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2009年新型甲型H1N1流感病毒聚合酶编码基因的遗传特性及重要功能位点变异分析
目的 分析2009年新型甲型H1N1流感病毒聚合酶PA、PB1和PB2编码基因序列遗传的进化特征及重要功能位点变异.方法 从NCBI流感数据库中获取此次流行株的PA、PB1和PB2聚合酶编码基因序列以及不同年代、不同地区、不同宿主、不同亚型的参考序列,运用MEGA4.0软件比对和修剪此次流行株的代表序列和所有参考株序列.并用NJ法构建进化树,同时比对此次流行株的代表序列、各年代人的A/H1N1以及禽流感病毒参考序列等编码的PB2蛋白质序列.结果 不同地区、不同时间分离的2009年新型甲型H1N1流感病毒的聚合酶PA、PBl和PB2编码基因同源性均>99.8%,且聚集在一枝独特的进化枝上,与禽流感病毒接近.进化树显示三者来源皆为禽类,目前仍未发生突变;PB2的重要功能位点第627位氨基酸为谷氨酸,具有禽流感病毒的特点.结论 本次流感大流行为新型甲型H1N1病毒导致的同源爆发.但还不具备典型的高致病性,禽流感病毒可能参与了聚合酶基因的重排过程.
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一株新型甲型H1N1流感病毒H275Y的奥司他韦耐药变异分析
目的 探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化规律,分析NA蛋白酶活性位点以及糖基化位点变化情况.方法 从NCBI检索获得110株不同年代、不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用MEGA 4.0软件进行基因进化分析,并用NJ法构建进化树;对NA基因核苷酸序列同源性及编码蛋白氨基酸序列进行分析.结果 2009年新型甲型H1N1流感病毒世界各地不同毒株间的NA基因同源性极高,达到99.5%～100%,但与以往甲型H1N1人流感病毒的NA基因差异较大.2009年新型甲型H1N1流感病毒与欧洲A/swine/H1N1的NA基因同源性高,达到89.6%～92.9%,且糖基化位点分布一致,分别在50、58、63、68、88、146、235和386位存在糖基化现象.另外2009年新型甲型H1N1流感病毒与A/chicken/H5N1的NA基因同源性也较高,达到83.6%～85.3%.绝大部分2009年新型甲型H1N1流感病毒的NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,仍然表现为R118、D151、R152、R225、E277、R293、R368、Y402、E119、R156、W179、S180,D199、1223、E228、H275、E278、N295和FA25,但丹麦、日本、我国香港及湖南分离到的4株病毒出现H275Y突变.2009年新型甲型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧洲A/swine/H1N1流感病毒,并与A/chicken/H5N1病毒有较近的亲缘关系.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒并非由以往人H1N1流感病毒逐渐进化而来,而是一种新型重排病毒,我国湖南地区发现的一株新型甲型H1N1流感病毒具有H275Y奥司他韦耐药变异.
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2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化及变异特征分析
目的 了解自2009年3月新型甲型H1N1流感流行以来,其主要免疫原件基因-HA基因的进化及氨基酸变异特性.方法 从NCBI下载2009年新型甲型H1N1流感病毒以及北美地区、欧洲地区、亚洲地区以往流行的甲型H1N1流感病毒HA基因序列,利用MEGA 4.0软件对所选序列进行基因进化系统发育树分析;对2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因的核苷酸同源性及氨基酸特异性进行分析,并与北美地区、欧洲地区、亚洲地区分离株进行比较.结果 2009年新型甲型HlNl流感病毒HA基因与2006-2007年美国A/swine/H1N1流感病毒同源性高,核苷酸序列差异为0%～0.8%;与美国各州1930-2007年分离的A/swine/H1N1流感病毒具有明显的时间上的进化关系;与欧洲及亚洲地区A/swine/H1N1流感病毒进化无关.其重要的抗原性位点与A/human/H1N1流感病毒及流感疫苗株存在较大差异.全球流行半年多以来该病毒株没有发生明显变异.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因是北美A/swine/H1N1流感病毒长期进化的结果,目前尚未发现明显抗原位点的变异.
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2009年新型甲型H1N1流感病毒全基因组序列重组分析及同源性比对
目的 分析2009年新型甲型H1N1流感爆发以来流感病毒的全基因组进化变异及重组情况.方法 从NCBI基因数据库下载2009年新型甲型H1N1流感病毒(A/H1N1)代表性全基因组序列,先用MEGA4.0软件对8个基因序列片段进行比对和拼接;然后将历史上流行的H1N1、H5N1、H3N2等不同宿主(人、禽、猪)的流感病毒全基因组序列用MEGA做比对拼接,并用NJ法构建进化树.采用Simplot 3.5.1软件分析2009年新型甲型H1N1流感病毒基因重组情况.结果 自2009年3月爆发新型甲型H1N1流感以来,截至9月,病毒基因没有出现变异,同源性为99.69%～99.93%.基因重组分析显示,新型甲型H1N1病毒株PIE、PBI、PA、HA、NP和NS基因来源于近年来北美地区猪源人H1N1,同源性分别为95.25%,95.08%,95.21%,93.52%,95.23%,94.78%;NA和MP与欧洲地区猪H1N1同源性较高,分别为90.21%,94.43%.全基因序列同源性分析发现2009年新型甲型H1N1流感病毒与北美地区猪H1N1病毒同源性高,为92.22%.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒是由2005年北美地区猪H1N1病毒与欧洲猪H1N1的NA和MP片段重排进化而成,新病毒暂未发生变异,H1N1新流感疫苗具有保护作用.
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6种核酸提取试剂盒对甲型H1N1流感病毒核酸提取效果的比较
目的 研究5种国产病毒RNA提取试剂盒对甲型H1N1流感病毒检测的相对效率、耗时和成本,为各级实验室甲型H1N1流感病毒核酸提取检测提供技术参考.方法 对滴度为105 pfu/ml的甲型H1N1流感病毒参考株悬液作10-1～10-4 系列稀释,采用德国Qiagen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kits和5种国产试剂盒对上述样本进行核酸提取,用复合探针实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 对其提取效率进行平行检测,分析5种国产试剂盒与QIAamp Viral RNA Mini Kits提取效率的差异,同时对试剂盒提取时间及价格进行比较.结果 对不同稀释度流感病毒样本的提取检测,各试剂盒存在显著差异,均以QIAamp Viral RNA Mini Kits提取效率高.综合提取效率、耗时及成本等因素考虑,B试剂盒性价比高.结论 不同核酸提取试剂盒对病毒核酸的提取,可影响RT-PCR的检测效果,各实验室应根据自身条件及试验目的,合理选择性价比较高的试剂盒对临床样本进行核酸提取.
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民航乘务员甲型H1N1流感确诊一例及密切接触者八例医学观察分析
我科在2009年lO月18日至10月24日对空勤人员甲型H1N1流感确诊1例及密切接触者8例进行了治疗和临床医学观察,现报告如下:
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合并DIC的危重症甲型H1N1流感患者护理
弥散性血管内凝血(disseminated intravaseulaur coagulation DIC)是在许多疾病基础上,凝血及纤溶系统被激活,导致全身微血栓形成,凝血因子大量消耗并继发纤溶亢进,引起全身出血及微循环衰竭的临床综合征.该病死亡率高,随着医疗技术的不断发展,使许多患者重获新生.
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人感染甲型H1N1流感病毒重症死亡病例的病理学观察
目的:观察人感染甲型H1N1流感病毒重症死亡病例各主要脏器的病理改变.方法:按传染病尸体解剖要求对3例死亡病例进行系统解剖,并获得心、肝、脾、肺、脑和肾等全部脏器,组织常规HE染色和革兰氏染色,光学显微镜下观察.结果:3例病例主要致死性病变位于肺,呈现弥漫性肺泡损伤改变(坏死性细支气管炎、肺泡腔内有浆液性和/或纤维素性渗出、肺出血、肺透明膜形成),其中1例病程较长者部分区域伴肺泡上皮增生和肺间质纤维化,且合并细菌感染及肺脓肿,可见血管壁坏死,血管内血栓形成,1例有心肌水肿,1例有脑出血和脑液化性坏死.结论:人感染甲型H1N1流感病毒后主要累及呼吸系统,患者终因急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭死亡.
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环介导等温扩增检测甲型H1N1病毒核酸方法的建立
目的 建立检测甲型H1N1病毒环介导等温扩增的方法(LAMP).方法 根据已公布的甲型H1N1流感病毒HA基因序列766～995bp的6个位点设计6条LAMP引物(2条内引物,2条外引物,2条环引物),优化并建立LAMP检测体系.并对36例确诊H1 N1感染患者和20例健康体检者的咽式子同时采用实时荧光RT-PCR(Real-time RT-PCR)和LAMP进行H1N1病毒核酸的检测.结果 所建立的甲型H1N1病毒核酸LAMP反应体系具有良好的特异性,采用该体系检测结果与Real -time RT-PCR检测结果一致,对H1N1核酸阳性的标本经LAMP扩增产物电泳图为阶梯状条带,健康对照标本未见条带产生.灵敏度试验,采用103复制的H1N1质粒进行10倍稀释后LAMP法仍能检出.特异性试验,20例体检标本经两种方法检测全阴性,对肺炎支原体和肺炎衣原体阳性标本采用该反应体系进行检测结果为阴性.结论 甲型H1N1病毒核酸LAMP检测方法简便、快捷,对实验仪器设备要求不高,适合各级实验室和现场快速诊断使用.
关键词： 流感病毒A型 H1N1亚型 病毒 环介导等温扩增 实时荧光RT-PCR -
医务人员接种甲型H1N1流感疫苗抗体水平的长期随访分析
目的 调查随访大兴安岭地区医务工作者注射甲型H1N1流感疫苗后不同时间抗体水平的动态变化规律.方法 采用单纯随机抽样方法抽取内蒙古林业总医院45名甲型H1N1流感抗体阴性医务工作者为研究对象,接种国产甲型H1N1流感疫苗,接种时间为2009年10月28日～12月22日,随访统计接种后第1、2、3、27个月时的抗体滴度及阳转率.应用SPSS 16.0进行统计学处理,两组比较采用x2检验及t检验.结果 甲型H1N1流感疫苗在不同年龄组、性别间的免疫效果差异无统计学意义(P＞0.05).与第1个月抗体阳转率(95.56％)相比,随着免疫时间的推移,阳转率逐渐下降.与第1个月抗体滴度(265±92)相比,除第2个月(231±67)与其差异无统计学意义外(P=0.07),第3个月(183±88)及第27个月(46±38)抗体滴度均低于第1个月(P=0.03、P＜ 0.01).结论 内蒙古林业总医院医务工作者接种甲型H1N1流感疫苗免疫效果好,持续时间长,随访27个月时仍然有44％的人群存在保护性抗体.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 H1N1亚型 流感疫苗 抗体滴度 -
树立信心战胜流感病毒
导致这次墨西哥和美国等发生疫情的病毒为甲型(A型)流感病毒,H1N1亚型猪流感病毒毒株,该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片断,是一种新型猪流感病毒,可以人传染人.
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甲型H1N1流行性感冒聚集性爆发后社区和定点医院治疗效果调查
分析5所高校甲型H1N1流行性感冒(H1N1流感)聚集性爆发后在社区和定点医院的治疗效果.社区医院确诊病例28例,疑似病例182例,密切接触者136例;定点医院接受治疗的56例.在社区和定点医院治疗的疗效差异无统计学意义(P＞0.05).对疑似病例和密切接触者社区解除隔离后随访7 d,无新发病例.说明甲型H1N1流感可防、可控、可治,轻症病例可在社区医疗机构治疗.
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甲型H1N1流行性感冒危重症患者不同体位机械通气效果的临床观察
对甲型H1N1流行性感冒危重症急性呼吸窘迫综合征的28例患者采取平卧位、侧卧位、半卧位、侧俯卧位和俯卧位各1 h进行机械通气,观察5种不同体位患者心率、呼吸、动脉血氧分压的变化.不同卧位甲型H1N1危重症机械通气对患者呼吸、平均动脉压的影响不大,差异无统计学意义(P＞0.05);其中侧俯卧位潮气量、平均动脉压、PaO2、静态顺应性、氧化指数的变化差异有统计学意义(P＜0.05),俯卧位潮气量、平均气道压、PaO2、静态顺应性、氧合指数的变化差异有统计学意义(P＜0.01).说明俯卧位机械通气能显著改善患者的氧合状态.
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体外膜式氧合治疗新型甲型H1N1流感所致重症急性呼吸窘迫综合征患者的临床分析
目的 总结体外膜式氧合(ECMO)治疗新型甲型H1N1流感所致重症急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床经验,探讨其应用指征.方法 收集2009年12月至2010年1月北京及天津地区5家医院5个ICU收治的18例接受ECMO治疗的危重型新型甲型H1N1流感患者的临床资料,设计统一表格,由具有ECMO操作经验的医师采集资料并填写表格,主要包括患者一般情况、ECMO前一般情况、ECMO疗效及并发症、机械通气应用情况和临床转归.以SPSS 11.5统计软件包进行数据处理.结果 共有18例新型甲型H1N1流感所致重症ARDS接受ECMO治疗,男性及女性各9例(女性均为孕产妇),平均年龄(33±11)岁,其中8例并发有气压伤(6例为气胸).接受ECMO前,平均应用无创正压通气ld,有创通气60h.ECMO前2～6h生理学指标:平均氧合指数为(53±14)mm Hg,呼气末正压(PEEP)为(17±5)cm H20,Murray急性肺损伤评分3.80±0.29,pH值7.38±0.10,血乳酸(3.3±2.3)mmol/L,急性生理与慢性健康Ⅱ(APACHEⅡ)评分16±8.均采用静脉-静脉ECMO(VV-ECMO)方式,ECMO前、ECMO后2h机械通气参数设置分别为:呼吸道峰压(31±7)、(25±6)cm H2O,呼吸频率(15±4)、(22±6)次/min,吸入气氧浓度0.8～1.0、0.35～0.50,PEEP(16±5)、(12±4)cm H20.与ECMO前6h相比,ECMO后2h及24h动脉血气指标(pH,PaO2及PaCO2)均显著改善(P＜0.05).ECMO支持时间2～168 d,平均为8d.11例成功脱离ECMO(其中8例存活出院,1例仍在ICU接受治疗,2例在ICU内死亡),7例ECMO治疗过程中死亡.结论 对于常规机械通气难于支持的新型甲型H1N1流感所致重症急性ARDS,ECMO可显著改善这类患者的氧合与通气状况,使肺充分休息,为治疗原发病争取足够时间.
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天津市甲型H1N1流感死亡病例分析
目的 了解重症甲型H1 N1流感的临床特点,提高对危重症患者的诊治水平.方法 收集2009年9月1日至12月4日天津市11例甲型H1N1流感死亡患者的病历资料进行回顾性分析.结果 11例患者中男6例,女5例;中位年龄25(21～36)岁.孕妇2例,既往存在基础疾病者3例(扩张型心肌病、多发性骨髓瘤、萎缩性胃炎各1例).患者入院时影像学检查示累及肺叶均超过3个,氧合指数均＜30 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),均在24 h内给予奥司他韦、甲泼尼龙和机械通气等治疗.治疗过程中均存在顽固性低氧血症和高乳酸脱氢酶,出现气胸或纵隔气肿者4例,出现急性肾功能衰竭和脓气胸者各1例.机械通气3～7 d气道分泌物培养4例检出金黄色葡萄球菌,2例检出曲霉菌.病情均进展迅速,从出现临床症状到就诊的中位时间为4(3～6)d,从出现临床症状到死亡的中位时间为12(8～20)d.结论 天津市甲型H1N1流感死亡病例多是既往健康的中青年和孕妇,发病凶险,进展迅速,易并发细菌感染,主要死亡原因是顽固低氧引起的呼吸衰竭.
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天河口岸建立和完善科学有效的疫情信息报送制度
目的 为了推进口岸核心能力建设,全面报告天河口岸防控甲型H1N1流感的信息报送工作.方法 从八个方面,细致梳理天河口岸防控甲型H1N1流感的信息报送工作.结果 通过建立和完善科学有效的口岸疫情信息报送制度,促使天河口岸防控甲型H1N1流感见真效.结论 口岸疫情信息报送制度的建立与完善,提高了口岸应对突发公共卫生事件应急处置的效率,确保口岸公共安全.
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甲型H1N1流感合并呼吸衰竭孕产妇1年随访分析
已知妊娠是甲型H1N1流感感染的高危因素[1-3].国外研究资料表明,孕妇感染甲型H1N1流感后易进展为重症,病死率较高[4].本研究中通过分析甲型H1N1流感合并呼吸衰竭(呼衰)孕产妇住院及1年期随访的临床资料,总结妊娠合并甲型H1N1流感的临床特点及对患者健康状况的影响.1对象与方法1.1 研究对象:2009年8月20日至2010年1月10日北京地坛医院共收治甲型H1N1流感确诊孕妇32例,其中轻症20例,重症4例,危重症8例.8例危重症患者均合并呼衰,并作为研究对象,所有治疗获得患者或家属知情同意.
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3413例甲型H1N1流感疫苗接种护理体会
甲型H1N1流感是由甲型H1N1病毒引起的急性呼吸道传染病,具有较强的传染性,可通过近距离的飞沫和接触传播[1].接种甲型H1N1流感疫苗可刺激机体产生针对甲型H1N1流感病毒的抗体,是此型病毒所致流感流行的有效预防措施.我院共完成3413例甲型H1N1流感疫苗接种.为提高广大医务工作者对甲型H1N1流感疫苗的接种认识,现将疫苗接种护理体会报告如下:
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重症甲型H1N1流感病毒肺炎患者多脏器病理研究
目的:研究重症甲型H1N1流感病毒肺炎患者的临床病理学特点.方法:分析12例重症甲型H1N1流感患者临床表现特点；5例患者临床死亡5 min内穿刺获取支气管、肺、心肌、腓肠肌和肝脏组织,对各组织分别行苏木素-伊红染色、吉姆萨染色,透射电子显微镜标本制备；分别用光镜和透射电子显微镜观察各个脏器的病理学变化.结果:支气管黏膜和肺泡上皮广泛损伤,Ⅱ型肺泡上皮细胞和成纤维细胞增生,肺组织实变和纤维化显著.心肌和腓肠肌局灶性损伤和坏死,部分区域纤维化.肝细胞广泛脂肪化,小叶中央静脉和汇管区周围坏死.支气管、肺、肝、心肌和腓肠肌损伤坏死区域有大量病毒,轻度损伤和结构完整部位病毒数量少.结论:甲型H1N1流感病毒不仅能够直接感染呼吸系统引起单纯性病毒性肺炎和严重肺损伤,而且能侵犯多个器官,导致重症患者多脏器功能衰竭和死亡.
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孕产妇甲型H1N1流感危重症的临床特点及救治分析
甲型H1N1流感是由H1N1亚型流感病毒毒株引起的急性传染病,近期在我国也发生流行.为了解甲型H1N1流感孕产妇的特点,提高其临床救治水平,现将我院2009年11月-2010年1月收治的9例甲型H1N1流感孕产妇相关资料分析如下.
