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单胺氧化酶抑制剂苯乙肼对套细胞淋巴瘤细胞生长增殖的影响及相关机制研究
目的:研究单胺氧化酶抑制剂苯乙肼在体外对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞的增殖抑制作用及其可能的作用机制.方法:应用MTT方法绘制细胞生长曲线,应用流式细胞术观察细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax及1P21蛋白表达水平的变化,组蛋白H3K4单甲基化、双甲基化、三甲基化及组蛋白H3乙酰化状态的变化,以及Wnt信号转导通路相关蛋白表达水平的变化.结果:单胺氧化酶抑制剂苯乙肼可上调Bax、caspase-3、P21蛋白表达,下调Bcl-2,抑制Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并呈浓度依赖性(r=0.981);苯乙肼上调Jeko-1细胞组蛋白H3K4mel和H3K4me2水平及H3乙酰化水平,而组蛋白H3 K4me3水平无明显改变;苯乙肼处理24 h后Jeko-1细胞的WNT通路蛋白p-GSK-3β、β-catenin、c-myc、cyclinD1表达均下降(P≤0.05).结论:单胺氧化酶抑制苯乙肼能调控组蛋白甲基化、乙酰化,抑制Wnt/β-catenin信号转导通路,从而诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖,有望成为套细胞淋巴瘤的靶向治疗药物.
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Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究现况
阻断该通路可以 Wnt 信号转导通路是近年来分子生物学、细抑制癌细胞的增殖和诱导凋亡.胞生物学和肿瘤研究中的一大热点,其参与调 控细胞分化、癌变、凋亡及机体免疫、应激 等多种病理生理过程.目前许多关于癌症方面 的研究均已证实,阻断Wnt 信号通路可以诱导 癌症细胞的凋亡.肝纤维化的发生与多种信号 通路的激活相关,有研究证实Wnt 信号通路也 参与了肝纤维化的发生,阻断该通路可以抑制 HSC 增殖及诱导其凋亡.HSC 的活化作为肝纤 维化发生的关键环节,通过诱导其凋亡有可能 成为一种新的肝纤维化治疗方法.研究Wnt 信 号通路与肝纤维化关系为将来临床应用提供 一定的理论基础.
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不同牵张应力对成骨细胞MC3T3-E1分化及Wnt信号转导通路的影响研究
目的 研究不同强度和时间的机械牵张应力刺激对成骨细胞的分化及Wnt信号转导通路的影响.方法 采用FlexcellFX5000细胞加力系统,分别采用3％,6％,12％的形变幅度的正弦波对MC3T3细胞进行牵张应力干预,0.5 Hz的频率,时间分别为2,4,8h.干预结束后分别检测细胞的ALP活性;提取细胞总RNA后采用 Real time-PCR 分别检测骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)、Runx2、Osterix、Wnt1、β-catenin、DKK-1 mRNA的表达;提取细胞总蛋白后采用Werstern blot法分别检测Wnt1、β-catenin 和Phosphor-33/37-β-catenin的蛋白表达量.结果 3％和6％强度牵张干预后,成骨细胞ALP活性升高,OC、Runx2、Osterix、Wnt1、β-catenin mRNA表达升高,而DKK-1 mRNA表达下降.6％的效应高于3％,且干预4h后升高幅度大.12％强度牵张干预后,成骨细胞的ALP活性和OC mRNA表达水平下降.Wnt1、β-catenin和Phosphor-33/37-β-catenin蛋白表达水平与上述mRNA表达水平相符.结论 中小强度的牵张刺激可以上调Wnt信号转导通路,促进成骨细胞分化,而大强度及长时间连续干预则无成骨分化作用,甚至有抑制作用.
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糖原合成酶激酶-3抑制剂在骨质疏松性疾病治疗中的作用研究进展
骨质疏松症是一种全身性代谢性疾病,其主要特征为骨密度降低,易引发骨质疏松性骨折等疾病.糖原合成酶激酶-3抑制剂能够抑制糖原合成酶激酶-3活性,从而促进Wnt信号转导通路及其下游基因、蛋白的表达,主要通过促进骨髓间充质干细胞、成骨细胞增殖和分化的同时抑制破骨细胞活性,共同调节骨细胞微环境来实现对骨质疏松性疾病的治疗.现就糖原合成酶激酶-3抑制剂在骨质疏松性疾病治疗过程中的作用研究进展做一综述.
关键词： 骨质疏松症 糖原合成酶激酶-3抑制剂 Wnt信号转导通路 -
胃癌组织FRAT1表达与临床病理因素相关性分析
目的:探讨胃癌组织FRAT1的表达及其与胃癌各临床病理因素的关系.方法:采用免疫组化、RT-PCR及蛋白质印迹法检测112例胃癌组织和20例癌旁胃黏膜组织中FRAT1的表达及其在不同病理级别胃癌组织中的表达差异.结果:FRATI mRNA和蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为68.8％,明显高于癌旁胃黏膜组织的阳性表达率0,两者比较差异有统计学意义,x2 =30.23,P=0.000.FRAT1在高、中、低分化的胃癌组织中阳性表达率分别为51.6％、72.1％和78.9％,x2=6.300,P=0.043.且FRAT1的阳性表达与临床分期(P=0.013)和淋巴结转移(P=0.032)有关,而与患者的年龄和性别无关(P＞0.05).结论:FRAT1蛋白的表达率与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,且随着胃癌组织分化程度的增高而降低,随着TNM分期增高而增高.
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氟化钠对成骨细胞MC3T3-E1分化及Wnt信号转导通路的影响
目的 探究氟化钠(NaF)对成骨细胞MC3T3-E1分化及Wnt信号转导通路的影响.方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞分为实验组和对照组,实验组细胞以终浓度为0.05,0.10,0.50,1.00,2.00,3.00,5.00 mmol·L-NaF处理,对照组细胞则以等量生理盐水处理.用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测MC3T3-E1细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP含量;蛋白免疫印迹法检测MC3T3-E1细胞Wnt信号转导通路蛋白的表达.结果 0.05,0.10,0.50,1.00,2.00,3.00,5.00 mmol·L-1 NaF处理48 h后,MC3T3-E1细胞生存率分别为(99.18±2.15)％,(92.64 ±3.15)％,(83.69±2.04)％,(70.16±2.49)％,(56.15±3.57)％,(42.36±3.58)％,(29.56±1.36)％.干预24 h后,对照组和低、中、高剂量实验组(0.50,2.00,5.00 mmol·L-1 NaF) MC3T3-E1细胞ALP含量分别为(10.98±3.52),(13.26±2.96),(8.63±2.05),(7.12±1.24)U·g-1 prot,β-catenin蛋白相对表达量分别为0.88±0.02,1.23±0.06,0.68±0.05,0.35±0.05,Lrp5蛋白相对表达量分别为0.96±0.04,1.32±0.02,0.65±0.06,0.33±0.06,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 高浓度NaF可抑制MC3T3-E1细胞增殖、分化,但低浓度的NaF却可促进MC3T3-E1细胞分化,其作用机制与调控Wnt信号转导通路蛋白表达相关.
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间歇性高糖环境通过激活过氧化物酶增殖物激活受体γ下调成骨细胞Wnt信号通路
目的 研究Wnt信号转导通路在间歇性高糖环境所致成骨细胞损伤中的作用机制.方法 (1)将对数生长期的第3代成骨细胞随机分为3组:5.5mmol·L-1正常糖浓度组,25 mmol·L-1持续性高糖组,25～5 mmol·L-11QD间歇性高糖组.半定量RT-PCR法检测细胞中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)和骨形成蛋白(BMP-2)的mRNA表达情况;以免疫印迹法检测细胞中PPARγ和BMP-2蛋白表达情况.(2)正常糖浓度成骨细胞作为空白对照组、间歇性高糖成骨细胞作为模型组.在此基础上,分别给予阴性药物——Wnt蛋白阻滞剂Dickkopf 1(DKK-1)蛋白、阳性药物——Wnt蛋白激动剂氯化锂(LiCl),分为DKK-1对照组、DKK-1模型组、LiCl对照组、LiCl模型组,干预3周后,评价PPARγ、BMP-2及Wnt相关蛋白β-catenin及CyclinD1蛋白表达情况.结果 (1)干预3周后,间歇性高糖组与高糖组、正常糖浓度组的BMP-2mRNA灰度值分别是0.49±0.03,0.83±0.04,0.96±0.02;这3组的PPARγmRNA灰度值分别是0.94±0.02,0.86±0.05,0.77±0.04,组间比较差异均有统计学意义(均P ＜0.05),存在时间依赖性.(2)模型组与空白对照组比较,PPARγ表达升高,而β-catenin、CyclinD1及BMP-2蛋白表达降低;DKK-1模型组与DKK-1对照组相比,PPARγ表达升高,而β-catenin、CyclinD1及BMP-2蛋白表达明显降低;氯化锂组与DKK-1组相比,PPARγ表达降低、而β-catenin、CyclinD1及BMP-2蛋白表达都明显升高,上述指标组间两两比较,差异均有统计学差异(均P＜0.05).结论 间歇性高糖环境所致成骨细胞损伤可能与PPARγ激活后Wnt信号转导通路被抑制有关.
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β-连环蛋白与口腔鳞状细胞癌的研究进展
β-连环蛋白是一种由原癌基因编码的多功能蛋白,它在肿瘤的发生、发展过程中具有重要的作用.现将其与口腔鳞状细胞癌关系的研究进展综述如下.
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Wnt信号转导通路与细胞凋亡
细胞信号转导是各类信号通过细胞膜或细胞内信使分子引起基因表达或物质代谢改变的过程.因此,细胞信号转导过程发生障碍或异常,必然会导致细胞生长、分化、代谢及生物学行为异常,从而引起各种疾病甚至肿瘤.Wnt信号转导通路是一个由多种分子参与、相互影响、相互制约和协同作用的复杂体系;是胚胎发育、调控细胞生长增殖的关键途径.由于基因突变或稳定性增加引起该途径异常激活可以启动c-myc、cyclin、MMP-7、Survivin等下游靶基因表达异常,导致细胞增殖,抑制细胞凋亡,肿瘤形成等.Wnt信号通路作为细胞信号转导系统之一,参与肿瘤发生的机制涉及信号转导、细胞周期、细胞增殖、迁移和分化、细胞凋亡,介导细胞的黏附等多方面.
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Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究进展
肝纤维化是十分复杂的病理过程，其本质是肝星状细胞（ hepatic stellate cells，HSCs）的活化和细胞外基质（ extracellular matrix，ECM）的过度沉积。目前认为HSCs的活化与多种信号通路的激活相关。相关研究证实Wnt信号转导通路在调控肝脏病理生理的过程中起到重要作用，阻断该通路可以抑制HSCs的增殖及诱导其凋亡。本文就Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究进展进行综述。
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β-连环素与肿瘤研究进展
β-连环素(β-catenin)作为一种重要的信号转导分子和细胞间黏附分子,是近年来研究异常活跃的蛋白.多项研究结果显示β-连环素是Wnt信号转导通路的关键调控点并是构成粘附连接的E-cd/cat复合体的胞内重要组份,并通过与多种蛋白的结合参与肿瘤的发生发展、增殖分化、侵袭转移等生物学过程.本文阐述了β-cat基因、蛋白结构、表达调控、其降解与其丝/苏氨酸磷酸化的关系、及其在细胞内转运与APC基因的调控机制的联系、其出入细胞核及核内活化转录的分子机制、β-cat作为E-cd/cat复合体重要组分如何参与肿瘤浸润、转移过程;探讨了β-cat同时参与Wnt信号转导通路及E-cd/cat复合体构成的双重功能之间的辩证联系,对β-cat研究和应用前景提出了相应的设想和展望.
关键词： β-连环素 Wnt信号转导通路 E-cd/cat复合体 肿瘤 -
Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤关系的研究进展
Wnt/β-catenin信号转导通路在生物发育、细胞转运及细胞凋亡等生命过程中发挥重要作用,其异常活化与肿瘤的发生、发展有关.本文对Wnt/β-catenin信号转导通路及其新的研究进展、与肿瘤的关系和在抗肿瘤治疗中的应用前景作一综述.
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Wnt信号转导通路与肿瘤的研究进展
信号转导就是各类信号通过细胞膜或细胞内信使分子引起细胞基因表达改变的过程.因此,细胞信号转导过程发生障碍或异常,必然会导致细胞生长、分化、代谢及生物学异常,从而引起各种疾病甚至肿瘤.我们就Wnt信号转导通路及各成员与肿瘤关系的研究进展综述如下.
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wnt信号转导通路与肝纤维化
肝纤维化(hepatic fibrosis)是肝脏对各种慢性肝损伤的代偿反应所形成的一种肝脏疤痕组织,并导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、细胞群和细胞因子的复杂改变.肝星状细胞(HSC)的激活并转化为肌成纤维细胞(MFB)是肝纤维化发生的中心环节,而HSC的激活需要通过细胞内的信号转导才能实现,研究发现HSC激活过程中存在wnt信号转导通路.近年来,针对wnt信号转导通路在肝纤维化进程中的作用正成为新的研究热点.
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Wnt信号转导通路蛋白在尖锐湿疣皮损中的表达
目的: 检测Wnt基因信号转导通路相关蛋白在尖锐湿疣(CA)皮损中的表达,探讨Wnt信号转导通路在CA皮损上皮细胞过度增殖中的意义.方法: 应用免疫组织化学方法检测Wnt信号转导通路相关蛋白Wnt-1、β-连环素(β-catenin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)在CA皮损中的表达.结果: Wnt-1蛋白在CA皮损中的表达水平显著高于对照组;β-catenin 蛋白呈异常表达,且异常表达率显著高于对照组;E-cadherin蛋白在CA皮损中的表达则显著低于对照组.结论: Wnt信号转导通路可能在尖锐湿疣皮损上皮细胞过度增殖中起着重要作用,且与HPV的分型有关.
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β-catenin在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义
背景与目的:β-catenin是Wnt通路中的关键因子,在细胞粘附和信号转导中发挥着重要作用,目前已在多种人类肿瘤检测到β-catenin的高表达.本研究旨在探讨β-catenin在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中表达的临床意义.方法:选取26例MM患者(其中初治12例,复发/难治14例)和11例正常人骨髓标本,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法分别检测其β-catenin mRNA和蛋白质水平的表达,比较各组表达水平的差异,结合患者临床特征和疗效进行分析.结果:β-catenin mRNA在正常人、初治组MM患者和难治/复发组MM患者骨髓细胞中阳性率分别为27.3%(3/11)、75.0%(9/12)和100%(14/14),表达水平分别为0.35±0.17、0.72±0.11和0.85±0.16,初治和难治/复发MM患者β-catenin mRNA阳性率和表达水平均显著高于对照组(P＜0.01),而难治/复发MM组β-catenin mRNA表达水平高于初治组(P=0.045).所有的正常标本中均未检测到β-catenin蛋白,在初治MM和难治/复发MM中β-catenin蛋白阳性率分别为50.0%(6/12)和85.7%(12/14),蛋白表达水平分别为0.21±0.08和0.32±0.11,难治/复发MM组明显为高(P=0.039).10例可评价疗效的初治病例中,无效组β-catenin蛋白阳性率(100%,3/3)明显高于有效组(14.3%,1/7)(P=0.033).26例患者进行D/S分期,Ⅲ期患者β-catenin蛋白阳性率明显高于Ⅱ期患者,分别为87.5%(14/16)和40.0%(4/10)(P=0.026);进行ISS分期,Ⅲ期患者β-catenin蛋白阳性率(100%,11/11)明显高于Ⅰ期患者(45.5%,5/11)和Ⅱ期患者(33.3%,1/3)(P=0.006和0.032).18例β-catenin蛋白表达阳性患者,其β-catenin蛋白表达水平与血清β2-微球蛋白水平及血清乳酸脱氢酶水平均呈中度正相关(r分别为0.688和0.502,P值分别为0.002和0.034).结论:β-catenin蛋白表达与MM的疗效、Durin-Salmon分期和ISS分期有关,并与血清LDH、β2-MG水平呈正相关.
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沉默核仁素可诱导大鼠神经干细胞的分化
目的 探讨核仁素(nucleolin)对原代神经干细胞(NSCs)分化的影响及其相关机制.方法 构建核仁素siRNA腺病毒表达载体,将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染HEK293A细胞,包装得到具有感染能力的nucleolin-siRNA重组腺病毒.病毒体外感染原代NSCs,采用Western blot检测nucleolin蛋白的表达情况,Nucleolin-siRNA对神经干细胞Nestin、Wnt3、β-catenin蛋白表达的影响;采用免疫细胞化学检测nucleolin-siRNA对神经干细胞分化的影响.结果 经酶切和测序鉴定均证实nucleolin-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western blot检测结果显示,转染nucleolin-siRNA2的细胞nucleolin表达明显受到抑制.siRNA+组NSCs分化为NSE阳性细胞和GFAP阳性细胞的分化率明显比CON组、siRNA-组增加,且差异具有统计学意义(P<0.01).与阴性对照组相比,siRNA+组Nestin的表达明显减少,Wnt3表达明显增多,β-catenin入核明显增多,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论 本研究成功地构建了针对nucleolin基因的siRNA重组腺病毒载体,沉默nucleolin可诱导神经干细胞的分化,其机制可能与Wnt信号转导通路的激活有关.
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MiR499促进MSCs心肌样细胞分化及其机制的初步探讨
目的：探讨miR 499体外是否能诱导大鼠骨髓来源的间充质干细胞( MSCs)向心肌细胞分化,并验证其是否通过靶作用于结肠腺瘤样息肉( APC)调控WNT信号通路发挥作用。方法：在MSCs中过表达miR 499后,Q RT PCR检测心肌特异性基因GATA4、Nkx2.5、cTnI及miR 499及其靶基因APC的表达情况,双荧光素酶报告系统验证靶基因 APC。结果： miR 499、GATA4、Nkx2.5、cTnI 表达明显上调( P<0.05),但APC表达无明显差异(P＝0.3)；双荧光素酶报告系统结果显示与转染空载体组比较荧光素酶活性无明显变化( P＝0.37)；结论：miR 499可促进MSCs向心肌样细胞分化,但不通过靶作用于APC发挥促分化作用。
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姜黄素通过Wnt信号转导通路抑制肺癌细胞A549增殖的研究
目的:从研究Wnt信号通路的关键因子-核蛋白β-catenin人手,探讨姜黄素(Curcumin,Cur)可能存在的抑制肺癌细胞增殖的分子学机制.方法:MTT法检测不同浓度的Cur对肺癌细胞A549的生长抑制情况,分析药物浓度和细胞增殖抑制率之间的关系;Western blot法检测Cur作用后,A549细胞核蛋白β-catenin含量的变化;RT-PCR方法验证Cur对细胞c-myc基因表达的影响;流式细胞仪观察经Cur作用后细胞周期的改变.结果:Cur以浓度依赖方式抑制肺癌细胞A549的增殖,该药物浓度与抑制率之间有明显的线性相关性(r=0.933 3).细胞经Cur干预48 h后,核蛋白β-catenin的含量和促癌基因c-myc的表达含量均有所下降.流式细胞仪观察细胞周期的结果提示,Cur能够阻止肺癌细胞A549由G1期进入S期,提高G0/G1期细胞的百分比.结论:Cur能够抑制A549细胞胞浆内β-catenin蛋白进入胞核,阻断Wnt信号转导通路,进而抑制下游靶基因c-myc的表达,阻止肺癌细胞A549由G1期进入S期,有效抑制了A549细胞的增殖.
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Axin与细胞信号转导的研究进展
0 引言Axin(axis inhibitor)基因是1997年对天然小鼠突变系基因克隆分析中发现的编码AXIN蛋白质的基因,原名FUSED,为了避免与不相干果蝇FUSED基因混淆,并推测FUSED基因在动物胚胎体轴分化中起重要作用,将其重新命名为AXIN,即轴抑制[1,2].
