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一种肠道病毒D68型感染性克隆的构建方法
目的 构建肠道病毒D68型(EV-D68)cDNA感染性克隆. 方法 利用聚合酶不完全引物延伸(Polymerase Incomplete Primer Extension,PIPE)法分别扩增EV-D68基因组cDNA片段与pBR322载体,得到的片段连接后测序,连接产物测序正确后作为载体与EV-D68的基因组的第2段扩增连接.以此类推,边扩增边连接,并测序,直到全基因组全部连接到pBR322上,在EV-D68基因组前面插入T7启动子后,经体外转录后的RNA转染RD细胞,转染后显微镜下连续观察是否出现细胞病变,并利用EV-D68的VP1特异性抗体进行免疫印迹确认. 结果 转染后24 h在显微镜下可以观察到典型的肠道病毒细胞病变,病变细胞裂解液的免疫印迹得到特异的EV-D68的VP1条带,这些结果显示包装出EV-D68病毒,这些包装的病毒经传代实验显示可以连续传代. 结论 成功构建EV-D68 cDNA感染性克隆.
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北京市EV-D68型肠道病毒引起的急性呼吸道感染
目的 了解北京地区呼吸道感染病例中EV-D68型肠道病毒感染情况,发现北京地区EV-D68型肠道病毒的流行规律,为呼吸道传染病预防控制策略的制定提供依据.方法 从监测哨点医院采集呼吸道感染病例的咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等标本,利用实时荧光PCR方法,筛查肠道病毒,利用EV-D68型肠道病毒特异性引物对肠道病毒核酸检测阳性标本进行RT-PCR扩增和测序.测序结果在NCBI中进行BLAST,分析肠道病毒血清型,并进行进化分析.结果 从2015-2016年6月份的10 494例呼吸道感染病例病原学标本中,检测到330例肠道病毒核酸阳性标本,其中两例为EV-D68型特异性引物扩增阳性,经测序证实其为EV-D68血清型.对VP1区的序列进化分析结果表明,两株EV-D68肠道病毒均属于3个已知的进化分支中的亚系1.结论 北京地区存在EV-D68型肠道病毒的流行,并可引起呼吸道感染,流行的EV-D68均属于亚系1,与国际上主要流行的亚系一致.本研究结果为阐明EV-D68病毒的流行特点提供了数据参考.
