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miRNA-449家族靶向CCNE2对胃癌细胞生长的抑制调节作用
目的 研究miRNA-449在胃癌细胞中对细胞增殖、凋亡的影响,以及对靶基因CCNE2( cyclin E2)表达的影响.方法 荧光定量PCR检测人低分化胃癌细胞株BGC823瞬时转染miRNA-449a/b及抑制剂后的表达;流式细胞术分析转染后细胞凋亡变化.Western blot检测miRNA-449a/b对靶基因表达的影响.结果 在转染后,miRNA-449a/b组在48、72h对肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05),miRNA-449a/b组对肿瘤细胞凋亡有明显的促进作用(P＜0.05),对CCNE2蛋白表达有显著抑制作用(P＜0.05).结论 miRNA-449a/b可能通过CCNE2来发挥其抑制胃癌细胞生长的作用.
关键词： miRNA 胃癌细胞 细胞周期 凋亡 CCNE2 (cyclin E2) -
百合提取物对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响
目的 初探百合的甲醇提取物、百合总生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的百合甲醇提取物、百合总生物碱作用SGC-7901细胞,MTr法检测SGC-7901细胞的生长抑制率;荧光显微镜观察SGC-7901细胞的形态变化;流式细胞仪检测SGC-7901细胞周期改变及其凋亡率.结果 随着百合甲醇提取物、百合总生物碱作用SGC-7901细胞的时间、浓度递增,抑制SGC-7901细胞增殖的作用越明显,百合甲醇提取物大浓度的抑制率可达到98.32％;百合总生物碱大浓度的抑制率可达到91.93％,细胞逐渐失去正常的细胞形态,细胞边缘不整齐,细胞发生皱缩;阻滞细胞周期于G2/M期;可以诱导细胞的凋亡.结论 百合甲醇提取物、百合总生物碱阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,诱导SGC-7901细胞凋亡是抑制SGC-7901细胞增殖的主要机制之一.
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外源性一氧化氮对胃癌细胞增殖的影响
目的 研究外源性一氧化氮对正常胃粘膜细胞(GES-1)和两株胃癌细胞(BGC-823,SGC-7901)增殖的影响.方法 外源性一氧化氮由硝普钠(Sodium Nitroprusside,SNP)供给,应用MTT法检测一氧化氮对正常胃粘膜细胞和胃癌细胞增殖的影响;应用一氧化氮测试盒检测培养液中一氧化氮浓度.结果 与对照组相比,SNP对正常胃粘膜细胞和胃癌细胞的增殖均有抑制作用(P＜0.05),随着SNP浓度的增高,培养液中一氧化氮的浓度也随之增高.结论 外源性一氧化氮对正常胃粘膜细胞和胃癌细胞的增殖均有抑制作用.
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胃癌细胞肿瘤标志物的研究进展
近年来随着研究的深入,研究者发现胃癌的发生、发展涉及多种因素的参与,是一个复杂的过程[1].特别是近几年随着免疫组织化学技术的应用,使得一大批与肿瘤的发生、发展密切相关的肿瘤标记物相继被发现,它们从不同的角度揭示了胃癌的本质,特别是对胃癌的早期诊断、治疗方案的选择以及预后判断提供了相关的依据.本文就这一领域的新进展作一综述.
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硫酸右旋糖苷预防人胃癌BGC-823细胞裸鼠大网膜种植转移的研究
目的 通过测定整合素β1 mRNA和蛋白的表达水平,研究硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌细胞(BGC-823)在裸鼠大网膜上种植转移的影响,从而观察DS预防胃癌细胞在腹腔种植转移中的作用.方法 裸鼠共80只,实验组40只和对照组40只.实验组裸鼠腹腔内同时注入1×107 BGC-823悬液(0.2mL·只-1)和0.3％的DS(1 mL·只-1);对照组腹腔内同时注入1×10 7胃癌细胞悬液(0.2 mL·只-1)和生理盐水(1mL·只-1).分别于注射后1、3、7、14 d处死,取大网膜组织,应用免疫组化、RT-PCR方法测定DS对整合素β1 mRNA和蛋白的影响.结果 随着BGC-823在大网膜上种植时间的延长,DS实验组与对照组大网膜上瘤节数目增多且体积逐渐增大,实验组大网膜瘤结节数量与体积均显著低于对照组;免疫组化检测示,在不同时间点实验组细胞膜整合素β1的表达均显著高于对照组(P＜0.05);在不同时间点上,实验组整合素β1 mRNA的表达均显著高于对照组(P＜0.05).结论 DS抑制胃癌细胞在裸鼠大网膜上的种植转移与整合素β1表达下调有关.
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胃癌-树突状细胞融合细胞疫苗制备及其形态学观察
目的利用细胞融合技术,获取胃癌细胞-树突状细胞融合细胞疫苗,并对其形态学特点进行观察,为基于树突状细胞(DC)的融合疫苗研究及应用提供实验基础.方法利用聚乙二醇(PEG)诱导胃癌细胞、DC融合,HAT、HT筛选培养系统对融合细胞进行筛选培养,获取纯净融合疫苗;利用光镜、电镜对其形态学特点进行观察.结果胃癌-DC细胞融合后,体积明显增大,悬浮生长,细胞表面树枝状突起较亲代DC明显短小、稀少.结论胃癌-DC融合细胞保持类似于亲代DC的悬浮生长特性,但数量减少、体积明显增大,具备与两种亲代细胞均不相同的形态学特性.
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三七总苷对人胃癌BGC-823细胞Bcl2和Bax表达的影响
目的:探讨三七总苷对胃癌BGC-823细胞Bc12基因和Bax基因表达的影响.方法:不同浓度三七总苷诱导胃癌细胞BGC-823,实时荧光定量聚合酶链反应检测Bc12基因和Bax基因的表达情况,免疫印迹检测Bc12蛋白和Bax蛋白的表达情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡的改变.结果:三七总苷作用后,胃癌细胞Bcl2基因的表达受到明显抑制,而Bax基因的表达则明显上调,Bel-2/Bax呈上升趋势;流式检测细胞增殖受到抑制.结论:三七总苷可促进胃癌BGC-823细胞凋亡,具有抗胃癌细胞恶性增殖活性.
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淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧对维生素E琥珀酸脂诱导内质网应激的影响
目的:探讨淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧(ROS)对维生素E琥珀酸脂(VES)诱导内质网应激的影响.方法:将不同浓度(1、5、10和20 mmol/L)N-乙酰半胱氨酸(NAC)作用胃癌SGC-7901细胞2h,再加入20 μg/mL VES处理12h,经2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)染色后,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS水平.另将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2h,再加入20μg/mL VES处理细胞12h,经DCFH-DA染色后,流式细胞术进一步检测细胞内ROS水平.将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2h,再加入20 μg/mL VES分别处理15和24 h后,分别采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting法检测内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白GRP78和CHOPmRNA及蛋白的表达.结果:与单纯VES处理组相比,20 mmol/L NAC预处理组胃癌细胞内ROS下降为明显(P＜0.05).与对照组相比,20 μg/mL VES能够诱导胃癌细胞内GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达明显增加(P＜0.05);而与单纯20μg/mL VES处理组相比,20 mmol/L NAC对VES诱导GRP78和CHOP mRNA及蛋白表达具有显著的抑制作用(P＜0.05).结论:在体外,淬灭胃癌细胞内ROS能够抑制VES诱导的内质网应激反应.
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维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生未折叠蛋白反应的研究
目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对人胃癌细胞未折叠蛋白反应的影响.方法:采用Western blot法分析VES不同剂量(0、5、10和20μg/mL)处理人胃癌SGC-7901细胞24 h和20μg/mL VES处理SGC-7901细胞不同时间(0、6、12、18和24 h)对内质网膜上的跨膜蛋白PKR样内质网蛋白激酶(PERK)磷酸化和活化转录因子6(ATF6)活化的影响;采用RT-PCR法检测VES不同剂量(0、5、10和20μg/mL)处理SGC-7901细胞24 h和20μg/mL VES处理SGC-7901细胞不同时间(0、3、6、9、12、15、18和24 h)对活化转录因子4(ATF4)mRNA表达和X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA剪切的影响.结果:在翻译水平上VES对磷酸化PERK的诱导作用具有时间依赖关系,与阴性对照组比较,10μg/mL VES的诱导作用强(P<0.05);在翻译水平上VES对ATF6活化片段的诱导作用具有时间依赖关系和剂量依赖关系;在转录水平上,随着作用时间的延长,VES对ATF4 mRNA的诱导作用也不断增强,18 h达到高峰,而XBP1 mRNA从VES作用6 h即开始出现剪切.结论:VES诱导人胃癌SGC-7901细胞发生内质网应激过程中,未折叠蛋白反应相关信号分子被活化.
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维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与活性氧蓄积的交互作用
目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与活性氧(ROS)蓄积是否存在交互作用.方法:不同剂量(0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理人胃癌SGC-7901细胞24h,采用免疫荧光染色观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3(LC3)的荧光强度和分布情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,流式细胞术检测细胞内ROS水平;用ROS淬灭剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理2h后以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,免疫荧光染色观察细胞内LC3荧光强度和分布情况,Westem blot检测LC3和Beclin-1的表达情况;RNA瞬时干扰阻断BECN-1基因的表达后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,流式细胞术检测细胞内ROS水平.结果:与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,LC3的荧光强度逐渐增强;LC3和Beclin-1蛋白表达均逐渐升高;流式细胞术检测结果显示胞内ROS水平逐渐增强;淬灭ROS之后LC3荧光强度以及LC3和Beclin-1蛋白表达水平均明显低于VES单独处理组(P＜0.05);阻断自噬关键基因BECN-1后细胞内ROS水平高于VES单独处理组(P＜0.05).结论:VES可诱导人胃癌细胞发生自噬及ROS蓄积,并且VES处理人胃癌细胞过程中自噬与ROS水平可以相互调节,具有交互作用.
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AMPK在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞自噬中的作用研究
目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)是否影响人胃癌SGC-7901细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性,并探讨AMPK在VES诱导自噬中的作用.方法:用不同剂量(5、10、15、20 μg/mL)VES处理SGC-7901细胞24h,以及20 μg/mL VES分别处理SGC-7901细胞3、6、12、24 h后,Western blot法检测SGC-7901细胞中自噬标志蛋白LC3、Beclin-1及AMPK、ACC及其磷酸化蛋白的表达.用RNAi技术沉默AMPK,20 μg/mLVES处理SGC-7901细胞24 h,Western blot法检测LC3、Beclin-1蛋白以及AMPK、mTOR、p70S6K与4EBP-1及其磷酸化蛋白表达,并采用荧光定量PCR法检测LC3 mRNA表达情况.结果:VES处理SGC-7901细胞后,与对照组比较,随着VES剂量的增加、作用时间的增长,AMPK磷酸化水平上升,LC3、Beclin-1蛋白表达增加(P＜0.05).RNAi沉默AMPK后,与单纯VES处理组比较,LC3、Beclin-1蛋白表达降低,LC3 mRNA表达下降(P＜0.05);mTOR、p70S6K及4EBP-1磷酸化活性升高(P＜0.05).结论:VES可诱导SGC-7901细胞中AMPK活化,AMPK活化后影响mTOR及其下游分子活性,继而诱导自噬的发生.
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舒林酸对胃癌细胞生长抑制作用的体外观察
背景与目的:体外研究舒林酸对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用,探讨其作用机制.材料与方法:将舒林酸作用于人胃癌BGC-823细胞,并设置不同的作用浓度和作用时间.以体外药物敏感实验(单核细胞直接细胞毒测定Mono-nuclear cell direc cytotoxicity assay,MTT)检测舒林酸在不同浓度及不同作用时间下对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制效应;流式细胞仪检测胃癌细胞周期分布;透射电镜观察药物作用后细胞凋亡的形态学改变;免疫组化检测细胞增殖(ki-67)、凋亡抑制基因(bcl-2)及还氧合酶(COX-2)蛋白的表达.结果:舒林酸对人胃癌BGC-823细胞有生长抑制作用,使G0/G1期比例增高,S期比例降低;透射电镜观察到细胞凋亡的形态特征及凋亡小体,而ki-67、bcl-2及COX-2蛋白表达阳性率显著降低;上述作用均呈时间和剂量依赖性.结论:舒林酸在体外具有良好的抑制胃癌BGC-823细胞生长的作用,其机制涉及影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡及抑制COX-2、ki-67及bcl-2蛋白的表达.
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中药方剂1号对胃癌细胞体外生长及细胞周期的影响
背景与目的:探讨中药方剂1号对人胃癌细胞SGC-7901体外生长及细胞周期的影响.材料与方法:四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-y1]-2,5 dipheny1 tetrazolium bromide,MTT)还原法检测中药方剂1号对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期时相分布.结果:中药方剂1号生药能抑制SGC-7901的增殖.在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72 h内药物作用时间越长,抑制作用越明显.中药方剂1号作用48 h后,SGC-7901细胞的G0/G1期和S期的细胞减少,G2+M期的细胞增多.结论:中药方剂1号能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外增殖,其作用机制可能与干扰细胞周期有关.
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人参皂苷M1硬脂酸酯抗肿瘤活性的研究
研究人参皂苷M1硬脂酸酯(SM1)对小鼠肝癌腹水型(HepA)细胞和小鼠胃癌(MFC)细胞的生长抑制作用.采用动物移植瘤模型,以生理盐水组、阳性药环磷酰胺组作对照,对SM1抗癌活性进行筛选评价.对于小鼠肝癌(HepA)细胞,SM1给药组瘤重为1.44±0.57克,其肿瘤抑制率为51.66%,与生理盐水处理的对照组瘤重(2.97±0.54克)比较差异具有极显著统计学意义(P<0.001);对于小鼠胃癌(MFC)细胞,SM1给药组瘤重为1.60±0.68克,其肿瘤抑制率为52%,与生理盐水处理的对照组瘤重(3.32±1.39克)比较差异具有显著统计学意义(P<0.05).SM1能显著抑制小鼠体内肝癌细胞和胃癌细胞的生长,具有显著的抗肿瘤作用.
关键词： 人参皂苷M1硬脂酸酯 抗肿瘤 肝癌腹水型细胞 胃癌细胞 -
TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用的实验研究
目的：探讨TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用。方法 TNF-α重组慢病毒感染SGC-7901胃癌细胞为实验组，并设立阴性对照组以及空白对照组，采用RT-PCR检测3组细胞中TNF-αmRNA的表达情况，ELISA检测3组细胞上清液中TNF-α蛋白含量，流式细胞术检测3组细胞凋亡情况。结果 PCR实验观察到TNF-αmRNA荧光条带24h后稳定表达。测得三组培养液中TNF-α含量，实验组[(2.6926±0.7563) ng/ml]明显高于阴性对照组[(0.9326±0.3091) ng/ml]和空白对照组[(0.8552±0.2768) ng/ml]，且差异均有统计学意义（P均<0.01），而阴性对照组和空白对照组之间差别无统计学意义（P>0.05）。在流式细胞实验中，实验组细胞凋亡率明显高于其他组，差异有统计学意义（P<0.05），而阴性对照组和空白对照组差别无统计学意义（P>0.05）。结论 TNF-α重组慢病毒可以感染SGC-7901胃癌细胞，并在胃癌细胞中稳定表达并自分泌TNF-α，诱导杀伤胃癌细胞。
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大葱提取物抗胃癌作用的研究
目的观察大葱提取物对体外培养的人胃癌细胞MGC 803诱导分化和凋亡的影响,探讨大葱抗癌的作用机制及抗癌的有效成分.方法应用流式细胞仪(FCM)和电镜技术,检测细胞分化和凋亡.结果FCM检测显示:大葱提取物可诱导胃癌细胞分化和凋亡;DNA直方图上出现二倍体峰及亚二倍体峰凋亡峰.电镜观察癌细胞出现分化和凋亡形态学变化.结论大葱提取物能明显抑制体外培养的胃癌细胞生长增殖,诱导胃癌细胞分化和凋亡,是其抗癌作用的主要机制.其起主要作用的部分为大葱的脂溶性(大葱油)部分,水溶性部分作用微弱.
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流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用
目的:运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的凋亡作用.方法:运用流式细胞术检测细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:苦参素1mg/ml、2mg/ml作用24h后,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.
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健脾导滞中药对胃癌细胞VEGF及其受体表达的作用
目的:研究中药复方健脾导滞中药对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt、KDR表达的调控作用.方法: 以不同剂量的中药复方健脾导滞中药制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况.结果:与对照组相比,VEGF及其受体Flt在用药组胃癌细胞中的表达减弱,染色变浅,并且与用药剂量有一定的关系;VEGF mRNA及其受体Flt mRNA、KDR mRNA在用药组胃癌细胞中的表达也受到抑制.结论:中药健脾导滞中药对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用,是一个值得进一步研究开发的中药复方.
