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流式细胞仪法与酶联免疫法检测HLA-B27的比较
资料与方法2007年3月~2007年10月收治患者167例,男121例,年龄4~70岁;女46例,年龄6~66岁.对167例患者的外周静脉血均采用酶联免疫分析法和流式细胞仪法两种方法进行检测.
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汉防己甲素抑制肝癌细胞增生的作用
目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,TTD)对肝癌细胞的作用及其机制.方法:采用MTT比色法观察了TTD对肝癌细胞增生的影响;采用流式细胞仪法观察了TTD对肝癌细胞内活性氧的影响;采用琼脂凝胶电泳法观察了DNA片断化的梯形条带.结果:10 and 20 μmol/L TTD作用于肝癌细胞系24,48,72 h后其增生率分别为90.1±1.0%and 77.5±2.0%,70.2±2.9%and 56.6±1.6%,61.6±2.0%and 47.2±1.9%(F=40.025,P<0.001);0、10和20μmol/L TTD作用于肝癌细胞系2 h后O2-为35%、36.6%、63.2%;H2O2.为24.5%、40.5%、84.6%.48 h后20 umol/LTTD组肝癌细胞出现典型的凋亡表现.结论:TTD能够通过诱导肝癌细胞内活性氧的产生,而引起细胞凋亡,呈明显的剂量依赖性.
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人食管癌细胞株EC-9706照射后细胞周期的研究
放射牛物学研究表明,电离辐射作用后,不同肿瘤细胞的细胞周期变化不同.本研究主要采用流式细胞仪法检测人食管癌细胞株Ec-9706接受不同剂量6 MV X射线照射后细胞周期的变化情况.
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流式细胞仪法与磁性酶联免疫吸附法检测HLA-B27的对比研究
目的:对比分析磁性酶联免疫吸附法与流式细胞仪法检测AS患者HLA-B27的临床价值。方法:选取2010年5月-2013年5月笔者所在医院门诊及住院疑诊为AS患者164例,分别应用磁性酶联免疫吸附法和流式细胞仪法检测HLA-B27,以临床诊断为参照,对比分析两种方法的特异性、敏感性及准确性等指标。结果:164例疑诊为AS患者中,确诊143例,排除21例。以临床诊断为参照标准,流式细胞仪法及磁性酶联免疫法敏感性分别为96.5%、84.6%,两方法敏感性比较差异有统计学意义(χ2=11.820,P=0.001);特异性分别为71.4%、95.2%,流式细胞仪法特异性低于磁性酶联免疫吸附法(χ2=4.286,P=0.038);准确性分别为93.3%、86.0%,两种方法比较差异有统计学意义(χ2=4.725,P=0.030);关于阳性预测值及阴性预测值,两种方法比较差异无统计学意义(χ2=2.887,P=0.090;χ2=0.625,P=0.419)。结论:磁性酶联免疫吸附法及流式细胞仪法各有优缺点,两者结合对早期AS的诊断有着重要的参考价值。
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同笑口服液佐治小儿反复呼吸道感染疗效及免疫学观察
目的 评价赖氨肌醇维生素B12口服液(商品名同笑)佐治小儿反复呼吸道感染(RRI)的疗效及对T细胞亚群的影响.方法 选择120例RRI患儿随机分成治疗组和对照组,治疗组加用同笑辅助治疗,用流式细胞仪法测定检测治疗组治疗前后T细胞亚群改变.结果 治疗组血清CD4/CD8比值增加,有效率显著高于对照组,提示同笑佐治RRI具有较好的疗效.
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库尔特手工检测法与流式细胞仪法检测 CD4淋巴细胞的比较研究
CD4淋巴细胞绝对计数是反映机体免疫状况的重要指标,可以反映人免疫缺陷病毒(HIV)感染和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的病程.其标准的检测方法是流式细胞仪法,它具有简单、快速、准确的特点,但设备相当昂贵,很难在基层推广应用.因此,寻找一种简单、快速、准确,并适合一般基层单位检测条件的方法尤为重要.本研究采用库尔特(COULTER)手工检测法(简称手工法)测定CD4淋巴细胞计数并与流式细胞仪法(简称流式法)相比较,以验证镜检法的准确性.
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高压氧抗移植排斥反应及其机制的研究
目的:探讨高压氧降低细胞免疫功能、抗移植排斥反应的机理.方法:供鼠BALB/C(H-2d),受鼠C57BL/6(H-2b),皮肤移植后,分对照组、实验组,实验组小鼠用99.2%氧气,0.25 MPa,作用1.5 h,每日一次,看高压氧对小鼠移植皮片存活时间的影响,分别于术后3 d、7 d、14 d、21 d检测小鼠脾Thy-2阳性细胞、L3T4阳性细胞、Lyt-2阳性细胞百分率的变化及IL-2产生量、对IL-2R反应性,同时做Th/Ts比值变化的比较.另外,于术后14 d,应用免疫组化法检测移植皮片局部CD+3、CD+4、CD+8、CD+11a、CD+18细胞的百分率,应用流式细胞仪法检测脾CD+3、CD+4、CD+8、CD+4CD+11a、CD+4CD+18、CD+8CD+11a、CD+8CD+18细胞的百分率,同时设环孢素A、甲基强地松龙、雷公藤多甙对照组.结果:与对照组比较,高压氧可延长不同系小鼠移植皮片存活时间约30%,在不同时间段,高压氧可使Thy-1阳性细胞、L3T4阳性细胞、Lyt-2阳性细胞百分率明显减少(P>0.01),使Th/Ts比值降低,使T细胞IL-2产生量、对IL-2R反应性降低(P>0.01).降低移植皮片局部和脾的CD+3、CD+4、CD+8、CD+4CD+11a、CD+4CD+18、CD+8CD+11a、CD+8CD+18细胞的百分率(P>0.01).与环孢素A组、甲基强地松龙组、雷公藤多甙组比较,其降低程度优于甲基强地松龙和雷公藤多甙,而不如环孢素A.同时我们也观察了MHC抗原诱导的混合淋巴细胞培养及细胞杀伤试验,结果看到高压氧可明显抑制由MHC诱导的淋巴细胞增殖及杀伤效应.因此,高压氧可明显延长异基因移植的皮片存活时间,其机理与高压氧降低了脾T淋巴细胞及其亚群的数量;减少移植局部T细胞及亚群的浸润:抑制了Th/Ti及Ts/Tc细胞膜CD11a/CD18的表达和抑制MHC诱导的淋巴细胞增殖及杀伤效应有关.
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马蔺子甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究
目的:初步探讨马蔺子甲素体外抗鼻咽癌作用和诱导鼻咽癌细胞凋亡作用.方法:细胞毒测定以MTT法,细胞凋亡的测定以流式细胞仪法.结果:马蔺子甲素对多种鼻咽癌细胞株均具有细胞毒作用,对CNE_2、SUNE_1、Fadu细胞的IC50分别为18.8±3.1、22.4±12.0、19.3±6.8μmol/L;马蔺子甲素也能诱导鼻咽癌细胞株CNE_2细胞凋亡.Fadu细胞与58.8、29.4μmol/L浓度马蔺子甲素共同培养48h,其诱导细胞的凋亡率分别为59.3%±4.5%、33.2%±2.3%,半数凋亡浓度为56.3μmol/L,且具有剂量依赖性.结论:马蔺子甲素本身也具有抗鼻咽癌作用及诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用.
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网织血小板比率测定在异基因骨髓干细胞移植中的应用
网织血小板比率(immature platelet fraction,IPF)的测定,以往均采用流式细胞仪法,但其所用仪器和试剂均较昂贵,且耗时较长,也需要专业人员,因此未能作为常规项目开展.目前,软件升级后的XE-2100血液分析仪可进行IPF的检测,我们采用这种方法对我院异基因骨髓干细胞移植(allogenic bone marrow stem cells,Allo-BMS)后患者IPF的情况进行了监测,现报告如下.
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流式细胞仪检测HLA-B27的临床意义
人类白细胞抗原(HLA)是具有高度多态性的抗原系统,HLA基因复合体定位于人第6号染色体短臂,全长约3 600kb.HLA-B27是具有遗传多态性的HLA B座位上的一个等位基因,有报道,HLA-B27与强直性脊柱炎(AS)具有高度的疾病相关性[1].我们用流式细胞仪法(FCM)检测健康体检者,背及腰腿痛者、AS患者细胞表面HLA-B27抗原的表达,现报告如下.
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大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡的研究
目的:研究大黄素(Emodin)对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用.方法:用噻唑蓝(MTT)法观察Emodin对MKN45的生长抑制作用;用DNA Ladder凝胶电泳法、荧光染色法、流式细胞仪法分析Emodin的诱导凋亡作用.结果:与对照组相比,Emodin能明显抑制MKN45细胞的生长且与浓度、时间呈依赖性,其IC50(48小时)为(47.5±0.3)μmol/L;Emodin处理胃癌细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带;吖啶橙(AO)染色观察示细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成;流式细胞仪分析Emodin能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞.结论:Emodin对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与诱导细胞凋亡有关.
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细胞因子诱导的杀伤细胞体外抗胶质瘤的实验研究
背景和目的:胶质瘤常规的治疗方法如手术、放疗和化疗都有不尽人意的地方,免疫治疗已成为肿瘤的第4种治疗模式,CIK细胞的过继免疫治疗可望成为一种有前途的辅助治疗方法.本实验观察胶质瘤患者细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的特性,CIK细胞对胶质瘤的体外杀伤活性.方法:分离胶质瘤患者的外周血单个核细胞(PBMCs),加入不同的细胞因子,体外培养成CIK细胞;用流式细胞仪对CIK细胞进行动态表型分析;采用MTT法测定胶质瘤患者及正常人CIK细胞体外细胞毒活性.结果:CD3+/CD56+双阳性细胞迅速增多,由起初的3.45%上升到第30天的55.2%;CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性在一定程度上与效靶比呈数量依赖关系,培养第18天左右杀伤活力达高峰,CIK细胞的杀伤活性高于LAK细胞,胶质瘤患者CIK细胞杀伤活力较正常人低下.结论:CIK细胞对胶质瘤具有较好的杀伤活性,较LAK细胞更适于临床治疗.
关键词: 细胞因子诱导的杀伤细胞 胶质瘤 MTT法 过继性免疫治疗 流式细胞仪法