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基因枪注射GM-CSF基因同时局部注射肿瘤提取物治疗肿瘤的初步观察
GM-CSF具有刺激树突状细胞分化成熟、诱导粒细胞和巨噬细胞系增殖分化以及调节免疫应答的作用。在已知的细胞因子中，GM-CSF是抗肿瘤免疫治疗中重要的因子之一〔1〕。以GM-CSF为基础的肿瘤免疫治疗已进行了较深入和广泛的临床实验，并展现了较好的应用前景〔2〕。为了进一步探讨高效方便的肿瘤免疫治疗新方法，我们用基因枪将含小鼠GM-CSF基因的载体注射于小鼠局部皮肤，于注射部位接种小鼠肿瘤细胞的冻融上清，观察小鼠产生抵抗肿瘤细胞攻击的能力。
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γδT 细胞对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2OS的杀伤作用
目的 探讨γδT细胞对耐甲氨蝶呤( MTX)骨肉瘤( OS)细胞的杀伤作用. 方法 以MTX为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导建立人耐MTX OS细胞株U2OS/MTX细胞. 使用唑来膦酸( ZOL)联合IL-2体外扩增人γδT细胞,乳酸脱氢酶释放法( LDH)检测γδT细胞对U2OS/MTX细胞株的杀伤活性,流式细胞技术检测γδT细胞表面CD69的表达,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测γδT细胞IFN-γ的分泌. 结果 健康人外周血单个核细胞( PBMC)来源的γδT细胞具有杀伤U2OS/MTX耐药细胞株的能力. 经过ZOL(1 μmol/L) 24 h预处理U2OS/MTX耐药细胞株,γδT细胞杀伤U2OS/MTX耐药细胞株的能力显著增加(P<0.01). U2OS和U2OS/MTX耐药细胞株均能提高γδT细胞表面CD69的表达和IFN-γ的分泌(P<0.05);ZOL(1 μmol/L) 24 h预处理U2OS/MTX耐药细胞株后可显著增强γδT细胞表面CD69的表达和IFN-γ的分泌(P<0.01). 结论 γδT细胞对人OS细胞株U2OS/MTX具有杀伤作用,ZOL能增强γδT细胞对人OS细胞株U2OS/MTX的杀伤作用.
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pMAGE-Al/EGFP转染的人树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应的研究
树突状细胞(DC)是目前已知功能强的抗原提呈细胞,被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗[1].肿瘤特异性抗原MAGE-Al在不同来源肿瘤组织中有较高表达[2],因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视.本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-Al/EGFP,体外电转染人人外周血单核细胞来源DC,并评价其体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,以期为临床开展MAGE-Al为基础的免疫治疗提供有利的分子生物学工具.
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人急性髓系白血病HL-60来源的树突样细胞诱导的CTL体内外作用研究
目的观察人急性髓系白血病HL-60来源的树突样细胞(HL-60DC)对细胞毒T淋巴细胞(CTL)的免疫调节作用. 方法采用PKC激活剂佛波酯(PMA)及细胞因子GM-CSF、IL-4、TNF-α在体外诱导培养HL-60细胞,获得具有树突状细胞形态、表型(CD1a、CD80、CD86、RelB阳性表达)的HL-60DC,观察HL-60DC诱导的CTL体外抗瘤效应,并建立人白血病HL-60/SCID(严重联合免疫缺陷)小鼠异种移植模型进行过继治疗. 结果联合GM-CSF、TNF-α及PMA处理7～11d,获得的HL-60DC体外激活的CTL在体外对HL-60细胞有显著的细胞毒活性.CTL以5∶1效靶比多次腹腔回输,能够明显延长荷瘤鼠存活时间,降低瘤块重量,减轻肝、脾、骨髓受肿瘤浸润程度,但流式细胞检测发现部分受治疗的存活小鼠有微小病灶的存在.结论人急性髓系白血病HL-60来源的树突样细胞诱导的CTL在体内外有一定的抗瘤效应.
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糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白的制备及抗肿瘤作用研究
目的制备糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白(mB7.1-GPI),研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用. 方法用已构建的重组糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1的表达载体pcDNA3.1(+)/mB7.1-GPI,转染到CHO细胞中,表达和纯化mB7.1-GPI.采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用.建立C57BL/6小鼠的淋巴瘤模型,观察用mB7.1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用. 结果 mB7.1-GPI融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2与IFN-γ.融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期. 结论糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防.
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sPD-1封闭PD-L促进抗瘤免疫的机制研究
目的研究本室构建的可溶性PD-1(sPD-1)真核表达质粒pPD-1A的抑瘤机理.方法用转染了pPD-1A的BHK细胞分泌产物去封闭树突状细胞上的PD-1配体(PD-L),并用MTT法检测树突状细胞(DC)对小鼠脾细胞的增殖激活作用.BALB/c小鼠接种H22肝癌细胞后次日开始接受质粒pPD-1A的注射.用RT-PCR法分析小鼠脾细胞的细胞因子和共刺激分子的mRNA表达水平,用流式细胞术测定肿瘤内T淋巴细胞的数量.结果在淋巴细胞活化的早期sPD-1对IL-10-DC激活淋巴细胞的作用有一定的促进,但作用并不十分显著(P＞0.05).注射了质粒pPD-1A的小鼠产生了较强的抗瘤免疫反应,H22肝癌细胞的生长明显受到抑制(P＜0.01).脾脏淋巴细胞的4-1BB、B7.1、IFN-γ和TNF-α表达均上调,以IFN-γ的增加明显;OX40、IL-10表达下调.肿瘤内TIL数量明显增多(75.86%).结论sPD-1通过对PD-L的封闭,不仅增加了肿瘤内部CD3+T细胞的数量,而且可以调节细胞因子和共刺激分子的表达,从而促进抗瘤免疫.
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抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞免疫学特性影响的研究
目的研究特异性抗HPV16E6核酶的转染对宫颈癌细胞免疫学特性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞，命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。流式细胞仪分别检测3种细胞HLA-1、HLA-2、B7-1和B7-2基因的表达，分析CaSKi细胞转染核酶后免疫学特性的变化。诱导制备NK、LAK、CD3AK和肿瘤细胞共激活杀伤细胞，检测各种免疫细胞对CaSKi-R、CaSKi-P、CaSKi细胞的杀伤效应。结果 CaSKi和CaSKi-P细胞中HLA-2、B7-1、B7-2表达都很低，两者差异无显著性。CaSKi-R中HLA-2、B7-1、B7-2表达率均明显升高。3种细胞中HLA-1表达率都很高。NK、LAK、CD3AK细胞对CaSKi-R细胞杀伤率显著高于CaSKi细胞，CaSKi、CaSKi-R分别与rIL-2共激活杀伤细胞（称CASKI和CASKI-R）的杀伤活性无明显差别，对CaSKi-R的杀伤活性高于CaSKi细胞。而各种免疫细胞对CaSKi-P细胞的杀伤率与CaSKi细胞差异无显著性。结论抗HPV16E6-ribozyme的导入能使宫颈癌CaSKi细胞易于被机体免疫系统识别杀伤，难于免疫逃避，但不能增强其免疫原性。
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慢性乙型肝炎患者TH1/TH2细胞因子应答状况
IL-10和IFN-γ分属于TH1、TH2类细胞因子，它们在乙型肝炎病毒(HBV)持续感染的发生机理中起重要作用。为了探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV抗原特异性TH1/TH2类细胞因子应答情况，我们选择43名此前未行免疫治疗或抗病毒治疗并经肝脏穿刺活检证实的CHB患者，并以年龄近似的10名体健者作为正常对照。常规分离外周血单核细胞(PBMC)，以106/ml的密度接种于24孔板，加入终浓度为1μg/ml的rHBcAg刺激培养72?h，用ELISA法检测培养上清中IL-10(pg/ml)和IFN-γ(pg/ml)的含量。结果表明，CHB病人PBMC培养上清中IFN-γ水平与正常对照组比较无明显差异(501.02±131.73 vs 534.46±121.33)，IL-10水平则增高，与正常对照组相比差异非常显著(398.74±79.55 vs 279.45±67.93,P<0.001)。将CHB病人按血清病毒定量分为A(HBV DNA定量<20pg/ml)、B(HBV DNA定量为20～200pg/ml)、C(HBV DNA定量>200pg/ml) 3组，各组IFN-γ平均值为618.13±97.01，469.82±80.11，405.38±98.98，B、C组与A组比较P<0.01;IL-10水平依次为，330.51±59.73，400.44±69.52，466.11±71.49，可见在高病毒量组IL-10水平明显较高，A组与C组比较，P<0.001;B组与C组比较，P<0.01。
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肺癌患者血清sIL-2R、IL-2及IL-10相关性研究
本文研究拟通过检测肺癌血清中sIL-2R、IL-2与IL-10水平的变化,探讨肺癌患者血清sIL-2R、IL-2与IL-10相关性,为肺癌的免疫治疗提供参考依据.
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肿瘤抗原p185蛋白免疫鼠脾细胞的抗瘤效应研究
目的 研究肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗所诱导的抗肿瘤效应.方法 亲和层析纯化的p185蛋白皮下注射正常BALB/c小鼠,取脾细胞分别与p185蛋白、3T3-neu细胞体外共培养,以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照,观察其培养上清中IFN-γ和TNF-α活性.将免疫鼠脾淋巴细胞经p185抗原和低剂量的IL-2体外培养1周后,再用CD3抗体刺激扩增,用流式细胞仪分析其细胞表型.3T3-neu和3T3细胞分别接种于裸鼠腋窝皮下验证其致瘤性.选择具有致瘤性的3T3-neu细胞与经抗CD3抗体扩增的免疫鼠脾细胞体外混合后(19)接种于裸鼠腋窝皮下,以3T3-neu细胞单独或与CD3抗体活化的正常鼠脾细胞(CD3-AK)混合后,同法接种于裸鼠腋窝皮下观察其成瘤时间和带瘤宿主的存活期.结果 免疫鼠脾细胞培养上清中IFN-γ活性为40.27±9.6U/ml,也具有产生较高TNF-α能力.对照组未能检测出有IFN-γ活性,其TNF-α活性也较低.裸鼠体内实验证实,2.5×105的3T3-neu细胞在裸鼠体内即可成瘤,而对照组的3T3细胞无致瘤性.3T3-neu细胞与体外扩增的免疫鼠脾细胞混合后接种裸鼠,瘤结节形成时间平均为52.5 d,存活期平均为55.3 d(其中5只动物至60 d尚未成瘤,按60 d计算),而对照组瘤结节形成时间平均分别为12.5和9.2 d,存活期平均为27.8和25.6 d.表明p185蛋白免疫鼠脾细胞有相对特异的抗瘤活性.结论 肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗可诱导一定的抗肿瘤效应.
关键词： HER2/neu蛋白 肿瘤疫苗 免疫治疗 -
尘螨变应原舌下免疫对变应性鼻炎Th2型免疫反应的影响
目的 探讨尘螨变应原舌下免疫治疗对变应性鼻炎Th2型免疫反应的影响.方法 自2016年1月至2017年1月前瞻性收集内蒙古医科大学附属医院收治的变异性鼻炎患者92例,将患者随机分为观察组和对照组,每组各46例.两组均给予常规治疗,观察组在此基础上给予尘螨变应原舌下免疫治疗.观察两组患者治疗前后Th2型免疫反应、鼻部症状视觉模拟评分和变应性鼻-结膜炎相关的生活质量量表评分(RQLQ).结果 两组患者入院时鼻部症状视觉模拟评分和RQLQ评分差异均无统计学意义(P>0.05).3个月后与对照组比较,观察组鼻部症状视觉模拟评分和RQLQ评分显著降低(P<0.05).两组患者治疗前白介素-4(IL-4)、白介素-13(IL-13)、干扰素(INF-γ)和免疫球蛋白E(IgE)、Th1、Th2含量差异均无统计学意义(P>0.05).治疗后观察组IL-4、IL-13、INF-γ、IgE和Th2均显著低于对照组(P<0.05),两组患者Th1含量比较无显著差异(P>0.05).结论 尘螨变应原舌下免疫治疗可以纠正变应性鼻炎Th2细胞失衡,改善患者临床疗效.
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细胞因子诱导的杀伤细胞局部治疗脑恶性胶质瘤的护理
目的 了解Ommaya储液囊的构造,埋置方法;细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)的制备方法;掌握通过Ommaya储液囊向瘤腔内注入CIK细胞的操作方法、并发症的观察和护理要点等.方法 开展该项目前,组织全体护士学习,使她们充分了解CIK细胞的来源;Ommaya储液囊的构造、埋置方法;CIK细胞回输的技术;强调操作过程中严格执行各项操作规程的重要性;严密观察治疗后并发症的发生,及时采取恰当的护理干预,保证治疗的顺利进行.结果 本组6例病人均能按计划顺利完成治疗.结论 掌握CIK细胞局部回输的操作方法、并发症的观察及护理要点,有利于治疗的顺利进行,减少了病人的痛苦,提高了护理质量,提高了病人及家属的满意度.
关键词： 胶质瘤 免疫治疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 -
树突状细胞与消化系统肿瘤免疫治疗的研究进展
树突状细胞(dendritic cell,DC)是体内功能强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),在抗肿瘤免疫应答中起关键作用.
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调节性T细胞与血液肿瘤免疫研究进展
CD4+CD25+调节性T细胞是一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群,可通过多种方式抑制抗肿瘤免疫反应从启动到效应的整个阶段,在血液肿瘤免疫抑制及逃逸机制中起重要作用,是免疫治疗新的有效靶点.文章就其近年来在血液肿瘤免疫领域的研究进展做一综述.
关键词： CD4+CD25+调节性T细胞 免疫逃逸 免疫治疗 血液肿瘤 -
细胞因子诱导杀伤细胞免疫治疗食管癌的研究进展
我国是食管癌高发国家,尤以华北太行山、川北、大别山区、闽南、广东潮汕等地区高发,每年死于食管癌者多达15万人,占恶性肿瘤死亡人数的四分之一[1,2].食管癌以进行性吞咽苦难为典型症状,其患病率与患者性别、年龄、地域、生活及饮食习惯密切相关[3].目前,早期食管癌以手术治疗为主,而对于晚期无法手术治疗的食管癌患者,则采取联合放化疗等综合治疗方法[4].传统外科手术治疗及全身放化疗对食管癌患者全身各系统损伤较大.免疫治疗,尤其是细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞免疫治疗因其快速、高效、安全、不良反应小、显著提高患者生活质量等优点而广泛应用于食管癌,尤其是晚期食管癌的治疗[5,6].
关键词： 食管癌 细胞因子诱导杀伤性细胞 免疫治疗 -
单克隆抗体在血液系统恶性肿瘤治疗中的应用
血液系统恶性肿瘤的治疗中,传统的化疗、放疗、骨髓移植或细胞因子介导的系统性免疫治疗,对机体正常组织有不同程度的损伤.随着免疫学基础研究和分子生物学技术的进展,特异性细胞免疫治疗取得了很大进展,尤其是单克隆抗体的应用.由于血液系统细胞具有系特异性,不同分化阶段表达不同的表面抗原,肿瘤细胞常大量表达相应系性细胞的表面抗原,因而血液系统肿瘤适于单克隆抗体的治疗.针对肿瘤抗原制备的单抗治疗具有杀伤性强、副作用小,能显著提高肿瘤免疫治疗的疗效的特点.
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免疫治疗研究和临床应用(三)
本节介绍免疫治疗的种类以及各种治疗应当遵循的共同原则.
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免疫治疗研究和临床应用(一)
免疫学是在人类与疾病,尤其是与传染性疾病的斗争过程中诞生的,疫苗的发明是重要的标志.然而,长期以来由于免疫学自身和与之相关学科发展水平的限制,免疫治疗始终停留在疫苗范畴;绝大多数疫苗用于预防,真正用于治疗的不过如抗破伤风和其它中和毒素的寥寥几种.以致于时至今日,许多人对免疫治疗还很陌生.
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DC联合CIK免疫治疗恶性肿瘤的临床护理
目的 总结DC联合CIK免疫治疗恶性肿瘤的护理措施.方法 回顾性分析2012年8-12月河南省肿瘤医院生物治疗科收治38例恶性肿瘤患者进行免疫治疗的护理资料,总结护理经验.结果 38例恶性肿瘤患者应用DC联合CIK免疫治疗,通过采血前护理、采血护理、DC和CIK回输护理等措施,患者顺利完成治疗,2例出现发热,1例出现轻度皮疹,1例出现头晕、乏力.经过症处理后好转.结论 DC联合CIK免疫疗法是治疗恶性肿瘤的一种手段,治疗中全程需要精心的护理,以防止不良反应发生.
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免疫标准化治疗联合家庭护理干预在变态反应性鼻炎患儿中的应用效果
目的 分析变态反应性鼻炎(简称变应性鼻炎)患儿应用免疫标准化治疗联合家庭护理干预对其免疫治疗效果的影响.方法 采用便利抽样法选取郑州儿童医院2015年3月—2016年10月收治236例变应性鼻炎患儿为研究对象,按随机数表法分为对照组和干预组,每组118例.对照组采用免疫标准化治疗方案进行治疗,干预组在对照组基础上予家庭护理干预,指导家长对患儿进行家庭护理,比较两组患儿的治疗依从性及治疗效果.结果 236例患儿中140例完成SLIT 初始阶段和维持阶段治疗满1年,治疗总依从率为59.32%.干预组的治疗依从率为76.27%,对照组为42.73%,两组比较差异有统计学意义(χ2=28.095,P<0.01).对照组患儿总有效率为61.02%,干预组为74.58%,两组治疗效果比较差异有统计学意义(χ2=5.169,P<0.05).结论 在免疫标准化治疗的基础上实施家庭护理干预,能有效提高变应性鼻炎患儿的治疗效果,预防并发症的发生,有利于提高患儿的治疗依从性,对疾病的发生发展产生重要影响.
