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中药灌肠Ⅰ号对小鼠结肠炎治疗作用及免疫学机制研究
目的:比较中药方灌肠I号与西药柳氮磺胺吡啶(SASP)对2,4-二硝基氯苯(DNCB)和乙酸(AA)复合法诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型的治疗效果,并探寻UC发病机制.方法:将小鼠随机分为正常组、模型组、SASP组及灌肠Ⅰ号治疗组4组,用肠道积分法评定组织学变化;用流式细胞仪检测各组外周血、肠系膜淋巴结中CD3+、CD4+T细胞的变化.结果:模型组小鼠肠道组织学评分明显高于正常组,而结肠长度明显较正常组缩短;模型组CD3+、CD4+细胞较正常组明显降低(P＜0.01).经SASP和灌肠Ⅰ号灌肠治疗后,在肠道炎症和病理损伤明显减轻的同时,肠道组织学评分较模型组明显降低(P＜0.01),结肠长度与正常组基本接近,且CD3+、CD4+细胞亚群较模型组明显增高(P＜0.01).结论:灌肠I号对DNCB-AA诱导的小鼠UC模型治疗取得了满意效果,可作为UC发病机制的研究及治疗的较理想药物.
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不同天数银杏叶发酵液提取物的体外抗氧化活性比较
目的:考察银杏叶培养基经过冠突散囊菌发酵不同时间后乙酸乙酯提取物的体外抗氧化活性.方法:将冠突散囊菌接种于银杏叶培养基中分别发酵4,7,11,14 d后,真空抽滤得到滤液,利用溶剂分级萃取得到提取液,以未发酵银杏叶乙酸乙酯提取液作为对照.结合酶标仪,通过清除DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基、ABTS[2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐]自由基,以及铁还原能力,比较不同发酵天数乙酸乙酯提取物的抗氧化能力.结果:测定了不同天数银杏叶发酵液乙酸乙酯提取物的抗氧化活性,发现11d发酵液提取物抗氧化活性强,DPPH半数抑制浓度(IC50)105.60 mg·L-1,ABTS IC50102.09 mg·L-1更接近维生素C(vC)的IC50值,同时,11d组铁还原实验的吸光度在不同浓度梯度下均为大值.结论:初步确定银杏叶培养基发酵11d后,发酵液中的抗氧化活性成分积累量大.
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芪参健脾方对SHR大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2,MMP-9和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白表达的影响
目的:观察芪参健脾方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌组织内基质金属蛋白酶1,2,9(MMP-1,MMP-2,MMP-9)和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,collagenⅢ)表达的影响,探讨其改善高血压心肌纤维化的可能机制.方法:采用随机对照法将60只24周龄的SHR分为模型组、培哚普利组、培哚普利联合芪参健脾方组、芪参健脾方高、中、低剂量组,以同龄同种系的京都种大鼠(WKY) 10只作为正常组.正常组和模型组给予蒸馏水；培哚普利组用药量为0.4 mg·kg-1,中药治疗组采用标准水煎工艺,浓缩生药量4 g·mL-1,高、中、低剂量组ig给药剂量分别为40,20,10 g·kg-1；培哚普利联合中药组用药为培哚普利0.4 mg·kg-1+芪参健脾方20 g·kg-1.每日ig 1次,连续治疗6周后处死大鼠.免疫组化法检测各组大鼠心肌组织中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达；采用逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2,MMP-9的mRNA表达,采用Western免疫印迹(Western blot)法测定各组大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果:与正常组比较,SHR组心肌呈典型心肌纤维化改变；与SHR模型组比较,培哚普利联合中药组、培哚普利组和芪参健脾方高剂量组中collagen Ⅰ和collagenⅢ的表达显著下降(P＜0.01,P＜0.05),中剂量组中collagenⅢ的表达也明显减少(P＜0.05)；与模型组比较,培哚普利组、培哚普利联合中药组和芪参健脾方高剂量组中MMP-1,MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白的表达量都显著增加(P ＜0.01,P＜0.05),芪参健脾方中剂量组MMP-1蛋白的表达量也明显增加(P＜0.05).结论:芪参健脾方可通过调节MMP-1,MMP-2,MMP-9和collagen Ⅰ,collagenⅢ的水平,从而改善SHR大鼠心肌功能,这可能是其抑制SHR大鼠的心肌纤维化的机制之一.
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牵正散提取物对帕金森病模型小鼠震颤、运动障碍、黑质神经元超微结构的影响
目的:建立3种帕金森病小鼠模型,观察牵正散提取物对小鼠行为学影响,初步探讨其作用机制.方法:①昆明小鼠随机分组,设立模型组,牵正散低、高剂量组(1.7,5.0 g·kg-1),阳性药组(盐酸苯海索,3.35 mg·kg-1).各治疗组小鼠连续ig给药4d.末次给药后1h,各组ip给予氢溴酸槟榔碱(25 mg·kg-1)或氧化震颤素(0.15 mg·kg-1).记录各组小鼠震颤潜伏期和震颤持续时间.②C57BL/6小鼠随机分组,设立正常组,模型组,牵正散低、高剂量组剂量组(1.7,5.0 g·kg-1),阳性药组(美多芭,50 mg· kg-).除正常组,各组小鼠ip给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,30 mg· kg-),连续5d.第6天开始治疗组ig给予牵正散提取物和美多芭,连续7d,末次给药后检测小鼠行为学变化,电镜观察黑质神经元结构变化.结果:①小鼠ip槟榔碱或氧化震颤素后出现明显震颤,与模型组比较,牵正散提取物高剂量组震颤潜伏期显著延长(P＜0.05),低、高剂量组震颤持续时间均显著缩短(P＜0.01).②与模型组比较,小鼠ip MPTP后出现明显运动障碍,黑质神经元超微结构明显损伤,经牵正散提取物处理后,小鼠自主活动次数增加、转棒潜伏期延长、爬杆时间缩短(P＜0.05),黑质神经元线粒体等结构损伤程度减轻.结论:牵正散提取物显著抑制帕金森病模型小鼠震颤、改善运动障碍,其作用机制可能与减轻线粒体损伤、保护神经元有关.
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何首乌炮制过程中5种化学成分的含量变化
目的:建立制何首乌中5种化学成分没食子酸、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素与大黄素甲醚的含量测定方法,并比较5种成分在炮制时间变化过程中含量的动态变化.方法:采用RP-HPLC法,色谱柱为KinetexTMC18(4.6 mm×100 mm,2.6 μm);流动相为乙腈-0.5％乙酸梯度洗脱;流速为1.8 mL·min-1;柱温为30℃;检测波长分别为254,270,284,320 nm,检测时间为36 min.结果:没食子酸、5-HMF、二苯乙烯苷、大黄素与大黄素甲醚分别在0.585 ～ 58.5,0.54 ～ 53.5,1.07 ～107,1.23～123,0.564 ～ 16.92 mg·L-1线性良好.没食子酸炮制后含量明显增加,但随着炮制时间延长其含量变化不大;5-HMF为炮制后新产生的成分,其含量随着炮制时间的延长而有所增加;二苯乙烯苷随着炮制时间的延长,其含量呈下降趋势;游离蒽醌类物质大黄素与大黄素甲醚,两者炮制后均比炮制前要高,而且都在炮制后32 h达高峰.结论:提供了一种结果准确、重复性好、快捷的(制)何首乌质量分析方法.何首乌炮制过程中化学成分变化与其药效之间的相关性及量效关系有待进一步深入的研究.
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不同采摘期连翘叶中总黄酮、总酚酸含量与DPPH自由基清除能力的相关性
目的:研究不同采摘时期连翘叶的总黄酮、总酚酸含量的变化及其与清除2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)能力的关系.方法:连翘叶样品粉末脱脂后用60%甲醇超声波提取.采用DPPH自由基清除法评价不同采摘时期连翘叶的抗氧化能力.样品粗提取物总黄酮含量的测定采用亚硝酸钠法,总酚酸含量的侧定采用Folin 试剂法.采用SPSS 13.0分析软件对数据进行统计学处理.结果:不同采摘时期连翘叶的总黄酮、总酚酸含量以及清除DPPH自由基的能力存在着显著的差异;3月采摘的刚萌发幼叶表现出高的总黄酮、总酚酸含量以及清除DPPH自由基的能力.相关性研究表明,连翘叶的总黄酮、总酚酸含量与清除DPPH自由基能力均存在显著正相关关系,其相关系数分别为0.886,0.841.结论:3月连翘叶的抗氧化能力和抗氧化物质含量都显著高于其他生长时期连翘叶,这显示从抗氧化方面而言连翘嫩叶刚萌发的时期是佳的采摘时期,为较好的开发和利用连翘叶提供了理论依据.
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三白草体外抗氧化活性
目的:研究三白草体外抗氧化活性.方法:采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基和[2,2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基测定法,对三白草提取物抗氧化活性进行评价.结果:正丁醇提取物清除DPPH自由基(IC50=16.94)的能力比BHT清除能力(IC50=18.71 mg·L-1)强,弱于阳性对照PG和BHA清除DPPH自由基的能力(IC50分别为0.89,3.2mg· L-1)；清除ABTS自由基的能力(IC50=12.90 mg·L-1)弱于阳性对照PG和BHA清除ABTS自由基的能力(IC50分别为0.81,1.95 mg·L-1),比阳性对照BHT( IC50为7.72mg· L-1)清除ABTS自由基的能力略弱；石油醚提取物和乙酸乙酯提取物清除DPPH和ABTS自由基的能力均比阳性对照PG,BHT,BHA清除DPPH和ABTS自由基的能力弱.结论:三白草正丁醇提取物有抗氧化活性.
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首乌藤配方颗粒的HPLC指纹图谱
目的:建立首乌藤配方颗粒的HPLC指纹图谱,并对其主要的共有峰进行成分归属,为其质量控制提供科学依据.方法:采用HPLC方法,测定了不同厂家的15批首乌藤配方颗粒的HPLC指纹图谱,色谱条件:Waters XBridgeTM shield RP18 C18色谱柱,流动相乙腈-0.1％乙酸水溶液,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长271 nm,进样量15μL.结果:建立了首乌藤配方颗粒的指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”计算处理,通过HPLC指纹图谱分析,确定了首乌藤配方颗粒8个共有峰,并确认6个特征峰,分别为没食子酸,原儿茶酸,儿茶素,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷,大黄素,大黄素甲醚.对照指纹图谱色谱峰丰富,分离度高,匹配确定了主要特征峰,15批首乌藤配方颗粒样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均＞0.86,相似度高,可实现首乌藤配方颗粒化学成分全面和整体的评价,能较好控制首乌藤配方颗粒的质量.结论:该方法简单、准确、重复性好,可以为首乌藤配方颗粒质量控制和评价提供参考.
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HPLC在线检测消癌平注射液清除ABTS·+活性
目的:利用HPLC在线检测消癌平注射液对ABTS-+[2,2'-联氨-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)自由基]的清除活性,研究其抗氧化活性物质基础.方法:消癌平注射液经HPLC在柱后与ABTS-+工作液混合并充分反应后,经过检测器记录反应信号,通过对照品鉴定各主要成分,并计算其清除率.结果:已鉴定出新绿原酸、咖啡酸、绿原酸,其对ABTS-+的清除率分别为9.9％,22.5％,16.5％.结论:消癌平注射液中酚酸类物质对ABTS-+有较强的清除作用;此方法可实现中药制剂抗氧化活性成分的在线检测.
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HPLC波长切换法同时测定牡丹皮中6个成分的含量
目的:建立高效液相色谱波长切换法对牡丹皮中6个成分(没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷)进行分析.方法:采用Phenomsil ODS(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1％磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长为267nm(0～20 min没食子酸)、258nm(20～30min氧化芍药苷)、230nm(30 ～50min,芍药苷)、274nm(50～80 min 1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚)、230nm(80～90min苯甲酰芍药苷),柱温30℃.结果:牡丹皮中6个成分没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷进样量分别在0.109 4～1.094 μg(r =0.9995),0.034 86～0.348 6μg(r=0.9995),0.212 4～2.124μg(r=0.9991),0.214 5～2.145μg(r =0.9996),0.323 5～3.235μg(r=0.9994),0.075 84～0.758 4μg(r =0.9993)与峰面积呈良好线性关系；平均回收率(n=6)分别为98.7％,98.8％,99.7％,98.3％,98.9％,99.2％.结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于牡丹皮的质量控制.
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疏花假地豆体外抗氧化活性研究
目的:对疏花假地豆体外抗氧化活性进行研究.方法:采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除[2,2'-联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基及铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法,评价疏花假地豆体外抗氧化活性,并与阳性对照二丁基羟基甲苯(BHT)比较.结果:疏花假地豆体外抗氧化活性较好.其中乙酸乙酯提取部位清除DPPH自由基(IC50 =35.66 mg·L-1)、ABTS自由基(IC50=8.49 mg·L-1)及还原Fe3+的能力(TEAC =756.20 μmol·g-1)较好,但仍低于阳性对照BHT(IC50=3.69 mg·L-1,IC50=6.64 mg·L-1和TEAC=4 997.76 μmol· g-1).结论:疏花假地豆乙酸乙酯提取部位体外抗氧化活性相对于其他部位好.
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紫花地丁化学成分及抗氧化活性
目的:研究中药紫花地丁的化学成分及抗氧化活性.方法:运用多种色谱方法对紫花地丁乙醇提取物的正丁醇萃取物进行分离纯化,根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定其结构,并采用清除2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(DPPH)法测定化合物的抗氧化活性.结果:从该植物中共分离鉴定了11个化合物,分别为山奈酚-3-O-β-D-槐糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(1),山奈酚-3,7-二-O-α-L-鼠李糖苷(2),芹菜素-6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷(3),腺苷(4),秦皮乙素(5),芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷(6),芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷(7),芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-8-C-β-D-木糖苷(8),芹菜素-6,8-二-C-α-L-阿拉伯糖苷(9),芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-8-C-β-L-阿拉伯糖苷(10)和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(11).对化合物1～11清除DPPH自由基的能力进行了评价,结果显示化合物1～5,11均具有一定的抗氧化活性.结论:化合物2为首次从该植物中分离得到,化合物1和8为首次从堇菜属植物中分离得到.
关键词： 紫花地丁 化学成分 抗氧化活性 2 2-二苯基-1-苦肼基自由基 -
培元通脑胶囊质量标准研究
目的:建立培元通脑胶囊的质量标准.方法:采用薄层色谱法对培元通脑胶囊中何首乌、肉桂、赤芍及肉苁蓉进行定性鉴别；HPLC测定何首乌中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷的含量.色谱条件:Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(15:85),流速1.0 mL·min-1.结果:TLC的斑点清晰、分离度较好,阴性无干扰；2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷在0.0645～0.805 9μg线性关系良好,平均回收率为99.4％,RSD 2.2％(n=6).结论:所建标准可用于培元通脑胶囊的质量控制.
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白芍饮片炒制前后物质基础的变化规律分析
目的:基于HPLC特征图谱和主要成分的含量测定探讨白芍炒制前后饮片物质基础的变化规律.方法:采用RP-HPLC,选择ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),乙腈(A)-0.05％磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～5 min,5％～9％A;5 ～25 min,9％～17％A;25～30 min,17％ ～22％ A;30～35 min,22％A;35～50 min,22％ ～40％A;50～60 min,40％ A),流速1.0mL·min-1,柱温30 ℃,进样量10μL,检测波长254 nm,建立白芍及炒白芍饮片特征图谱表征方法;同时对没食子酸等6种成分进行定量分析(检测波长230 nm).以乙腈-0.05％磷酸水溶液(18:82)为流动相等度洗脱,同时测定1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖与苯甲酸的含量.结果:白芍与炒白芍饮片特征图谱中均标示出12个特征峰,并归属了其中8个特征峰.白芍炒制后单萜苷类成分芍药苷与芍药内酯苷质量分数分别降低了6％和7％,鞣质类成分含量显著增加,没食子酸和1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖、苯甲酸的质量分数分别增加了28％,26％,53％,其余成分的含量均无明显变化.结论:白芍炒制前后特征图谱及主要成分含量均有一定差异,本文所建立的特征图谱及含量测定方法为白芍和炒白芍饮片质量评价标准的制定提供了参考,为进一步完善二者的质量评价体系奠定了基础.
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首乌藤药材质量标准的研究
目的:建立首乌藤药材的质量标准.方法:采用TLC法对首乌藤药材进行定性鉴别;用高效液相色谱法测定2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量.结果:在TLC色谱中首乌藤斑点清晰;2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.0309～1.54μg范围呈良好的线性关系,r=0.99965:平均回收率为95.5%,RSD=3.2%.结论:所建立的方法可准确地进行定性、定量检测,可用于首乌藤药材的质量控制.
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安眠补脑糖浆中2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定
目的:建立安眠补脑糖浆中2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法.方法:HPLC法,流动相:乙睛-水(21∶79);检测波长:320 nm.结果:2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为(25.70～179.90)μg,平均回收率为97.5%,RSD为1.6%.结论:方法简便可靠,可有效地控制安眠补脑糖浆的质量.
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斑秃生发颗粒质量标准的研究
目的:建立斑秃生发颗粒的质量标准.方法:用HPLC法对斑秃生发颗粒中主要成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D葡萄糖苷进行含量测定,流动相为乙腈-3%冰乙酸水(12:88),检测波长320nm.同时对制剂中的主要药味黄芪、何首乌、当归、羌活进行薄层鉴别.结果:平均加样回收率为99.33%,RSD=1.74%(n=6).薄层图谱斑点清晰,阴形对照无干扰.结论:本方法可靠准确、重现性好,可有效控制制剂的质量.
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颐神复忆胶囊提取工艺的正交优选
目的:优选颐神复忆胶囊佳提取工艺.方法:以2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)为指标选择四因素三水平,用L9(3)4正交表进行,确定佳提取工艺.结果:佳工艺为A2B2C2D3,即用60%浓度乙醇,相当于生药量的4倍,回流提取3次,即1.5,1,0.5h(回流总时间为3 h).结论:该优选工艺可行,适于生产.
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拜颤停复方对帕金森病小鼠模型氧化应激反应的影响
目的:通过研究拜颤停复方(BCT)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠帕金森病(PD)模型神经行为学、纹状体多巴胺(DA)含量、氧化应激反应的影响,探讨BCT对PD模型神经保护作用的可能作用机制.方法:雄性C57BL/6小鼠,MPTP-HC1(30 mg·kg-1 ·d-1,ip,0.9％生理盐水溶解)5d,造成PD小鼠模型;设立正常组、模型组、多巴丝肼组(62.50 mg· kg-·d-1)及BCT高、中、低剂量组(363.00,181.50,95.75 mg·kg-1·d-1),各给药组均用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶解;BCT高、中、低剂量组培给药治疗20 d后,进行爬杆实验和自主活动实验以观察小鼠行为学的变化;采用UPLC-MS-MS三重四级杆串联质谱技术检测小鼠纹状体多巴胺(DA)的含量;化学比色法检测小鼠黑质(SN)部位超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及单胺氧化酶B(MAO-B).结果:与正常组比较,模型组小鼠爬杆时间显著延长(P＜0.05),自主活动次数显著减少(P＜0.05),纹状体DA含量、SOD及GSH-Px水平显著降低(P＜0.01),MDA及MAO-B水平显著升高(P＜0.01).与模型组比较,经过BCT治疗,PD小鼠的神经行为学得到显著改善(P＜0.05),纹状体DA含量,SOD及GSH-Px水平显著升高(P＜0.01,P＜0.05),MDA及MAO-B水平显著降低(P＜0.01).结论:BCT可以通过提高机体的抗氧化和清除自由基能力,明显改善PD小鼠的神经行为学变化及纹状体DA的含量,是其对PD模型神经保护作用的可能机制.
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何首乌二苯乙烯部位质量控制方法研究
目的:建立何首乌二苯乙烯部位质量控制方法.方法:采用紫外分光光度法测定总二苯乙烯含量,采用高效液相色谱法测定2,3,5,4'一四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量.结果:以2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为对照品,测定总二苯乙烯含量时,在3.04-15.20μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为Y=0.0588X+0.0026(r=0.9998),平均加样回收率为99.95%,RSD=2.11%(n=6);测定2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量时,在0.1032-0.6192μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=3614089.84X+14475.21(r=0.9997),平均加样回收率为100.08%,RSD=2.83%(n=6).结论:3批样品含量测定结果表明,所建立的方法简便、准确,可用于何首乌二苯乙烯部位质量控制.
