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姜黄素对布比卡因诱导的心肌细胞毒性的作用及机制研究
目的 探究姜黄素对布比卡因诱导的心肌细胞毒性作用及机制.方法 首先用WST-1法检测不同浓度姜黄素(0、25、50、75和100μmol/L)对H9C2心肌细胞增殖的影响,确定姜黄素的适浓度.然后用适浓度的姜黄素处理H9C2细胞24 h后,加入1 mmol/L布比卡因刺激24 h,WST-1检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblotting方法检测细胞中细胞色素C(CytC)、活化的Caspase-3、Bax、Bcl-2、p-Akt和p-GSK-3β的表达水平.后,用GSK-3β抑制剂TWS119处理H9C2细胞,检测GSK-3β通路抑制后姜黄素对布比卡因诱导的细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响.结果 75μmol/L开始抑制细胞增殖,因此姜黄素浓度的选择为50 μmol/L.姜黄素能够缓解布比卡因对心肌细胞增殖的抑制,减少细胞凋亡,降低CytC和Caspase-3的表达及Bax/Bcl-2值,增加p-Akt和p-GSK-3β的表达.TWS119能减弱姜黄素对布比卡因诱导的心肌细胞增殖、CytC和活化的Caspase-3表达及Bax/Bcl-2值的影响.结论 姜黄素能缓解布比卡因诱导的心肌细胞毒性,这与其激活Akt/GSK-3β信号通路、抑制线粒体凋亡通路相关.
关键词： 姜黄素 布比卡因 心肌细胞 毒性 Akt/GSK-3β信号通路 -
银胶菊内酯减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的PC12细胞损伤
目的 探讨银胶菊内酯(PTN)对脑缺血/再灌注(I/R)损伤的神经保护作用及可能机制.方法 将培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞分为对照组、氧-糖剥夺-再灌注(OGD/R)组及PTN预处理组(1、5、10和20μmol/L,各组n=3).CCK-8法检测细胞活力;酶活性检测试剂盒检测caspase-3、过氧化氢(H2 O2)酶、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性及乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS);Western blot检测Bcl-2、Bax、p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达.结果 与对照组相比,OGD/R组PC12细胞活力、LDH和ROS含量、Bcl-2表达水平、Akt和GSK-3β的磷酸化水平及H2 O2酶、SOD和GPx的活性均明显下降(P<0.05);ROS含量、Bax-1表达量和caspase-3活性均明显升高(P<0.05);与OGD/R组相比,PTN预处理能显著缓解以上变化(P<0.05).结论 PTN可以作为一种潜在的治疗脑I/R损伤的药物.
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瓜蒌薤白白酒汤通过调节Akt/GSK-3β信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤
目的:探讨瓜蒌薤白白酒汤对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI)的影响及其机制.方法:C57小鼠随机分为对照组、MIRI组、Akt抑制剂组及瓜蒌薤白白酒汤低剂量组和高剂量组.MIRI组通过Langendorff系统建立离体模型;对照组小鼠心脏持续体外灌注;瓜蒌薤白白酒汤低剂量组、高剂量组分别予瓜蒌薤白白酒汤500 mg·kg-1·d-1、1 000 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药1周,后1次给药后6h内建立离体MIRI模型;Akt抑制剂组在造模缺血前15 min和再灌注即刻给予Akt磷酸化抑制剂LY294002至灌注结束.各组干预结束后,采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色确定心肌梗死面积(IS),原位末端转移酶标记技术(TUNEL)评价心肌凋亡指数(AI),Western Blot检测磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)、Bcl-2/Bax和剪切的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)等蛋白表达水平.结果:与对照组比较,MIRI组IS和AI增加,p-Akt、p-GSK-3β和Bcl-2/Bax降低,Cleaved-Caspase-3表达上调;与MIRI组比较,瓜蒌薤白白酒汤低剂量组、高剂量组IS和AI降低,高剂量组p-Akt、p-GSK-3β和Bcl-2/Bax升高,Cleaved-Caspase-3表达下调,存在浓度梯度效应;与高剂量组比较,Akt组p-Akt、p-GSK-3β表达和Bcl-2/Bax明显下调,Cleaved-Caspase-3表达显著升高.差异均具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:瓜萎薤白白酒汤可能通过调节p-Akt/p-GSK-3β的表达减轻缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡.
