.28％、1.20％,99.11％、0.95％,98.49％、1.67％,101.57％、0.94％,102.37％、0.58％,97.89％、0.69％.12批次供试品中12种指标成分质量分数分别为1.241～1.261、2.116～2.133、0.540～0.558、0.077～0.099、0.089～0.110、1.111～1.134、0.158～0.183、1.375～1.399、0.342～0.372、0.542～0.571、0.648～0.672、45.05～45.93 mg/g.结论 建立的HPLC梯度洗脱法可同时测定TSP中12种活性成分,该方法操作简便、快速、准确,可作为TSP全面可靠的质量控制方法.
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HPLC法测定肾炎灵胶囊中柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯
目的 建立HPLC波长切换法同时测定肾炎灵胶囊中柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯.方法 采用高效液相色谱法,Agilent Extend-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇–乙腈(1:1)与0.5%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长:330 nm(0~14 min检测远柳穿鱼叶苷)、203 nm(14~20 min检测地榆皂苷-Ⅰ)、224 nm(20~29 min检测女贞苷和特女贞苷)、351 nm(29~45 min检测去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯);体积流量:0.8 mL/min;柱温:30 ℃;进样量为10 μL.结果 柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯分别在2.97~59.40、19.59~391.80、1.78~35.60、4.96~99.20、1.13~22.60、3.29~65.80 μg/mL线性关系良好;平均回收率分别为97.97%、99.78%、96.98%、98.52%、98.10%、99.10%,RSD值分别为0.76%、1.01%、0.66%、1.22%、0.95%、1.56%.结论 该方法简便,分析速度快,为完善肾炎灵胶囊的质量标准提供参考.
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003鳢肠属植物的化学成分和药理作用
鳢肠属植物含有三萜皂苷、芳杂环类、甾体生物碱等化学成分,具有保肝、免疫调节、抗炎、抗蛇毒和抗诱变等生物活性.综述了该属的鳢肠和白鳢肠的化学成分、药理作用等研究进展.
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HPLC波长切换联合梯度洗脱法测定补肾益精丸中的异去甲基蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、金丝桃苷、紫云英苷和异鼠李素
目的:建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法测定补肾益精丸中的异去甲基蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、金丝桃苷、紫云英苷和异鼠李素.方法:采用kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈(A)和0.4％磷酸溶液(B),进行梯度洗脱;流速:0.9 mL/min;柱温:30℃;进样量为20 μL.异去甲基蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯的检测波长为351 nm,金丝桃苷、紫云英苷和异鼠李素的检测波长为360 nm.结果:异去甲基蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、金丝桃苷、紫云英苷和异鼠李素分别在5.15～103.00 μg/mL(r =0.999 2)、4.58～91.60 g/mL(r=0.999 8)、9.95 ～ 199.00 μg/mL(r =0.999 6)、8.27～165.40μg/mL(r=0.999 9)、4.55～91.00 μg/mL(r=0.9994)范围内与峰面积具有较好的线性关系,平均加样回收率和相应的RSD(n =6)分别为97.59％(1.06％)、99.33％(1.17％)、98.18％ (0.92％)、98.95％ (1.11％)、97.05％ (0.77％).结论:本文建立的HPLC波长切换梯度洗脱法同时测定补肾益精丸中的5个成分:异去甲基蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、金丝桃苷、紫云英苷和异鼠李素,方法操作简便、快速,可作为补肾益精丸全面可靠的质量控制方法.
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基于多指标加权评分的中药复方二至丸提取工艺研究
目的 优选二至丸的佳提取工艺.方法 采用L9(34)正交试验设计法,考察药材粒度、溶媒用量、提取时间等因素的影响,以特女贞苷、蟛蜞菊内酯、齐墩果酸含量为指标,加权评分,优选佳提取工艺条件.结果 正交试验结果 表明,把药材粉碎成粗粉,用10倍量溶剂回流提取,每次2h为佳工艺.结论 优选出的提取工艺方法 可行、工艺稳定、重复性好.
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蟛蜞菊内酯的电喷雾离子阱质谱分析
目的:应用电喷雾离子阱质谱(ESI-MS”)技术对蟛蜞菊内酯进行质谱裂解分析,通过主要特征碎片离子研究其裂解规律.方法:样品溶液进样后,采用ESI-MS1-3碰撞裂解方式,解析蟛蜞菊内酯的特征碎片离子.结果:蟛蜞菊内酯在正离子模式下,采用ESI-MS1获得准分子离子峰[M+H]-m/z 315;采用ESI-MS2获得了离子碎片m/z 297、m/z 287；采用ESI-MS3获得m/z 259、m/z 231等离子碎片.负离子模式下采用ESI MS1获得[M—H]-m/z 313,采用ESI-MS2获得了离子碎片m/z 298;采用ESI-MS3获得m/ z 270、m/z 254等离子碎片.结论:蟛蜞菊内酯在软电离模式下,正负离子模式对质谱裂解方式产生差异,其中主要产生的正负离子碎片分别为m/z 287和m/z 298.本研究为进一步研究蟛蜞菊内酯化合物的体内代谢过程与结构修饰提供实验依据.
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墨旱莲活性成分对刀豆蛋白A诱导的小鼠肝损伤的作用
目的 研究中药墨旱莲活性成分对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝损伤的作用.方法 以尾静脉注射ConA(15 mg/kg)建立小鼠肝损伤模型,检测墨早莲提取物对正常小鼠和肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)的影响,观察肝脏的组织学改变.生物活性跟踪分离得到单体化合物,根据IR谱、~(13)C-NMR谱、~1H-NMR谱、~1H-~(13)C HMBC谱和~1H-~(13)C HMQC谱鉴定其结构.结果 墨旱莲提取物能降低肝损伤小鼠的血清ALT水平,对抗ConA诱导的小鼠肝细胞凋亡.体外筛选的活性化合物经波谱鉴定为蟛蜞菊内酯,属香豆素类化合物,能选择性抑制ConA诱导的T细胞活化,10μg/mL的蟛蜞菊内酯可完全拈抗ConA的诱导作用.结论 中药墨旱莲具有抗ConA诱导的小鼠肝损伤作用,活性成分蟛蜞菊内酯具有较强的抗炎和抗凋亡作用,是一个潜在的抗炎保肝新药的先导化合物.
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蟛蜞菊内酯大鼠血浆蛋白结合率的测定
目的：测定蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白的结合率。方法：采用平衡透析法模拟蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白的结合过程，建立HPLC-UV法测定蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白的结合率。结果：在透析24 h后，蟛蜞菊内酯在低（0.62μg·mL-1）、中（3.10μg·mL-1）、高（9.92μg·mL-1）3个质量浓度下与大鼠血浆蛋白的结合率分别为（87.9±2.1）%、（84.7±2.5）%、（83.8±1.9）%。结论：蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白有较强的结合作用。
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蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响
目的:研究蟛蜞菊内酯对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用.方法:ELISA方法检测0.2、2、20 μmol/L不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10 μg/mL LPS 诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E2(PGE2)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2酶蛋白表达的影响.结果:LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达.PGE2可以被LPS诱导增加,与空白组比有显著差异.蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE2、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性.结论:蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE2的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关.
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高效液相色谱波长切换法同时测定甲亢灵片中4种成分的含量
目的 建立高效液相色谱(HPLC)波长切换法,同时测定甲亢灵片中去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、乌索酸和迷迭香酸含量.方法 采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇(A)-0.5%冰醋酸溶液(B),梯度洗脱;柱温为30 ℃;进样量为10 μL;流速为1.0 mL·min-1;去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯检测波长为λ1=351 nm,乌索酸检测波长为λ2=210 nm,迷迭香酸检测波长为λ3=330 nm.结果 去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、乌索酸和迷迭香酸在35 min内得到较好的分离,在给定浓度范围内与峰面积呈现良好线性,分别为5.90~118.00 mg·L-1(r=0.999 5)、5.37~107.40 mg·L-1(r=0.999 7)、5.04~100.80 mg·L-1(r=0.999 6)、7.65~153.00 mg·L-1(r=0.999 3);平均加样回收率(n=6)和RSD值分别为98.6%(1.39%)、96.8%(0.83%)、99.2%(1.02%)、97.4%(0.85%).结论 建立的HPLC方法可同时测定甲亢灵片中去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、乌索酸和迷迭香酸含量,方法简便、重现性好、灵敏度高,可用于甲亢灵片中去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯、乌索酸和迷迭香酸的含量测定.
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蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-6、TNF-α及NF-κB的影响
目的 观察蟛蜞菊内酯对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞IL-6、TNF-α及NF-κB的作用.方法 酶联免疫吸附试验( ELISA)检测0.2,2和20 μ.mol·L-1低、中、高3浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10μg·ml-1LPS诱导RAW264.7细胞产生白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导NF-κB细胞核因子-κB( NF-κB) p65蛋白表达的影响.结果 LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的IL-6、TNF-α产生,蟛蜞菊内酯低、中、高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的的IL-6、TNF-α产生,呈现剂量依赖性.小鼠RAW264.7细胞株产生的NF-κB p65表达可以被LPS诱导增加,与空白组比有显著差异.蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的NF-κBp65表达.结论 蟛蜞菊内酯可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进而减少炎性细胞因子IL-6、TNF-oα的生成有关.
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蟛蜞菊内酯抗大鼠肝缺血再灌注损伤作用的研究
目的 观察蟛蜞菊内酯预处理对肝缺血再灌注损伤的保护作用及其机理.方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)和蟛蜞菊内酯高、低剂量预处理组.动物术前分别腹腔内注射蟛蜞菊内酯10,20 mg·Kg-1,1次/d,连续3d,再进行肝缺血1h,再灌注4h,实验结束后检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量及肝组织中脂质过氧化反应产物丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,并通过光镜观察肝组织结构的形态学改变.结果 不同剂量蟛蜞菊内酯处理组血清ATL、AST及肝组织中MDA含量明显低于肝缺血再灌注组(P＜0.01),肝组织中SOD及GSH-Px活性含量则高于缺血再灌注组(P＜0.01),肝细胞形态学异常改变较模型组也明显减轻.结论 蟛蜞菊内酯对肝缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与减轻肝细胞脂质过氧化作用有关.
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HPLC波长切换技术同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯的含量
目的：：建立HPLC法同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯4个有效成分的含量。方法：采用依利特C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm)；以甲醇-乙腈(2∶1)与0.5%冰醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱；流速为1.1 ml·min-1；柱温为25℃；检测波长(0~20 min、在222 nm波长下检测补骨脂素和佛手柑内酯；20~40 min、在351 nm波长下检测去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯)。结果：4个有效成分的线性范围分别为：补骨脂素5.380~107.600μg·ml-1( r=0.9995)、佛手柑内酯6.870~137.400μg·ml-1(r=0.9997)、去甲蟛蜞菊内酯4.580~91.600μg·ml-1(r=0.9992)、蟛蜞菊内酯7.300~146.000μg·ml-1(r=0.9999)；平均回收率分别为96.82%、98.81%、99.06%、98.39%,RSD分别为0.77%、1.40%、1.20%、0.80%(n=6)。结论：该方法操作准确稳定、灵敏度高、重复性好,可用于息喘丸中上述4个有效成分的定量测定。
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香草固齿酊的质量标准研究
目的:建立香草固齿酊的质量标准.方法:采用薄层色谱法(TLC)对香附、墨旱莲进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)测定α-香附酮与蟛蜞菊内酯的含量.结果:TLC鉴别斑点清晰,分离效果良好,阴性对照无干扰；HPLC测定α-香附酮的平均加样回收率为99.81％,RSD为0.41％(n=6)；蟛蜞菊内酯的平均加样回收率为100.16％,RSD为0.80％(n=6).结论:该方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可用于香草固齿酊的质量控制.
