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β-catenin在胆管癌中的表达
目的:探讨β-连环素(β-catenin)的表达与胆管癌的临床病理参数和预后的关系,寻找胆管癌早期诊断及判断预后的方法,指导临床对胆管癌的治疗.方法:采用S-P法对8例正常人胆总管、4例先天性胆总管囊肿和25例胆管癌标本中β-catenin的表达情况进行免疫组化分析研究.结果:β-catenin在胆管癌组中表达阳性率为100%,明显高于先天性胆总管囊肿(75%)和正常胆总管(62.5%)(Z=-3.03,P＜0.01).β-catenin在胆管癌的表达情况与胆管癌的病理分型(Hc=2.13,P＞0.05)、原发部位(Hc=5.25,P＞0.05)及黄疸指数(Hc=6.06,P＞0.05)无关,与分化程度(Hc=9.35,P＜0.01)、浸润深度(Hc=12.62,P＜0.01)、神经浸润程度(Hc=9.28,P＜0.01)及临床分期(Hc=15.49,P＜0.01)有关.结论:β-catenin在胆管癌中的表达情况与胆管癌的有关临床病理参数有关,可作为胆管癌预后的良好标志物.
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β-连环素与肿瘤研究进展
β-连环素(β-catenin)作为一种重要的信号转导分子和细胞间黏附分子,是近年来研究异常活跃的蛋白.多项研究结果显示β-连环素是Wnt信号转导通路的关键调控点并是构成粘附连接的E-cd/cat复合体的胞内重要组份,并通过与多种蛋白的结合参与肿瘤的发生发展、增殖分化、侵袭转移等生物学过程.本文阐述了β-cat基因、蛋白结构、表达调控、其降解与其丝/苏氨酸磷酸化的关系、及其在细胞内转运与APC基因的调控机制的联系、其出入细胞核及核内活化转录的分子机制、β-cat作为E-cd/cat复合体重要组分如何参与肿瘤浸润、转移过程;探讨了β-cat同时参与Wnt信号转导通路及E-cd/cat复合体构成的双重功能之间的辩证联系,对β-cat研究和应用前景提出了相应的设想和展望.
关键词： β-连环素 Wnt信号转导通路 E-cd/cat复合体 肿瘤 -
甲状腺癌组织MVD和β-连环素蛋白表达及其相关性研究
目的:探讨微血管密度(MVD)和β-catenin蛋白表达在甲状腺癌预后判断中的意义.方法:采用免疫组化SP法检测90例甲状腺癌及10例正常甲状腺组织中β-catenin蛋白表达,以CD105标记测定MVD.结果:①MVD值在甲状腺髓样癌、乳头状癌、未分化癌、滤泡癌中依次增高(P＜0.05);伴发转移及高临床分期(Ⅲ、Ⅳ期)甲状腺癌组织中MVD明显高于无转移及低临床分期(Ⅰ、Ⅱ期)组(P＜0.05).②未分化癌及髓样癌中β-catenin异常表达率显著高于其在乳头状癌及滤泡癌中的表达(P＜0.05),β-catenin异常表达率在淋巴结有无转移间以及病理分期Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ之间的差异有统计学意义(P＜0.05).③β-catenin异常表达与甲状腺癌MVD值呈显著正相关(r=0.384,P＜0.05).结论:MVD是影响甲状腺癌预后的因素之一,β-catenin可能在甲状腺癌组织微血管形成中发挥作用.
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E-cadherin和β-catenin在大肠癌组织中的表达及与预后的关系
目的探讨E-cd及β-cat的表达与大肠癌临床病理因素和预后的关系.方法采用免疫组化S-P法,检测139例大肠癌组织标本中E-cd及β-cat的表达.结果研究显示E-cd异常表达率与大肠癌分化程度呈负相关,与淋巴结转移及Dukes分期呈正相关.而β-cat异常表达率只与大肠癌分化程度呈负相关.且E-cd及β-cat异常表达均与不良预后相关.结论E-cd及β-cat的异常表达与刁肠癌的侵袭、转移及预后相关.
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Wnt-1、β-catenin,E-cadherin在胃癌的表达及其意义
目的 探讨Wnt-1、β-连环素、E-钙黏蛋白在胃癌的表达及其与临床病理学特征的关系.方法 应用免疫组织化学(SP法)检测180例胃癌组织和30例相应癌旁正常胃组织中Wnt-1、β-连环素、E-钙黏蛋白的表达.结果 胃癌组织中Wnt-1、β-连环素、E-钙黏蛋白异常表达率分别为54.4%、45.6%、47.2%.三者基因异常表达与正常对照比较有显著性差异(P＜0.01),三者基因异常表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、pTNM分期、分化程度及5年生存情况密切相关(P＜0.05). 结论 Wnt-1、β-连环素、E-钙黏蛋白在胃癌的进展、分化、浸润和转移中起重要作用,是判断胃癌生物学行为的良好指标.
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β-连环素与上皮型钙粘蛋白在宫颈鳞癌中的表达及意义
目的探讨β-连环素(β-cat)与上皮型钙粘蛋白(E-cad)在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义.方法应用免疫组化SP法,检测40例宫颈鳞癌,10例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和10例正常宫颈上皮组织中的β-cat与E-cad的表达.结果正常宫颈上皮组织中,β-cat与E-cad表达均显著位于细胞膜,而胞浆表达很少见;在CINⅢ与宫颈鳞癌组织中,β-cat与E-cad表达特征发生改变,胞膜表达量减少甚至缺失,呈现不同程度的胞浆表达,其中有些在细胞核内还可检出β-cat蛋白.随着肿瘤病理分级的升高,β-cat与E-cad的膜表达减弱,浆表达增强.淋巴结转移组的β-cat与E-cad的异常表达率明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论β-cat异位表达可能参与了宫颈鳞癌发生、发展过程;β-cat与E-cad胞膜表达缺失可能与宫颈鳞癌的侵袭和转移有关.
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E-cadherin/β-catenin和LYVE-1在人肺癌细胞、血管及淋巴管的表达
目的 观察E-cadherin和β-catenin在人肺癌细胞的表达,探讨E-cadherin/β-catenin复合体在癌细胞淋巴道转移机制中的作用.方法 取肺癌手术材料30例,用免疫组化法观察E-cadherin、β-catenin和LYVE-1在癌细胞、血管及淋巴管的表达.结果 癌细胞的E-cadherin、β-catenin呈阳性表达;低分化组、有淋巴结转移组E-cadherin表达减弱.淋巴管的LYVE-1阳性表达,E-cadherin阴性表达,β-catenin弱阳性表达.各分子在血管均为阴性表达.结论 LYVE-1在淋巴管特异性表达;E-cadherin表达与肿瘤分化程度和有无转移呈负相关;E-cadherin/β-catenin复合物在肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的黏附过程中不起主要作用.
关键词： 肺癌 E-钙粘蛋白 β-连环素 淋巴管内皮细胞 淋巴管内皮透明质酸受体-1 -
胃癌E钙粘素和β-连环素的表达及其临床意义
目的探讨胃癌E钙粘素(E-cadherin,E-cad)和β-连环素(β-catenin,β-cat)的表达及其临床意义.方法利用组织芯片技术,采用免疫组织化学(S-P)法检测58例胃癌、20例胃腺瘤和18例胃正常组织中E钙粘素和β-连环素基因蛋白产物的表达水平.结果胃癌E-cad异常表达率(82.8%)显著高于胃腺瘤(50.0%),E-cad的表达异常与胃癌的分化程度、淋巴结转移、浸润深度和肿瘤大小密切相关.胃癌β-cat的异常表达率(79.3%)高于胃腺瘤(60.0%),β-cat的表达异常与胃癌的分化程度、淋巴结转移密切相关,与胃癌的浸润深度、肿瘤大小无相关性.结论 E-cad和β-cat的异常表达与胃癌的分化和转移密切相关,检测E-cad和β-cat的表达可作为判断胃癌侵袭、转移的良好参考指标.
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E-cadherin,β-catenin在人膀胱移形细胞癌的表达和意义
目的:观察E-cad,β-cat在膀胱移行细胞癌组织的表达情况,探讨人膀胱移行细胞癌的侵袭、发展及转移的分子机制.方法:选取经病理诊断的不同阶段膀胱癌手术材料,采用免疫组化方法,观察E-cad、β-cat在肿瘤组织内的表达情况.结果:E-cad与β-cat表达率随癌的发生、进展而降低,异常表达相应增高,差异有统计学意义(P<0.05);E-cad和β-cat在浅表性及浸润性膀胱移行细胞癌中的表达结果显示差异均有显著性意义(P<0.05),是肿瘤恶性化的重要因素.膀胱移行细胞癌中E-acd和β-cat异常表达率具有一定的相关性,异常表达常伴随出现,在癌的发生,发展中起着重要作用.结论:E-cad和β-cat在膀胱移行细胞癌的表达降低,使癌细胞早期脱黏附促进了癌的转移,两者在膀胱移行细胞癌的表达中具有一定相关性.在癌的发生、发展中起着重要作用,与癌的分化、浸润转移密切相关,可作为判断肿瘤恶性程度及预后的指标.
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化学治疗联合靶向COX-2 siRNA对大鼠胃癌组织JAM-1、E-cadherin及β-catenin蛋白表达的影响
目的 探讨化学治疗联合靶向环氧合酶-2(COX-2)siRNA对大鼠胃癌组织连接附着分子1(JAM-1)、E钙黏素(E-cadherin)及β-连环素(β-catenin)蛋白表达的影响.方法 45只健康SD大鼠按照随机数字表法分为观察组、阴性对照组和对照组,每组各15只.观察组采用化学治疗联合COX-2 siRNA转染的胃癌细胞接种干预,阴性对照组采用化学治疗联合阴性siRNA转染的胃癌细胞接种干预,对照组采用未经siRNA转染的胃癌细胞接种干预,比较3组大鼠胃癌组织的 COX-2、JAM-1、E-cadherin 及β-catenin蛋白表达水平.结果 经COX-2 siRNA转染的胃癌SGC7901细胞凋亡率显著高于阴性siRNA转染组(P= 0.000)和未经转染的SGC7901组(P= 0.000);观察组大鼠肿瘤体积抑制率[(75.8±5.4)%]显著高于阴性对照组[(11.9±4.7)%](P= 0.000);观察组COX-2蛋白表达显著低于阴性对照组(P= 0.000)和对照组(P= 0.000);观察组大鼠肿瘤组织JAM-1、E-cadherin及β-catenin蛋白表达阳性率显著高于阴性对照组和对照组(P<0.05).结论 化学治疗联合靶向COX-2 siRNA可有效抑制大鼠胃癌组织中的COX-2蛋白表达,从而抑制肿瘤组织侵袭转移相关黏附分子 JAM-1、E-cadherin、β-catenin蛋白表达,提高治疗效果.
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吲哚美辛抑制慢性粒细胞白血病急变期CD34+细胞增殖及其机制探讨
目的:观察吲哚美辛对急变期慢性粒细胞白血病患者骨髓CD34+细胞增殖和自我更新能力的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路的角度初步探讨吲哚美辛作用的分子机制.方法:采用免疫磁珠分选技术分选获得慢性期和急变期慢性粒细胞白血病患者骨髓以及健康人脐带血标本中的CD34+细胞,并采用FCM和实时荧光定量PCR法检测CD34+细胞中β-catenin和Bcr-Ab1的表达水平.用吲哚美辛或(和)伊马替尼处理CD34+细胞后,采用FCM法检测细胞中β-catenin的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,实时荧光定量PCR法检测c-Myc和cyclin D1的mRNA水平.结果:成功分选出各标本中的CD34+细胞,其中急变期慢性粒细胞白血病患者的CD34+细胞中β-catenin和Bcr-Ab1均高表达(P值均＜0.05).吲哚美辛作用后,急变期慢性粒细胞白血病患者的CD34+细胞中β-catenin表达显著下调(P＜0.05),细胞增殖和克隆形成能力均被明显抑制(P值均＜ 0.05),并且β-catenin下游靶基因c-Myc和cyclin D1的mRNA水平也被明显下调(P值均＜ 0.05);而吲哚美辛与伊马替尼联合用药后,以上作用效果更加明显(P值均＜0.05).结论:吲哚美辛可能通过影响Wnt/β-catenin信号通路,抑制CD34+细胞的增殖和自我更新能力,从而增强伊马替尼对急变期慢性粒细胞白血病患者中CD34+细胞的杀伤力.
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结缔组织生长因子对体外模拟微环境中人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响
目的:采用体外共培养技术模拟骨肉瘤微环境,研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人骨肉瘤143B细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子作用机制.方法:将重组腺病毒AdCTGF导入骨肉瘤143B细胞,然后与骨髓基质细胞HS-5建立间接共培养体系.共培养3d后,采用MTT法检测143B细胞的增殖能力变化,划痕愈合实验和Transwell小室法检测143B细胞的迁移能力变化,RT-PCR法及蛋白质印迹法检测CTGF和β-连环素(β-catenin)的表达水平变化,蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β (phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β)的表达水平变化.结果:重组腺病毒AdCTGF感染后,共培养体系中骨肉瘤143B细胞的CTGF过表达.在体外模拟的骨肉瘤微环境中,过表达CTGF能有效促进骨肉瘤143B细胞的增殖(P＜0.01),且明显提高细胞划痕愈合率和穿膜细胞数(P＜0.01).过表达CTGF后,143B细胞中β-catenin、p-Akt和p-GSK3β表达水平均显著上调(P均＜0.05).结论:在模拟骨肉瘤微环境中过表达CTGF可促进骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K) /Akt和Wnt/β-catenin信号通路有关.
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CD 44V6、β-catenin 在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的:检测CD 44V6、β-catenin在骨肉瘤组织中的表达,分析其表达与人骨肉瘤细胞侵袭及转移能力的相关性.方法:应用免疫组织化学方法检测35例骨肉瘤、15例骨软骨瘤、15例正常骨组织中CD 44V6、β-catenin的表达.结果:骨肉瘤组织中CD 44V6、β-catenin的阳性表达显著高于骨软骨瘤及正常骨组织(P＜0.01);两者的表达分别与骨肉瘤临床分期、肿瘤转移及2年内死亡有关(P＜0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分型、术前化疗无关(P＞0.05);两者的阳性表达呈正相关(P＜0.01).结论: CD 44V6、β-catenin在骨肉瘤中的阳性表达与骨肉瘤的发生、发展和转移密切相关,可能在骨肉瘤细胞侵袭、转移的过程中起协同作用;联合检测CD 44V6、β-catenin可以作为骨肉瘤诊断及其转移预测的指标.
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针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应.方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSUPER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆.通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖.结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P<0.01).结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达.
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糖原合成酶激酶3在猪气道上皮细胞鳞状分化中作用的初步探讨
为探讨糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase 3,GSK3)在气道(气管和支气管)上皮细胞鳞状分化中的作用,培养原代猪气道上皮细胞,用GSK3的高度选择性抑制剂氯化锂处理,观察细胞形态变化,用Western blot检测β-连环素、磷酸化GSK3和鳞状分化标记物外皮蛋白的表达、RT-PCR检测鳞状分化标记物小脯氨酸丰富蛋白mRNA的表达、荧光素酶报告基因分析β-连环素/Tcf信号的激活状态.结果显示,锂能诱导猪气道上皮细胞出现鳞状形态、增加小脯氨酸丰富蛋白mRNA和外皮蛋白的表达、促进GSK3的抑制性丝氨酸磷酸化和β-连环素的细胞核内转位;锂能激活β-连环素/Tcf信号,但该作用出现于鳞状分化标记物增加之后.上述结果提示,GSK3可能参与猪气道上皮细胞的鳞状分化.
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β-连环素在子宫内膜癌中的表达及意义
目的研究粘附分子E-钙粘素的相关蛋白β-连环素在子宫内膜癌中的表达及意义,探讨其与子宫内膜癌临床各参数之间的关系.方法采用免疫组化染色链霉素亲生物素-过氧化物标记法(SP)检测子宫内膜增殖症10例及子宫内膜癌58例.结果β-连环素在子宫内膜增殖症中的表达低于子宫内膜癌,差异有显著性(P＜0.05);β-连环素在子宫内膜腺癌各病理分级中的表达不同,为高、中分化腺癌中的表达高于低分化腺癌,差异有显著性(P＜0.05).结论β-连环素的表达与子宫内膜癌的发生有关,并且与子宫内膜腺癌的病理分级有一定关系,提示β-连环素的表达在子宫内膜良性病变向恶性转化过程中起作用.
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Wnt/β-catenin信号通路在多种人前列腺癌细胞系中的表达研究及意义
目的:检测多种不同上皮细胞间质转化(EMT)特性的人前列腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达,对细胞中Wnt/β-catenin信号通路的功能状态进行鉴定,分析其在前列腺癌EMT现象中可能的作用. 方法:用Western印迹法鉴定LNCaP及其亚细胞系C4、CA-2、CA-2B和ARCaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3、DU145细胞中β-连环素(β-catenin),糖原合成酶3β(t-GSK313),磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)的表达差异情况. 结果:β-catenin和p-GSK3β在LNCaP、CA、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中表达较高,在PC-3中表达较低,在DU145中表达缺失,t-GSK3β在上述所有细胞中表达无明显差异.p-GSK3β/t-GSK3β比值在LNCaP、CA、CA-2、CA-2B、IF11、IA8中较高,在PC-3和DU145中较低. 结论:8种不同EMT特性的前列腺癌细胞系中,Wnt/β-catenin信号通路的功能状态存在差异.
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粘附分子E-钙粘素/β-连环素在LNCaP和ARCaP亚细胞系中的差异性表达及意义
目的:检测粘附分子E-钙粘素/β-连环素(E-cadherin/β-catenin)复合体在LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中的差异性表达,以探讨E-cadherin/β-catenin复合体与前列腺癌转移侵袭的关系. 方法:用Western印迹及免疫荧光鉴定LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中E-cadherin、β-catenin的表达以及分布情况. 结果:Western印迹显示E-cadherin在LNCaP细胞系中表达较高,在IF11、IA8中表达缺失,β-catenin在IF11、IA8中表达显著高于LNCaP(P<0.01).免疫荧光显示β-catenin在LNCaP细胞系中主要分布在细胞膜上,而在ARCaP亚细胞系IF11、IA8中,主要分布于细胞核中;E-cadherin在LNCaP细胞中主要分布在细胞膜上. 结论:不同上皮细胞间质转化态(EMT)特性的前列腺癌细胞系中E-cadherin/β-catenin表达以及分布存在差异,β-catenin的核转位可能是诱发前列腺癌细胞系发生EMT改变的机制之一.
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β-连环素在人表皮肿瘤组织中的表达及临床意义
目的:探讨β-连环素(catenin)在人表皮肿瘤组织中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化SABC(strept actividin-biotin complex)法检测81例人表皮肿瘤组织标本,包括光线性角化病(actinic keratosis,AK)18例,鲍恩样丘疹病(Bowenoid papulosis,BP)15例,鲍恩病(Bowen disease,BD)16例,鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)32例以及20例正常人包皮组织标本中β-catenin的表达水平,并分别统计分析比较其异常表达率在各临床病理学分级不同的疾病组中的差异.结果:①β-catenin在上述4组疾病组织中的异常表达率均明显高于正常对照组,且差异具有统计学意义(P均＜ 0.01);②各组标本中随着恶性程度的增高,β-catenin的异常表达水平亦升高,但各组间β-catenin异常表达情况的差异均无统计学意义(P均＞ 0.05),SCCⅡ期和Ⅲ期中β-catenin的异常表达水平高于Ⅰ期,但差异无统计学意义(P ＞ 0.05);③在SCC组中,β-catenin异常表达率与肿瘤浸润深度和肿瘤转移有明显相关性(P ＜ 0.05).结论:β-catenin在人表皮肿瘤的发生发展过程中起重要作用,其可能成为基因治疗的一个新方向.
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甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞Hs294T生物学活性的影响
目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞Hs294T生物学活性及其Wnt/β-连环蛋白通路的的影响.方法 用甲磺酸伊马替尼作用黑素瘤细胞Hs294T后,用MTT实验、Annexin V-PI双染色法、基质胶侵袭实验分别观察细胞增殖活性、凋亡和侵袭能力的变化.用激光共聚焦显微镜观察细胞中Wnt通路关键性蛋白分子β-连环蛋白定位的改变.用Western印迹和荧光定量PCR分别检测β-连环蛋白,靶基因细胞周期蛋白D1蛋白的表达变化,及通路转录因子LEF1、靶基因C-myc的mRNA表达的变化.结果 4～10 μmol/L浓度药物能使细胞增殖活性呈梯度下降(P＜0.05)；用10μmol/L药物可使细胞增殖能力呈时间梯度下降(P＜0.01)；与对照组相比,处理组细胞早期及晚期凋亡比例均明显增加,细胞侵袭能力显著降低约48％(P＜0.05),同时β-连环蛋白蛋白表达未见明显变化,但其胞核定位相对减少,LEF1、C-myc、细胞周期蛋白D1的表达均下调.结论 甲磺酸伊马替尼可能通过下调Wnt/β-连环蛋白通路而抑制黑素瘤细胞增殖、促进凋亡并降低侵袭力.
