首页 > 文献资料
-
恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞高效体外扩增的方法
探讨从恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)中高效扩增淋巴细胞的方法,取3例恶性肿瘤患者的PBMCs,每例患者重复3次,在GMP实验室体系下,经淋巴细胞刺激因子体外诱导扩增淋巴细胞和观察扩增情况,应用流式细胞仪分析扩增前后总CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞、CD3 CD16+56+(NK细胞)、CD3+CD16+56+(NKT细胞)以及CD4+和CD8+T细胞比值的变化,分析培养前后各淋巴细胞亚群的扩增情况和重复性,同时观察淋巴细胞体外扩增培养后回输患者的生物安全性.结果表明,CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD16+56+细胞比例较培养前明显增加(P＜0.01),而CD3+CD4+、CD3 CD16+56+细胞比例、CD4+和CD8+T细胞比值则明显的降低(P＜0.01).CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD16+56+细胞增殖倍数的中位数分别为487.9、832.5和2540.6;而CD3+CD4+和CD3 CD16+56+则分别为159.6和155.5.细胞体外扩增培养前后亚型和扩增倍数的重复性较差,在本研究中只有CD3+T细胞在体外培养前后、CD3+CD16+56+细胞在培养后的CV值在10%以内.培养扩增后淋巴细胞细菌、真菌、支原体、外来病毒及内毒素检查后无阳性发现,所有患者细胞回输治疗后无明显的毒副反应.在本研究体系下体外诱导扩增培养肿瘤患者自体外周血NK细胞及致敏淋巴细胞效率较高,细胞毒性细胞比例增高较大,具有良好的生物安全性,为恶性肿瘤患者应用NK细胞进行过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法.
-
Ad5F11p-GFP对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响
目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用.方法:用Ad5F11 p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,用显微镜观察形态学变化,用台盼蓝染色计数分析细胞的增殖,并用LDH法检测NK-92对白血病细胞系K562和HL-60的杀伤作用.结果:25MOI的Ad5F11 p-GFP对NK-92的转染效率可以达到大约90％,200 MOI的Ad5 F11 p-GFP对CIK转染效率不到40％,同一MOI在48 h和96 h时转染效率基本不变;转染Ad5 F11 p-GFP的免疫细胞容易聚团,增殖减慢,IFN-γ的释放增加并且对肿瘤的杀伤活性增强.结论:Ad5F11p载体修饰的NK-92在过继性免疫治疗中有较好的应用前景.
关键词： Ad5F11p-GFP CIK细胞 NK-92细胞 过继性免疫治疗 转染效率 -
血液透析导管在单个核细胞采集中的应用和护理
肿瘤病人在手术、放疗及化疗后,免疫功能低下,肿瘤细胞负荷低,此时运用细胞过继性免疫治疗在临床上已取得了确切的疗效[1].但是肿瘤患者在应用细胞过继性免疫治疗进行单个核细胞采集(简称单采)时,常常因为化疗后血管细,血管弹性差,导致静脉穿刺失败;或因凝血机制异常等原因,导致血液流速缓慢,机器出现低血流报警,而导致单采不能正常进行.
-
DC-CIK 免疫治疗在血液肿瘤中的应用与展望
树突状细胞（dendritic cells，DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer cells，CIK）联合过继性免疫治疗具有高效的杀瘤活性，被认为是目前有前途的肿瘤免疫治疗手段之一。DC 与 CIK 共培养，构成了一个体外活化免疫体系，回输后能够有效地抵抗癌细胞对免疫细胞的抑制作用，发挥更持久的杀瘤活性，是主动特异性免疫治疗和过继免疫治疗相结合的典范。随着对其生物特性的深入了解，DC-CIK 已应用于多种恶性肿瘤的细胞免疫治疗中，众多研究表明在应用 DC-CIK 细胞免疫治疗后明显的延长了患者生存期，提高了生存质量，减少了肿瘤的复发和转移。本文就 DC-CIK 在治疗血液肿瘤中的应用做一文献综述。
关键词： 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 过继性免疫治疗 血液肿瘤 -
DC-CIK细胞免疫治疗应用
目的：：研究DC-CIK在肿瘤中的应用,为DC-CIK的制备及临床细胞治疗技术探索便捷、高效和经济可行的方案。结果：树突状细胞( dendritic cells, DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞( Cytokine-in-duced killer cells, CIK)联合过继性免疫治疗因其具有高效的杀瘤活性,被认为是目前有前途的肿瘤免疫治疗手段之一。 DC与CIK共培养,构成了一个体外活化免疫体系,回输后能够有效地抵抗癌细胞对免疫细胞的抑制作用,发挥更持久的杀瘤活性,是主动特异性免疫治疗和过继免疫治疗相结合的典范。然而作为一个新的治疗手段,DC-CIK过继免疫治疗的方案和标准尚待进一步规范和统一。不良反应、应用时机、给药途径和方法等问题亦需要深入探讨。结论：DC-CIK已应用于多种恶性肿瘤的细胞免疫治疗中,众多研究表明在应用DC-CIK细胞免疫治疗后明显的延长了患者生存期、提高生存质量、并减少了肿瘤的复发和转移。随着DC-CIK过继性免疫治疗技术的不断改进和完善,DC-CIK必将成为新一代过继细胞免疫治疗的佳方法之一。
关键词： 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 过继性免疫治疗 血液肿瘤 -
人末梢血γδT细胞对消化系统肿瘤细胞的杀伤作用
目的:探讨人末梢血扩增的γδT细胞对常见的消化系统肿瘤细胞株的杀伤作用.方法:用含IPP和IL-2的RPMI 1640培养基扩增人外周血γδT细胞,用流式细胞术检测培养10 d的γδT细胞的纯度.用扩增后的γδT细胞与人胃癌细胞株、胰腺癌细胞株和肝癌细胞株按不同效靶比例孵育后进行细胞毒活性测定.结果:人末梢血单个核细胞经过培养扩增10 d时γδT细胞迅速从4.21%扩增到70.35%.培养10 d时贴壁生长的γδT细胞对人胃癌细胞株、胰腺癌细胞株和肝癌细胞株均有较强的杀伤活性,在效靶比例为40∶1时细胞毒活性分别为61%、50%和59%,高于悬浮生长的γδT(分别为50%、37%和37%)和CIK(分别为45%、34%和40%)细胞毒活性.结论:人末梢血扩增的γδT细胞对消化系统常见的肿瘤细胞有较强的杀伤作用,贴壁生长的γδT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用强于悬浮生长的γδT细胞和CIK细胞.γδT细胞将是肿瘤细胞免疫治疗中又一类重要的免疫效应细胞.
-
过继性免疫治疗自身免疫性肝炎的研究进展
自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种自身免疫紊乱导致的慢性炎症性肝疾病,它以其独特的临床和病理学特征,受到越来越多的关注.欧洲流行病学研究数据显示,AIH的发病率正在逐年增高,但其发病机制尚不明确,针对性的治疗手段有限.AIH的免疫治疗在近几年得到广泛研究,特别是在过继性免疫治疗方面不断创新.本文对AIH过继性免疫治疗中采用的不同免疫细胞的作用机制、临床应用等进行总结,为以后AIH的治疗提供理论依据.
-
反应性氧代谢物逆转剂对微小残留白血病的治疗作用
反应性氧代谢物(reactive oxygen metabolites, ROM)是在机体代谢过程中产生,包括单线态氧(IO2)、超氧阴离子自由基(O·2)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH-)、脂质自由基(R*)和低氯酸(CCl3O-2*)等,其主要作用包括活化单核/巨噬细胞的吞噬功能,氧化修饰生物大分子从而调节细胞的分化、增殖、基因表达等.近年来的研究发现ROM与肿瘤的发生、发展密切相关,在微小残留白血病(MRL)的过继性免疫治疗中,ROM可通过抑制T/NK细胞的活性而影响MRL的根除,应用ROM逆转剂可能改变这种结局.
-
白血病过继性免疫治疗存在的问题及对策
微小残留白血病(MRL)是造成白血病难治和复发的主要原因.依靠提高剂量及加强化、放疗等手段难以完全清除MRL,且治疗相关的毒副作用大.人们早已认识到白血病的彻底治愈,很大程度上依赖于机体免疫系统对MRL的清除作用[1],在白血病采用自体或同基因造血干细胞移植(HSCT)时复发率远高于异基因HSCT等事实充分地验证了这一点,其主要原因是后者产生了移植物抗白血病(GVL)效应,从而达到彻底清除白血病细胞的目的.然而,白血病患者经化疗后机体处于免疫抑制状态,加之白血病细胞可通过多种机制逃避机体的免疫应答,单靠患者自身的免疫功能难以实现根治白血病的目的.因此,现代医学采取了一系列的免疫干预措施,提高对MRL的免疫治疗效应.在临床上已有抗CD20、抗CD52、抗CD33等单抗的成功应用,并取得相当的疗效.在细胞免疫方面,采取了一系列过继性免疫治疗手段,如供者淋巴细胞输注(DLI)、各种细胞因子的应用、树突状细胞(DC)体外扩增及其修饰以及肿瘤疫苗的应用,均取得一定疗效,但也存在着有待克服的问题.
-
肿瘤过继性免疫治疗研究进展
恶性肿瘤是危害人类健康的严重的疾病之一,并且其发病率在我国仍呈上升趋势.随着手术、化疗及放疗技术的发展,肿瘤患者的预后有了一定改善,但不可否认的是,即使是早期诊断、及时治疗,对恶性肿瘤的治疗效果仍不能令人满意.过继性免疫治疗(ACI)是指向肿瘤患者回输具有抗肿瘤活性的免疫细胞(包括特异性的和非特异性的),直接或激发机体免疫反应以杀伤肿瘤细胞,达到治疗肿瘤的目的,尤其适用于细胞免疫功能低下的患者.近年来,细胞介导的ACI已经成为治疗或辅助治疗肿瘤的重要手段之一[1].现将目前ACI治疗肿瘤的研究现状及其在临床中的应用综述如下.
-
肿瘤免疫治疗的研究进展
与以往的手术、化疗、放疗和靶向治疗不同,肿瘤免疫治疗是一种通过激活人体自身免疫系统来对抗肿瘤的治疗手段.近年来,针对免疫检查点的单抗在抗癌治疗中取得的成绩已成为癌症治疗史上里程碑式的事件,使人们认识到癌症的基因问题不是故事的全部,驱使研究者转而关注免疫治疗.肿瘤免疫治疗有多种治疗策略,包括非特异性免疫刺激剂、肿瘤疫苗、过继性免疫细胞疗法以及单抗治疗.由于肿瘤具有极大的异质性和遗传不稳定性,其发病机制复杂,单独依靠某一种治疗手段难以达到理想的抗肿瘤效果,因此在深入研究不同治疗手段之间相互作用机制的基础上,联合包括肿瘤靶向治疗、细胞毒化合物治疗、以及不同类型免疫治疗的抗肿瘤策略可能是未来的方向.
-
扩增活化的自体淋巴细胞过继性细胞免疫治疗小细胞肺癌
目的：研初步探讨扩增活化的自体淋巴细胞（expanded activated autologous lymphocytes, EAAL）过继性细胞免疫治疗在小细胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC）的疗效。方法：在层流实验室体系下，由SCLC患者外周血单个核淋巴细胞体外诱导扩增EAAL细胞，应用流式细胞术检测其细胞表型。然后回顾性分析2008年5月～2010年10月在本院接受过EAAL免疫治疗以及未接受过EAAL免疫治疗的各16例SCLC患者的临床资料，分析比较EAAL治疗组和对照组总生存期(OS)的差异。结果：经过体外培养和扩增，EAAL细胞表型与培养前外周血淋巴细胞相比，CD3+、CD3+CD8+、CD45RO+、CD25+、CD29+以及CD3+CD16+/CD56+细胞的比例明显增加(P<0.05)。EAAL治疗组和对照组的OS分别为17.4个月和10.0个月，两者差异无统计学意义（P=0.060,HR=0.487,95%CI 0.228~1.037）。EAAL治疗组1~3年生存率分别为81.25%、25.0%和18.75%，而对照组1~3年生存率则分别为43.75%、6.25%和0%，两者差异也无统计学意义(P>0.05)。COX多因素回归分析结果显示EAAL细胞免疫治疗是SCLC患者总生存时间延长的独立预后风险因素之一。亚组分析结果显示女性及化疗≤6周期SCLC患者的OS经EAAL免疫治疗后得到了延长(P<0.05)。结论：EAAL过继性细胞免疫治疗可能能够延长SCLC患者的OS。
关键词： 过继性免疫治疗 小细胞肺癌 扩增活化的自体淋巴细胞 流式细胞术 回顾性临床观察 -
CIK细胞与树突状细胞共培养后抗肿瘤效应的研究
目的 观察CIK 细胞与抗原刺激的树突状细胞共培养后的增殖情况、免疫表型、分泌的细胞因子水平及抗肿瘤效应的变化.方法 无菌采集新鲜脐血,加入细胞因子分别定向诱导培养成DC、CIK细胞,然后将两种细胞混合,分为CIK-A-DC组( 试验组)、DC-CIK组和单纯CIK 组( 对照组),观察细胞的形态和增殖状况,ELISA法测定细胞因子分泌水平的差异,并测定其对肿瘤细胞的凋亡及杀伤情况.结果 共培养后CIK 细胞的增殖倍率增高,分泌细胞因子的水平也明显升高.流式检测显示共培养后的CIK 细胞对肿瘤凋亡率高,MTT 法显示共培养后的CIK细胞杀伤肿瘤的活性增强,且具有抗原特异性.结论 树突状细胞可明显增强其相同来源的CIK 细胞的抗肿瘤效应,为肿瘤细胞的过继性免疫治疗提供了一个新的方向.
-
自身细胞因子诱导杀伤细胞过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床观察
目的 分析探讨自身细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床疗效.方法 选取我院在2015年6月至2017年10月所收治的45例恶性肿瘤患者作为研究对象,分离患者自身单个核细胞,以细胞因子诱导激活,使其大量增殖,制备CIK细胞,对患者进行治疗,观察相应治疗效果.结果 5例患者为完全缓解(CR),15例患者为部分缓解(PR),10例患者好转(MR),10例患者病情稳定(SD),6例患者为进展(PD),疾病治疗的总控制率为86.67％,患者的生命质量得到明显提升,在治疗期间除3例患者有发热症状外,其余病例均无明显不良反应.结论 自身细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床疗效确切,能有效改善及提升患者自身免疫力,且不良反应较小,因而值得在临床上推广使用.
-
鼻咽癌的免疫治疗进展
鼻咽癌是一种与EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）相关的恶性肿瘤，单纯放疗或同步放化疗是鼻咽癌重要的治疗手段，且取得较好的疗效，但局部晚期或远处转移的鼻咽癌患者预后仍较差。目前，免疫治疗已成为实体肿瘤治疗的新方向，其主要通过激活机体的免疫系统从而达到抗肿瘤的目的。本文旨在探讨免疫治疗如过继性免疫治疗、肿瘤疫苗、免疫节点抑制剂等在鼻咽癌治疗中的进展。
-
肿瘤的过继性免疫治疗
生物免疫治疗被认为是继手术、放疗、化疗之后,对肿瘤具有确切效果的又一治疗方法.而生物免疫治疗中以过继性免疫治疗为成熟,它包括在体外选择扩增效应细胞和将效应细胞回输给肿瘤病人两个主要过程,尤其适用于治疗细胞免疫功能低下者,如接受大剂量放、化疗,骨髓移植或因病毒感染而损伤免疫细胞数量及功能的患者.本文对近年来过继性免疫治疗的进展与局限加以综述.
-
DC-CIK免疫治疗在原发性肝癌治疗中的应用进展〔1〕
原发性肝癌（ PLC，以下简称肝癌）是全球第五位常见恶性肿瘤，高居全球肿瘤致死病因第三位，其中约55豫发生在中国［1］。目前肝癌的主要治疗手段是以手术为主辅以介入治疗、化学栓塞治疗、生物靶向治疗等方式的综合治疗。其中，手术切除和肝移植是根治手段，但仅有15豫的患者有机会接受根治手术治疗，即使接受根治手术的患者，其5年复发率仍高达60豫［2］。因此探索肝癌新的治疗手段具有很重要的意义。随着分子生物学和肿瘤免疫学的发展，以及对肿瘤发病机制的研究，发现肿瘤的发生、发展、转移、复发与机体的免疫功能密切相关［3-4］。因此专注于打破免疫耐受、恢复和激活机体抗肿瘤免疫的生物治疗成为了继手术、放疗、化疗后肿瘤治疗的新方法。目前生物治疗主要包括过继免疫治疗、肿瘤疫苗治疗、分子靶向治疗和基因治疗等［2］。其中尤以树突状细胞共培养的细胞诱导的杀伤细胞（ DC -CIK ）免疫细胞为突出。DC -CIK细胞作为新型的免疫活性细胞，与其他过继性免疫治疗细胞相比，具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非主要组织相容性复合体（ MHC ）限制性等优点［5-6］。目前国内外应用 DC -CIK 细胞治疗与其他治疗手段相结合，用于治疗原发性肝癌，取得了较好的疗效，展示出良好的应用前景。
-
乳腺癌患者自体与异体 CIK 细胞抗肿瘤效应的研究
目的：比较乳腺癌患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine －induced killer cells ，CIK）与异体（健康成人）CIK细胞的抗肿瘤效应。方法应用常规方法分别自乳腺癌患者及健康成人外周血单个核细胞诱导CIK 细胞，用流式细胞术分析免疫表型，ELISA 法测定其分泌干扰素－γ（IFN －γ）水平。同时应用乳酸脱氢酶法（LDH）检测两组CIK细胞对人乳腺癌细胞株SKBR－3的杀伤活性。结果异体CIK细胞增殖能力明显高于自体CIK细胞（ P＜0．01），CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋细胞比率较相同条件下自体CIK细胞组显著增多（ P＜0．05）。培养第15日，异体CIK细胞分泌IFN －γ水平高于自体CIK细胞（ P＜0．05），且对人乳腺癌细胞株SKBR－3细胞的杀伤率显著高于自体CIK细胞（ P＜0．01）。结论健康成人CIK 细胞比乳腺癌患者的自体CIK 细胞有更强的抗肿瘤效应。
-
肿瘤生物治疗的原理和临床应用现状
自八十年代Rosenberg发现IL-2体外激活淋巴细胞(lymphokine-activated killer LAK)对多种肿瘤细胞有强大的杀伤作用,LAK细胞很快用于多种肿瘤的治疗并取得了一定疗效,肿瘤生物治疗很快成为肿瘤治疗的一部分,并被称为继手术、化疗和放疗之后肿瘤的第四种治疗模式.根据肿瘤生物治疗的原理不同,可分为主动特异性和被动过继性免疫治疗.
-
细胞因子诱导的杀伤细胞2种回输方法治疗原发性肝癌的不良反应观察
原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC)患者经手术、化疗及放疗后难以改变其生存质量,且预后极差[1].近年来生物治疗运用在临床中已显示其独特优势,细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞在体内外增生能力强,具有强大的抗肿瘤活性,可以满足过继性免疫治疗中抗肿瘤细胞的要求[2,3],已成为肝癌手术、放疗、化疗后的一种新的治疗模式.
