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2,6-二叔丁基对甲酚致大鼠肺巨噬细胞凋亡的作用
目的 研究2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)致大鼠肺巨噬细胞凋亡的作用.方法 SD大鼠40只,随机分为BHT高、中、低剂量组(300,600和1 200 mg/kg)和吐温-80溶剂对照和蒸馏水对照,每天灌胃,连续8 d.处死动物,行肺灌流,用荧光染色及彗星试验检测巨噬细胞凋亡.结果 肺脏器系数随染毒剂量增加而增高.病理检测见中、高剂量组大鼠肺泡间隔增厚,炎细胞浸润、无纤维化.细胞凋亡检测显示,中、高剂量的BHT具促进肺巨噬细胞凋亡的作用.结论 亚急性BHT大剂量染毒可造成大鼠肺、肝等脏器功能性和器质性损伤,BHT可诱发肺巨噬细胞凋亡的产生.中、高剂量组细胞凋亡的百分率分别33.7±3.6和21.2±2.9,与吐温-80(15.6±3.1)和对照(12.3±2.8)组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).
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2,3,6,7-二苯并蒽对大鼠生殖内分泌影响的研究
目的探讨2,3,6,7-二苯并蒽对切除卵巢大鼠生殖内分泌和子宫雌激素受体的影响.方法应用放射免疫法(RIA)和放射配体受体法.结果 2,3,6,7-二苯并蒽在皮下注射5 d后,低及高剂量均可导致切除卵巢的大鼠子宫湿重明显增加(P<0.01).低及高剂量组大鼠子宫雌激素受体数量与对照组比,差异无显著性(P>0.05),但高剂量组大鼠子宫雌激素受体亲和力明显高于对照组(P<0.05).低及高剂量组血清中卵泡刺激素(FSH)含量与对照组比,差异无显著性(P>0.05),低及高剂量组血清中黄体生成素(LH)含量明显降低(P<0.01,P<0.05),高剂量组血清中催乳素(PRL)含量明显增加(P<0.05).结论 2,3,6,7-二苯并蒽雌激素活性的作用机制可能是干扰下丘脑-垂体-卵巢轴对生殖内分泌的调控.
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2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)诱导孕烷X受体(PXR)活化能力的探讨
目的 探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)是否为孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)的诱导剂及其诱导PXR受体下游基因细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的转录表达能力.方法 采用CCK-8法测定分析BDE-47对人肝肿瘤细胞株HepG2的细胞毒性作用,并以BDE-47分别处理双萤光素酶hPXR报告基因系统和稳定高表达hPXR的HepG2细胞株,观察其对CYP3A4的诱导作用和对其mRNA及蛋白表达的诱导作用.结果 BDE-47对HepG2细胞有明显的细胞毒性作用,且在6～48 h呈明显剂量-时间-效应关系(P<0.01).48 h为毒作用兴奋点,其半数抑制浓度(IC_(50))为110μmol/L.BDE-47能诱导CYP3A4表达量的增高,呈明显剂量-时间-效应关系(P<0.01).Q-PCR和Western Blot分析发现,其对CYP3A4的mRNA转录和蛋白表达有显著诱导作用,并呈剂量-效应关系(P<0.01),对PXR受体诱导能力明显高于已知的阳性诱导物利福平.结论 在本试验条件下,BDE-47是PXR受体的强力诱导剂,可能通过激活PXR受体而发挥其一系列毒性作用.
关键词： 2 2' 4 4'-四溴联苯醚(BDE-47) PXR受体 CYP3A4 hPXR双萤光素酶报告基因 -
2,5-己二酮对大鼠神经丝mRNA水平的影响
目的 探讨2,5-己二酮(HD)对神经组织神经丝(NF)mRNA水平的影响.方法 Wistar雄性大鼠27只,分为3组(1个对照组,2个染毒组),每组9只,经腹腔染毒,剂量分别为200和400 mg/(kg·d),连续8周.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测坐骨神经、脊髓、大脑组织中高分子量NF(NF-H)、中分子量NF(NF-M)和低分子量NF(NF-L)mRNA水平.结果 200和400 mg/kg剂量染毒后,坐骨神经NF-L mRNA水平分别为对照组的126%(P＜0.05)和152%(P＜0.01),NF-M mRNA未检测到,NF-H mRNA未发生明显变化;在脊髓、大脑组织中,NF-L mRNA下降为对照组的34%～54%(P＜0.01),NF-M mRNA未发生明显变化,400 mg/kg剂量组中NF-H mRNA下降为对照组的85%(P＜0.05).结论 HD染毒导致大鼠神经组织中NF亚单位mRNA水平的变化.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对1,2,4-苯三醇调控K562细胞GATA结合蛋白1表达水平的影响
目的 GATA-1是在红系分化过程中发挥关键作用的转录因子,实验观察1,2,4-苯三醇对K562细胞GATA-1基因mRNA表达的影响,以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)的干预作用.方法 培养的K562细胞先经5、10和20μmol/L的1,2,4-苯三醇处理72 h,然后经氯化高铁血红素诱导后,应用联苯胺染色法检测细胞血红蛋白合成情况,采用反转录PCR检测细胞GATA-1的mRNA表达水平.培养的K562细胞先经20 μmol/L的1,2,4-苯三醇处理24或48 h后,或加入5-aza-CdR共同孵育48 h,或加入TSA共同孵育24 h,然后经氯化高铁血红素诱导后,采用反转录PCR检测细胞GATA-1的mRNA表达水平.结果 当K562细胞经5、10和20 μmol/L的苯三醇处理后,氯化高铁血红素诱导下的GA TA-1 mRNA表达水平分别只有对照组的91.1％、52.7％和23.2％,红系分化率分别只有对照组的93.3％、85.9％和65.5％.如果在20μmol/L的苯三醇处理24 h后加入5-Aza-CdR共同孵育48 h,氯化高铁血红素诱导的GA TA-1 mRNA表达水平相对于单纯苯三醇处理组有明显回升,达到对照组水平的80.0％.如果在20 μmol/L的苯三醇处理48 h后加入TSA共同孵育24 h,氯化高铁血红素诱导的GATA-1mRNA表达水平相对于单纯苯三醇处理组有明显回升,达到对照组水平的78.0％.结论 1,2,4-苯三醇可引起K562细胞GATA-1基因转录抑制,而DNA甲基化和组蛋白去乙酰化的表观遗传修饰方式的改变可能参与其中.
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2,4-二氯-6-硝基酚铵诱发小鼠肺肿瘤研究
用2,4-二氯-6-硝基酚铵(DCNPA)进行小鼠肺肿瘤诱发试验.分别作DCNPA1次腹腔注射染毒,DCNPA1次染毒+BHT促进,和DCNPA1次染毒+BHT促进+DCNPA演进3个试验.结果提示DCNPA为完全致癌物,因为DCNPA不需BHT促进即能诱发肺腺瘤,试验结果也提示DCNPA有一定的演进作用.
关键词： 2 4-二氯-6-硝基酚铵 小鼠肺肿瘤诱发 完全致癌物 演进剂 -
2,5-HD对大鼠DRG神经元神经丝蛋白表达的影响
目的 比较2,5-己二酮(2,5-HD)和3,3'-亚氨基二丙腈(3,3'-IDPN)对大鼠DRG神经元神经丝蛋白(NF-M)的损伤作用.方法 用出生后2 d的大鼠背根神经节(DRG)神经元,在培养皿中加不同浓度的2,5-HD和3,3'-IDPN进行培养,用荧光染料测定细胞毒性,计算细胞死亡率.用蛋白免疫荧光方法测定NF-M,计算DRG神经元细胞体的神经丝表达.结果 DRG神经元24 h接触2,5-HD和3,3'-IDPN的LD50约为32和102 mmol/L.DRG细胞体内的NF-M蛋白含量在接触2,5-HD(0、4、8和16 mmo/L浓度)24和48 h后结果显示,各个剂量组均有明显降低(P＜0.05.P＜0.01);而在接触3,3'-IDPN 24 h后,各个剂量组之间没有发生明显改变,但在接触48 h后,仅有64,128 mmol/L组与对照相比,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在DRG神经元具有相同死亡率时,2,5-HD和3,3'-IDPN 24 h后对NF-M蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 2,5-HD与3,3'-IDPN对NF-M的损伤不同.2,5-HD减少NF-M蛋白表达要早于细胞死亡.NF-M对2,5-HD比对3,3'-IDPN敏感.
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活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝运输的影响
目的 用活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝蛋白(NF-M)在体外培养的背根神经节神经元轴突中的运输的影响.方法 转染pPA-GFP-NFM质粒的背根神经节神经元体外培养,给予2,5-己二酮作用24 h后,荧光显微镜下定量观察GFP-NFM的转运量.结果 给药4、8和16 mmol/L 2,5-HD组,NF-M在轴突中被转运的量分别为28.5±11.6％(P＜0.05)、22.6±9.2％(P＜0.01)和18.5 ±8.6％(P＜0.01),而空白对照组中NF-M被转运的量为35.6±11.0％.结论 2,5-己二酮降低了NF-M的轴浆运输速率,这可能是2,5-己二酮引起中毒性周围神经病的致病机制之一.
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2,5-己二酮中毒大鼠坐骨神经中PKA、PKC和CDK5含量的变化
目的 探讨蛋白激酶A(PKA),蛋白激酶C(PKC)和细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)在2,5-己二酮(HD)中毒性周围神经病发病过程中的作用.方法 雄性Wistar大鼠200、400mg/kg HD腹腔注射染毒,每周5次,连续8周,建立HD中毒性神经病模型.利用SDS-PAGE和Western Blotting方法检测坐骨神经胞浆和膜组分中PKA、PKC、p35前体、p35、p25和CDK5的相对含量.结果 PKA、PKC、p35前体、p25和CDK5含量在200和400mg/kg染毒组大鼠坐骨神经胞浆蛋白组分中均呈明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);PKC、p35前体和p35在胞膜蛋白组分中变化趋势与胞浆蛋白中相似,也明显升高,并且与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05),但PKA、CDK5在坐骨神经胞膜蛋白组分中未能检出.结论 坐骨神经中PKA、PKC和CDK5含量明显升高,提示相关蛋白激酶含量的升高可能是HD致中毒性周围神经病的发病机制之一.
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苯代谢物1,2,4-苯三醇对K562细胞的凋亡诱导和分化抑制作用
目的 研究苯代谢产物1,2,4-苯三醇对K562细胞的增殖和分化的影响.方法 应用台盼蓝染色排除法计数活细胞数,应用碘化丙啶(PI)染色结合流式细胞术分析细胞周期分布情况,应用PI/FITC-annexin V双染结合流式细胞术分析细胞凋亡情况,联苯胺染色法计数分析K562细胞红系分化情况.结果 1,2,4-苯三醇(0.025～0.4 mmol/L)处理24 h对K562细胞产生浓度依赖性的增殖抑制.0.2 mmol/L的1,2,4-苯三醇作用24 h后,K562细胞G0/G1期细胞比例显著下降,S期和G2/M期细胞比例显著升高,细胞出现明显的细胞凋亡.用0.005 mmol/L浓度的1,2,4-苯三醇预处理24h的K562细胞经氯化高铁血红素诱导24、48和72 h的红细胞分化率分别是21.57%、40.62%和46.60%,均显著低于对照细胞相应时间点的红细胞分化率.结论 在本试验条件下,苯代谢物1,2,4-苯三醇在一定的浓度范围内对K562细胞表现出浓度依赖性的增殖抑制作用,这种增殖抑制作用可能是通过细胞周期改变进而引起细胞凋亡来实现的,而在无细胞毒性的低浓度下1,2,4-苯三醇就可明显抑制K562细胞的红系分化,1,2,4-苯三醇的凋亡诱导作用和分化抑制作用可能在苯血液毒性机制方面有重要意义.
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2,4-二氯苯氧乙酸的毒理学及流行病学研究进展
2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)是一种对人类具有潜在毒性的苯氧羧酸类除草剂,能杀死多种阔叶杂草,在欧洲和北美的地下水中经常发现其残留[1],在我国因其成本较低也得到了较为广泛的应用.但其残留与毒性日益受到了人们的重视,本文就2,4-D在毒理学和流行病学方面已取得的研究成果进行综述.
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2,6-二氯酚对鲤鱼超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性的影响
氯酚类化合物( Chlorophenols,CPs)是在杀虫剂、防腐剂和除草剂中普遍使用的化工原料,毒性大,难以生物降解,易于通过食物链在生物体内富集,具有致癌、致畸和致突变的效应,是各国环保部门优先控制的污染物[1].
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DNPH比色法:一种简单的蛋白质羰基含量测定方法
自由基对机体的氧化损伤大致分为5个方面:(1)对抗氧化系统的损伤;(2)对DNA的氧化损伤.(3)对脂质的氧化损伤,近几年发现的8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2 α)是自由基损伤细胞膜脂质更好的指标;(4)对蛋白质的氧化损伤;(5)对糖类的氧化损伤,反映自由基对糖影响的标志物目前还不多,常用的指标有透明质酸….蛋白质不仅是生物体的重要组成成分,而且在生命活动中担负重要的功能,在生物体中有催化、调节、转运、贮存、运动和支架作用等功能.对蛋白质氨基酸侧链的氧化可导致羰基产物的积累.蛋白质的羰基化被广泛地用于评价各种生物有机体的氧化程度[2],蛋白质羰基含量是蛋白质氧化损伤的敏感指标[3].2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法是测定蛋白质羰基含量的经典方法.目前这种方法在国内罕有报道和介绍,现就DNPH比色法的原理、具体实现方法、应用、特点以及本实验室在从事相关实验研究中获得的经验和一些值得注意的问题予以介绍.
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2,5-己二酮对大鼠感觉神经功能的影响
正己烷作为溶剂广泛用于丙烯聚合溶剂、食用油脂抽提溶剂、橡胶和涂料的溶剂,以及颜料的稀释剂等.虽然正己烷急性毒性分类为低毒类,但因其具有高挥发性和高脂溶性,且有神经系统毒性作用,应视为高危害性毒物[1].
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2,2',4,4'-四溴联苯醚对小鼠甲状腺激素系统稳态的影响及作用机制研究
目的 研究不同剂量2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)对C57BL/6小鼠甲状腺激素T_3、T_4和促甲状腺激素TSH的影响,并探讨可能的毒作用机制.方法 将C57BL/6小鼠分成对照组和低、中、高剂量组,对照组按0.1ml/10g给予玉米油,染毒组分别按0.5、5和50mg/kg剂量给予BDE-47化合物,连续4天腹腔注射后,收集动物血液、肝脏和甲状腺组织.电化学发光免疫法测定各组小鼠血清总T4(TT4)、总T3(TT3)和TSH,愈创木酚法测定甲状腺组织中过氧化物酶(TPO)活性,CHOPRA法检测肝脏中Ⅰ型脱碘酶(DI)活性.结果 与对照组相比,所有染毒剂量组TT4水平均降低(P<0.01),中、高剂量染毒组小鼠TTM_3水平降低(P<0.01);中、高剂量染毒组小鼠肝脏DI活性与对照组相比有显著增加(P<0.05);血清TSH水平和甲状腺TPO活性各组之间无显著差异(P>0.05).结论 BDE-47可以破坏小鼠甲状腺激素系统稳态,产生甲状腺激素干扰毒性,其作用机制之一可能是影响肝脏DI活性.
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2,5-己二酮对大鼠运动及感觉神经元神经生长因子表达的影响
目的研究正己烷的代谢产物2,5-己二酮对大鼠神经系统运动、感觉神经元内源性神经生长因子(NGF)表达的影响.方法采用原代培养的大鼠背根神经节(DRG)感觉神经元和培养的大鼠脊髓前角运动神经元瘤细胞系VSC4.1细胞,用相差显微镜观察细胞形态,同时用免疫组化方法分析不同浓度2,5-HD(2.5、5.0、10.0、20.0mol/L)染毒24小时后DRG、VSC4.1细胞内NGF含量的变化.结果与对照组相比,2,5-己二酮染毒剂量为5.0、10.0、20.0mmol/L时,皆可使DRG细胞及VSC4.1细胞NGF表达量显著下降(P<0.05);各剂量组间两两比较发现随着染毒剂量增高,两类细胞NGF表达水平的下降有愈为明显的趋势.结论2,5-己二酮可降低大鼠DRG感觉神经元和脊髓前角运动神经元(VSC4.1细胞)、内源性NGF的表达水平,并进一步抑制了两类细胞的生长与存活.
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2,5-己二酮不同作用时间对大鼠坐骨神经P0蛋白及血清P0蛋白抗体水平的影响
目的 探讨正己烷代谢产物2,5-己二酮不同作用时间对大鼠坐骨神经髓鞘结构蛋白P0蛋白及外周血中P0蛋白抗体水平的影响.方法 选用400mg/kg 2,5一己二酮每日经口灌胃染毒Wistar大鼠,观察大鼠的一般状况改变.分别于第0、1、2、3、4周取材,采用免疫组化技术观察不同染毒时间大鼠坐骨神经横断面P0蛋白表达水平,并采用酶联免疫吸附试验检测不同染毒时间,大鼠外周血中P0蛋白抗体的水平.结果 随着染毒时间的延长,大鼠逐渐出现明显的中毒症状.P0蛋白在坐骨神经横断面呈不均匀分布,髓鞘较轴索明显;未染毒大鼠坐骨神经横断面P0蛋白呈较高水平表达,随着染毒时间的延长,坐骨神经横断面P0蛋白表达水平有逐渐降低的趋势.染毒O、1、2、3和4周大鼠外周血中P0蛋白抗体阳性率分别为33.3%、26.7%、46.7%、46.7%和84.6%.外周血中P0蛋白抗体的阳性率随染毒时间延长呈现明显增加的趋势(X2=11.007,P<0.05).结论 正己烷代谢产物2,5-己二酮能够破坏大鼠周围神经髓鞘,降低坐骨神经中P0蛋白的水平,提高外周血中P0蛋白抗体的水平.
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神经生长因子对2,5-己二酮致运动神经元线粒体功能损伤的影响
目的 探讨神经生长因子(NGF)对2,5-己二酮所致运动神经元细胞线粒体功能损伤的影响.方法 用10mmol/L和20mmol/L 2,5-己二酮给运动神经元VSC4.1细胞处理12h后,检测VSC4.1细胞活性,NGF 的蛋白表达以及线粒体膜电位的变化;20mmol/L 2,5-己二酮与VSC4.1细胞作用12h后,去除2,5-己二酮加入不同浓度的NGF,检测细胞活性和线粒体膜电位的变化.结果 10mmol/L和20mmol/L 2,5-己二酮与运动运动神经元VSC4.1细胞共同培养12h后,细胞活性分别下降了17%和23%;VSCA.1细胞内NGF的表达分别下降了33.5%和34%;线粒体膜电位由39.36分别下降到29.57和23.80.VSC4.1细胞与2,5-己二酮作用12h后用50ng/ml和100ng/ml NGF处理,细胞的活性增加了6.38%和23.40%;细胞线粒体膜电位也由26.03增加到30.18和31.50(P＜0.05).结论 NGF寸以通过改善线粒体膜电位来修复2,5-己二酮导致的运动神经元线粒体功能损伤.
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2,2',4,4'-四溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激与DNA损伤的影响
目的 探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用.方法 用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞.当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/ml/PBDE-47进行染毒,24h后检测细胞存活率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,以及DNA损伤情况.结果 与对照组相比,1μg/ml和2,μg/ml剂量组细胞存活率略有上升(P＜0.05),4、6、8和10μg/ml剂量组细胞存活率显著降低(P＜0.05);各染毒剂量组GSH含量显著下降(P＜0.05)、尾矩显著上升(P＜0.05);4、8和10μg/ml剂量组MDA含量明显高于对照组(P＜0.05);4、6、8和10μg/ml剂量组LDH漏出率显著高于对照组(P＜0.05)、SOD活力明显低于对照组(P＜0.05);6、8和10μg/ml剂量组尾部DNA百分率与对照组比较存在差异的显著性(P＜0.05).结论 PBDE-47可引起SH-SY5Y细胞氧化应激和DNA损伤,氧化应激可能在PBDE.47致DNA损伤中起重要作用.
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固相微萃取-气相色谱-负化学源质谱法测定葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚
目的 建立葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚(2,4,6-TCA)的固相微萃取-气相色谱-负化学源电离的质谱联用法( SPME-NCI-GC/MS).方法 在35℃下,采用100μm聚二甲基硅氧烷共聚物(PDMS)的固相微萃取纤维对葡萄酒样品萃取15min,在气相色谱仪的进样口解析后,经毛细管柱CP-SIL 8CB-MS (30m×0.25mm×0.25μm)分离,负化学离子源电离的质谱法测定,采用选择离子监测方式(SIM)进行监测,以d5-2,4,6-TCA为内标,进行内标法定量.结果 在0.5～60ng/L范围内,葡萄酒样品中的2,4,6-TCA含量与2,4,6-TCA及内标d5-2,4,6-TCA峰面积比呈良好的线性关系,r＞0.996.以空白葡萄酒基质进行加标回收实验,3个添加水平(5、10和20ng/L)的回收率为79.8％～101.6％,RSD≤7％(n=5).葡萄酒中2,4,6-TCA的检测限和定量限分别为0.06和0.2ng/L.结论 该方法无需使用有机溶剂,选择性好,灵敏度高,适用于葡萄酒中痕量2,4,6-TCA的测定.
