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肝细胞癌RUNX3基因高频率的甲基化和等位缺失
近,位于1p36.1的RUNX3基因被认为是一种新发现的抑癌基因,对胃癌细胞的生长有明显的抑制作用,并能阻止其在裸鼠体内的致瘤性.相反,敲除掉RUNX3基因,可使鼠胃黏膜发生异常增生.在人类胃癌,RUNX3基因失活的主要机制是高甲基化和缺失[1].然而,先前的实验曾发现,1p36.1也是肝细胞癌发生高频率等位缺失的位点,甚至发生在肝癌前病变[2].RUNX3基因是否在肝细胞癌的发病中起重要作用,目前尚不清楚.本研究对肝细胞癌RUNX3基因的遗传学和表遗传学改变进行初步研究,以期发现RUNX3基因在肝细胞癌的发生、发展过程中的作用.
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分析西咪替丁对胃癌细胞生物学行为干预和影响研究
目的：探讨西咪替丁对胃癌细胞生物学行为干预和影响。方法采用MTT法检测，荧光显微镜，透射电镜观察等方法测定西咪替丁对SGC-7901细胞的影响。结果在0.5-10mmol/L浓度内，西咪替丁对SGC-7901的生长具有显著的抑制作用，并呈时间和剂量依懒性，可观察到典型细胞凋亡形态学改变，流式细胞仪检测可见凋亡峰，G0/G1期细胞明显增多，P<0.05差异有统计学意义。结论西咪替丁可改变细胞周期分别，诱导SGC-7901细胞凋亡，从而抑制细胞增殖。
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亚麻酸和亚油酸对高糖高胰岛素环境下胃癌细胞生长的影响
目的 糖尿病患者特别是高胰岛素血症患者罹患癌症的风险大大高于正常人群,本研究探讨不饱和脂肪酸降低糖尿病患者罹患癌症风险作用.方法 以正常胃细胞(GES-1)和胃癌细胞(MGC、SGC)为研究对象,建立高糖高胰岛素环境,用多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)、亚油酸(linoleicacid,LA)分别干预48h,MTT (thiazolyl blue tetrazolium bromide)法测定细胞存活率,流式细胞仪分析凋亡情况,荧光法测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量,化学法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.结果 ALA使MGC、SGC的SOD活性分别下降9.5％和49％,MDA含量分别增加23倍和41倍,ROS在细胞内大量积累,分别是实验对照组的2.3倍和5.17倍,两株癌细胞均显著凋亡;LA使两种癌细胞的SOD活性分别下降18％和54.8％,MDA含量分别增加6倍和6.7倍,ROS分别是实验对照组的1.9倍和4.3倍,同样引起MGC、SGC的显著凋亡.结论 多不饱和脂肪酸能显著增加自由基的积累,降低清除自由基的能力,引起癌细胞的氧化损伤,进而引发凋亡,具有抑制胃癌细胞在高糖高胰岛素环境下生长的能力.
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染料木黄酮对胃癌细胞侵袭转移的抑制作用
目的:研究染料木黄酮(genistein)对胃癌细胞侵袭转移的影响,并初步探讨其作用机制.方法: 运用MTT法观察染料木黄酮对人胃癌细胞系SGC-7901细胞粘附能力的影响;用Boyden Chamber膜侵袭系统,观察对SGC-7901游走和侵袭的影响;免疫细胞化学法观察对SGC-7901细胞TGF-β1表达的影响.结果: 染料木黄酮作用后,SGC-7901细胞粘贴率降低(P＜0.05),游走穿膜细胞数(83±4)和侵袭穿膜细胞数(35±3)均明显低于对照组(114±7,60±4,P＜0.05),并且能降低TGF-β1的表达.结论: 染料木黄酮能有效抑制胃癌侵袭转移.其作用机制可能与通过降低TGF-β1的表达,抑制胃癌细胞异质粘附、运动能力有关.
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金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖与G2/M期阻滞作用的体外研究
目的: 研究金雀异黄素(genistein, Gen)对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响.方法: 采用3H-TdR掺入液闪计数法观察Gen对人胃癌细胞增殖影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化和Western Blotting分别检测cyclin B、P21waf1/cip1蛋白表达情况.结果: Gen对胃癌细胞生长有显著抑制作用,使细胞生长停滞于G2/M期,并使细胞cyclinB、P21waf1/cip1蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系.结论: Gen在此剂量下抑制胃癌细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其稳定cyclinB蛋白和上调P21waf1/cip1蛋白表达有关.
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白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡
目的研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用.方法采用细胞形态学观察、Annxin-Ⅴ和PI细胞染色和流式细胞仪检测,观察白藜芦醇(o.1、0.2、o.5 mmol/L)对脱落培养胃癌细胞BGC823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用.结果倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长,0.1 mmol/L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团;流式细胞仪检测和Annxin-Ⅴ和PI细胞染色表明0.5 mmol/L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BGC823、SGC7901和HGC27细胞于G0/G1、S、G2/M期,并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡,其中白藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19.3%,远高于其他两株胃癌细胞.结论白藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡.
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驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的侵袭作用
目的 应用胃癌细胞SGC-7901以及稳定低表达驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞SGC-shKIF4A,研究KIF4A对胃癌细胞侵袭能力的作用.方法 使用蛋白免疫印迹法鉴定对照胃癌细胞SGC-shNC以及SGC-shKIF4A细胞内KIF4A蛋白的表达水平,并通过细胞侵袭实验计数这两种细胞的侵袭能力.通过细胞免疫荧光染色法观察在SGC-7901、SGC-shNC、SGC-shKIF4A细胞中皮层肌动蛋白(cortactin)的数量变化情况.结果 与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞侵袭能力明显增强;与其他细胞相比,SGC-shKIF4A细胞的cortactin数量明显增多(P＜0.01),表明该细胞内侵袭性伪足增多.结论 驱动蛋白KIF4A具有抑制胃癌细胞的侵袭作用,这为KIF4A作为靶点应用于胃癌的预后预测以及有效治疗奠定理论基础.
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染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定
目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA(shRNA)表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株(SGC-shKIF4A)和稳定表达无意义shRNA的对照细胞(SGC-shNC);同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
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腺病毒介导的FasL基因转移及对胃癌细胞生长和凋亡的影响
目的:探讨FasL基因对人胃癌的作用以及FasL基因治疗胃癌的可能性方法:通过腺病毒载体介导FasL基因转移到低水平表达FasL的人胃癌细胞系SGC-7901.对FasL基因的表达,细胞生长的抑制与机制和对肿瘤生长模型的治疗效果进行分析结果:外源性FasL基因在靶细胞高水平的表达,显著抑制了SGC～790l的生长和集落形成,流式细胞仪检测显示细胞G.期阻滞并发生了凋亡瘤内注射Ad-FasL对裸鼠体内移植瘤有-定的抑瘤作用结论:FasL基因参与了肿瘤细胞凋亡的诱导,能抑制胃癌细胞的生长,因此该基因在肿瘤的基因治疗上有着广泛的应用前景.
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β-榄香烯对胃癌SGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响
目的:探讨β-榄香烯对胃癌SGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响.方法:应用β-榄香烯处理人胃癌细胞系SGC-7901后,采用RT-PCR检测c-myc基因mRNA的变化,采用流式细胞仪免疫荧光技术检测c-myc蛋白表达,用端粒酶PCR-ELISA法检测端粒酶活性.结果:β-榄香烯可下调c-myc基因表达及抑制端粒酶活性.结论:β-榄香烯可抑制胃癌细胞端粒酶活性,可能与下调c-myc基因表达有关.
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发光法分析莪术油等中药对肝、胃癌细胞增殖活性抑制作用的实验研究
目的:探讨抗癌中药莪术油、华蟾素、龙葵碱与肝癌细胞株SMMC7721、胃癌细胞株NKM45增殖活性的抑制作用.方法:应用生物发光法(BLA法)测定莪术油、华蟾素和龙葵碱与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量,并与5-氟脲嘧啶(5-FU)的作用进行比较,分析莪术油对NKM45生长曲线的影响.结果:莪术油等三种中药与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量明显下降(P＜0.05～P＜0.01);与5-FU作用后的ATP含量比较,无明显差异(P＞0.05).莪术油对NKM45的存活率有明显的抑制作用.结论:莪术油等中药能够抑制SMMC7721、NKM45细胞的增殖活性.BLA法可广泛应用于抗肿瘤药物的筛选.
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塞来昔布通过PI3K/Akt通路调控胃癌细胞凋亡
目的:探讨塞来昔布通过PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制.方法:塞来昔布体外处理人胃癌细胞株SGC-7901后,透射电镜观察细胞超微结构的改变,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、Caspase-9的表达.结果:塞来昔布处理细胞后,透射电镜下观察到典型凋亡小体和自噬体;实验组Akt mRNA表达水平的改变无统计学意义,P-Akt蛋白的表达下调并呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Caspase-8 mRNA表达水平上调,呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Caspase-9 mRNA表达水平较对照组均上调,但125 μmol/L塞来昔布作用24 h组mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义,48 h和72 h组与对照相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).塞来昔布作用72 h后,75 μmol/L组Caspase-9 mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义,100 μmol/L和125 μmol/L组与对照相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);procaspase-8和procaspase-9蛋白被活化,表达量下调,呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:1)塞来昔布可能通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡和细胞自噬两种程序性死亡方式导致细胞死亡.2)塞来昔布诱导胃癌细胞凋亡的分子机制为线粒体途径和死亡受体途径.
关键词： 塞来昔布 胃癌细胞 凋亡 自噬 PI3K/Akt通路 -
生长抑素类似物对人胃癌细胞生长的调控作用
目的:研究奥曲肽时SGC7901生长的调控作用并探讨其作用的机理.方法:奥曲肽作用体外培养的SGC7901,5-FU作为阳性对照,人成纤维细胞作为正常对照,通过MTT法观察奥曲肽对SGC7901和成纤维细胞生长的抑制作用,并与5-FU的抑制作用比较;用荧光显微镜观察细胞凋亡的变化;用流式细胞术分析奥曲肽对胃癌细胞周期分布及凋亡率的影响;用放射免疫法测定胃癌细胞培养液中IGF-1的含量.结果:奥曲肽50μg/L时对胃癌细胞的生长无抑制作用(P>0.05),随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有量效依赖关系(P<0.01);各组奥曲肽对人成纤维细胞的生长抑制无明显差异(P>0.05);500μg/L浓度的奥曲肽对细胞的抑制率与50mg,L5-FU对细胞的抑制率无统计学意义(P>0.05);经1mg/L奥曲肽作用48h后发生明显的细胞凋亡的形态学变化;SGC7901细胞经500μg/L奥曲肽作用后,大部分细胞被阻滞于G_0/G_1期(72.07±2.40),S期细胞明显减少(14.99±1.42),细胞增殖明显受到抑制,凋亡率增加(21.40±2.71);经不同浓度奥曲肽处理后,细胞培养液中IGF-1含量低于对照组(P<0.01),提示奥曲肽具有下调细胞培养体系中IGF-1含量的作用.结论:奥曲肽可在体外抑制胃癌细胞的增殖,对非靶细胞的生长无明显的抑制作用.奥曲肽可通过诱导胃癌细胞出现G_0/G_1期阻滞和细胞凋亡直接抑制细胞生长,并可抑制IGF生长因子的分泌,间接抑制肿瘤细胞的生长.
关键词： 生长抑素 胃癌细胞 凋亡 胰岛素样生长因子-1 细胞周期 -
P38与内质网应激诱导胃癌细胞顺铂耐药的关系
目的：探讨P38在内质网应激诱导胃癌细胞中对顺铂产生耐药的作用。方法：采用衣霉素及毒胡萝卜素建立胃癌细胞内质网应激模型，用Western blot技术检测内质网应激标志物GRP78的表达；流式细胞仪技术检测内质网应激能否降低胃癌细胞对顺铂的敏感性；Western blot技术检测内质网应激对P38激活状态的影响；流式细胞仪技术检测P38通路受阻能否逆转内质网应激诱导的胃癌细胞对顺铂的耐药现象。结果：衣霉素（或毒胡萝卜素）处理胃癌细胞BGC823及SGC79018、16、24 h后，GRP78蛋白表达量均明显高于0h组。衣霉素（或毒胡萝卜素）组、顺铂组及衣霉素（或毒胡萝卜素）加顺铂组胃癌细胞系的凋亡率均明显高于对照组（P<0.05），衣霉素（或毒胡萝卜素）加顺铂组凋亡率明显低于顺铂组（P<0.05）。衣霉素（或毒胡萝卜素）处理胃癌细胞BGC823及SGC79018、16、24 h后，P38的磷酸化水平明显高于0 h组，而各组P38蛋白表达水平无明显变化；P38抑制剂SB203580或PD169316均可抑制P38的激活。阻断P38通路可基本恢复内质网应激状态下胃癌细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）。结论：内质网应激可通过激活P38通路诱导胃癌细胞对顺铂产生耐药，阻断该通路可抑制内质网应激诱导胃癌细胞对其耐药现象。
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二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的机制制
目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的.笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G_2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C(Celldivision cycle protein25C,Cdc25C)、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G_2/M期,但G_2/M期阻滞的机制还未完全阐明.本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的可能机制.方法:RT-PCR检测Chk1和Chk2在mRNA水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC823细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3相关基因(ATM-RAD3-related gene,ATR)、细胞周期检查点蛋白激酶1(checkpoint kinase1,Chk1)、细胞周期检查点蛋白激酶2(checkpoint kinase2,Chk2)表达和ATR、chk1、Chk2的磷酸化程度;免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与Cdc25C结合情况.结果:RT-PCR检测显示,Chk1和Chk2的mRNA水平在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05).Western blot检测显示,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/L DADS刺激BGC823细胞2h后,处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.05),而Chk2磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05).15mg/L DADS作用15～120min,ATR磷酸化程度明显增加.呈时间依赖性(P<0.05),而ATR表达无改变.免疫共沉淀分析表明,DADS能促进BGC823细胞Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响.结论:DAD诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞与Chk1的活化有关,DADS可能是通过激活ATR、Chk1,调节Cdc25C的表达引起人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞.
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复方苦参注射液诱导胃癌细胞株MGC803增殖抑制和细胞凋亡的实验研究
目的:观察复方苦参注射液在体外抑制人胃癌细胞株MGC803增殖和诱导其凋亡的生物学效应,并对其分子机制作初步探讨.方法:分别采用不同浓度梯度的复方苦参注射液干预胃癌细胞MGC803,通过MTT比色法检测复方苦参注射液对该细胞系生长增殖的影响.TUNEL法分析经1、2、4 mg/mL复方苦参注射液作用24 h后的MGC803细胞凋亡率.Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况.结果:复方苦参注射液在体外能明显抑制人胃癌细胞株MGC803的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P<0.001).TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于未加复方苦参注射液的空白对照组(P<0.05);West?ern blot分析表明复方苦参注射液能下调Bcl-2蛋白表达,降低蛋白Bcl-2/Bax比值,并且可以促使Caspase-3原蛋白发热活化(P<0.05).结论:复方苦参注射液具有体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值降低导致Cas?pase-3活化相关.
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RNA干扰抑制RPS12基因表达对胃癌细胞凋亡的影响及分子机制探讨
目的:探讨RPS12基因特异的RNA干扰对胃癌BGC823细胞凋亡的影响及机制.方法:设计并构建RPS12特异性shRNA表达载体(RPS12-shRNA),以Lipofectamine 2000介导将RPS12特异性shRNA及Scram-ble-shRNA表达载体分别转染胃癌细胞.RT-PCR方法检测BGC823细胞中RPS12基因及凋亡相关基因Bcl-2和BaxmRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析RNA干扰对细胞凋亡的影响.结果:RT-PCR结果显示,RPS12-shRNA表达载体转染第3、5、7天后.RPSl2基因表达低于对照组,其中第5天下调明显.RPS12特异性RNA干扰第5天、第7天后,Bcl-2mRNA表达明显下调,BaxmRNA表达无明显改变.流式细胞术分析结果显示,RNA干扰RPS12基因第7天后,胃癌细胞凋亡率(17.84%)明显高于对照组(1.89%).结论:RNA干扰RPS12基因促进胃癌细胞凋亡作用可能是其作为上游基因通过下调Bcl-2基因表达而实现的.
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Cdc25C cyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用
目的:研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cde25C、cvclin B1的作用.方法:采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性;流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响;Westerablot观察DADS对Cdc25C蛋白、eyelin B1蛋白表达的影响.结果:MTT比色实验结果显示,DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用,且呈显著的剂量一效应依赖关系(P＜0.05).流式细胞分析发现,DADS作用12h时,G2/M期细胞增加到30.1%;24h时增加到58.1%;36h达50.2%(P＜0.05).Western blot结果表明,DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达,cyclinB1表达在DADS处理24h后开始下降(P＜0.05).结论:DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期C2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制Cdc25C、eyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G2/M期.
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放射诱导胃癌细胞凋亡的实验研究
目的:建立放射诱导胃癌细胞凋亡模型,为进一步研究细胞凋亡分子机理打下基础.方法:用直线加速器12Gy9MeV照射培养的人胃癌细胞株SGC-7901,诱导凋亡发生,检测DNA条带变化,电镜观察凋亡小体的出现,流式细胞仪检测凋亡率及细胞周期和细胞内Ca2+、cAMP浓度.结果:照射后2小时,即有凋亡细胞出现,在72小时达高峰,胃癌细胞DNA结构断裂,电泳呈梯状带形.胃癌细胞形态学改变出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征.FCM检测出现典型的凋亡峰,以G2～M期凋亡率为高,照射后2、24、48、72小时凋亡率分别为11.26%、38.39%、50.59%及59.47%,胞内Ca2+和cAMP浓度变化也随凋亡率增加而升高.结论:照射12Gy9MeV诱导胃癌细胞株SGC-7901发生凋亡,凋亡率在72小时达高峰.胞内Ca2+和cAMP浓度变化起了相当重要的作用.
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癌基因H-ras启动子区重新甲基化抑制胃癌细胞生长的实验研究
目的:探讨癌基因启动子区域重新甲基化对胃癌细胞生长的影响.方法:用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)使胃癌细胞系MGC803中癌基因H-ras启动子区域重新甲基化,MTT法检测肿瘤细胞生长状态；MSP法检测H-ras启动子区域甲基化状态；细胞免疫荧光染色检测H-RAS蛋白的表达.结果:胃癌细胞系MGC-803经SAM处理后癌基因H-ras启动子区域重新出现甲基化；经SAM处理的胃癌细胞组与对照组相比,细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.05)；H-RAS蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:SAM能够使MGC-803中癌基因H-ras启动子区域重新甲基化,降低H-RAS蛋白的表达水平,且有效抑制了肿瘤细胞的生长,从而为肿瘤治疗提供了新的靶点.
