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5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对1,2,4-苯三醇调控K562细胞GATA结合蛋白1表达水平的影响
目的 GATA-1是在红系分化过程中发挥关键作用的转录因子,实验观察1,2,4-苯三醇对K562细胞GATA-1基因mRNA表达的影响,以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)的干预作用.方法 培养的K562细胞先经5、10和20μmol/L的1,2,4-苯三醇处理72 h,然后经氯化高铁血红素诱导后,应用联苯胺染色法检测细胞血红蛋白合成情况,采用反转录PCR检测细胞GATA-1的mRNA表达水平.培养的K562细胞先经20 μmol/L的1,2,4-苯三醇处理24或48 h后,或加入5-aza-CdR共同孵育48 h,或加入TSA共同孵育24 h,然后经氯化高铁血红素诱导后,采用反转录PCR检测细胞GATA-1的mRNA表达水平.结果 当K562细胞经5、10和20 μmol/L的苯三醇处理后,氯化高铁血红素诱导下的GA TA-1 mRNA表达水平分别只有对照组的91.1％、52.7％和23.2％,红系分化率分别只有对照组的93.3％、85.9％和65.5％.如果在20μmol/L的苯三醇处理24 h后加入5-Aza-CdR共同孵育48 h,氯化高铁血红素诱导的GA TA-1 mRNA表达水平相对于单纯苯三醇处理组有明显回升,达到对照组水平的80.0％.如果在20 μmol/L的苯三醇处理48 h后加入TSA共同孵育24 h,氯化高铁血红素诱导的GATA-1mRNA表达水平相对于单纯苯三醇处理组有明显回升,达到对照组水平的78.0％.结论 1,2,4-苯三醇可引起K562细胞GATA-1基因转录抑制,而DNA甲基化和组蛋白去乙酰化的表观遗传修饰方式的改变可能参与其中.
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苯代谢物1,2,4-苯三醇对K562细胞的凋亡诱导和分化抑制作用
目的 研究苯代谢产物1,2,4-苯三醇对K562细胞的增殖和分化的影响.方法 应用台盼蓝染色排除法计数活细胞数,应用碘化丙啶(PI)染色结合流式细胞术分析细胞周期分布情况,应用PI/FITC-annexin V双染结合流式细胞术分析细胞凋亡情况,联苯胺染色法计数分析K562细胞红系分化情况.结果 1,2,4-苯三醇(0.025～0.4 mmol/L)处理24 h对K562细胞产生浓度依赖性的增殖抑制.0.2 mmol/L的1,2,4-苯三醇作用24 h后,K562细胞G0/G1期细胞比例显著下降,S期和G2/M期细胞比例显著升高,细胞出现明显的细胞凋亡.用0.005 mmol/L浓度的1,2,4-苯三醇预处理24h的K562细胞经氯化高铁血红素诱导24、48和72 h的红细胞分化率分别是21.57%、40.62%和46.60%,均显著低于对照细胞相应时间点的红细胞分化率.结论 在本试验条件下,苯代谢物1,2,4-苯三醇在一定的浓度范围内对K562细胞表现出浓度依赖性的增殖抑制作用,这种增殖抑制作用可能是通过细胞周期改变进而引起细胞凋亡来实现的,而在无细胞毒性的低浓度下1,2,4-苯三醇就可明显抑制K562细胞的红系分化,1,2,4-苯三醇的凋亡诱导作用和分化抑制作用可能在苯血液毒性机制方面有重要意义.
