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人反义端粒酶RNA转染SGC-7901细胞后细胞周期调控基因表达的改变
目的: 观察反义人端粒酶RNA(Human telomerase RNA components, hTR)转染的SGC-7901胃癌细胞(7901-ahTR)细胞周期调控基因表达的变化.方法采用RT-PCR、Western印迹和免疫组化方法检测SGC-7901和 7901-ahTR细胞p21、p27、p16、c-myc等基因mRNA和蛋白的表达.结果反义hTR转染的7901细胞p21和p27表达增加,PCNA和c-myc 表达下调,而cyclinD1和 p16 mRNA表达无明显变化.结论抑制端粒酶活性能调节多种细胞周期调控基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和诱导分化.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对胃癌细胞端粒酶活性的抑制作用
目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对SGC-7901胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法用不同浓度的EGCG处理7901细胞，采用MTT法和PCR-ELISA法测定增殖抑制率和端粒酶活性, 用RT-PCR法测定端粒酶亚单位hTR、TP1、hEST2/hTRT和c-myc mRNA的表达。结果 EGCG在100 μmol/L以下浓度对7901细胞增殖无明显抑制作用，而在200 μmol/L以上浓度时对7901细胞增殖有明显的抑制作用，其24 h和48 h IC50分别为805.4 μmol/L和463.3 μmol/L。12.5 μmol/L以上浓度的EGCG对7901细胞的端粒酶活性有明显的抑制作用，其24 h和48 h IC50分别为27.4 μmol/L和19.5 μmol/L。EGCG处理7901细胞能显著抑制其hEST2/hTRT和c-myc mRNA表达，且抑制程度与EGCG剂量有关，但对hTRRNA和TP1 mRNA表达无明显影响。结论 EGCG在非细胞毒性剂量时就能有效地抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，此可能是其防癌抗癌的机制之一。
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 端粒酶 胃癌细胞 -
双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭
目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.
关键词： 胃癌细胞 双氢青蒿素 增殖 Wnt/β-catenin -
模拟CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响
目的 通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响.方法 建立体外模拟CO2的气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为12 mmHg,作用时间4 h.处理后用MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞周期变化.结果 MTT法检测细胞增殖结果显示,气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖速度与对照组比较无显著性差异(P＞0.05);流式细胞仪检测人胃癌MKN-45细胞周期,CO2气腹组增殖指数与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论 体外模拟持续12 mmHg CO2气腹环境,连续对人胃癌MNK-45细胞作用4 h,不会促进胃癌细胞的增殖和生长.
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幽门螺杆菌对胃癌细胞线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ表达的影响
目的观察幽门螺杆菌(H.pylori)作用于胃癌细胞后线粒体编码基因COX Ⅰ mRNA及蛋白的表达变化,探讨H.pylori致胃癌的分子机制.方法H.pylori培养滤液分别作用于胃癌细胞4、8和12 h后,收集细胞,应用RT-PCR和Western blot法检测各时相点COX Ⅰ基因和蛋白表达变化.结果H.pylori培养滤液作用4 h后,线粒体COX Ⅰ mRNA的表达开始降低,8 h下降更明显,12 h下降速度减缓.各时相点的表达量明显低于对照组(P＜0.05).COX Ⅰ蛋白表达呈现出相同的趋势,各时相点的表达量明显低于对照组(P＜0.05).结论H.pylori可下调胃癌细胞线粒体编码基因COXⅠ mRNA及蛋白的表达,影响线粒体功能.
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胃癌细胞中端粒位置效应研究
目的研究插入端粒片段的荧光素酶报道质粒在胃癌细胞的转染及它对相邻荧光素酶报道基因表达的影响,探讨胃癌细胞中端粒位置效应的存在.方法将pTET-OFF调节质粒和携带荧光素酶报道基因的pTRE2-Hyg-Luciferase反应质粒共转染胃癌细胞SGC7901,经强力霉素(deoxycyline)诱导24h后检测报道基因活性,观察强力霉素诱导的抑制反应.然后将插入有端粒片段的荧光素酶报道质粒pBX质粒和对照质粒pBX-nfl(no teloemere fragment)分别与pTET-OFF调节质粒共转染细胞,在强力霉素诱导下,检测报道基因活性的改变.结果共转染pTET-OFF和pTRE-Hyg-Luciferase质粒的SGC7901细胞,在强力霉素作用下荧光素酶报道基因的活性逐渐降低.强力霉素诱导分别共转染有pTET-OFF和pBX质粒或pTET-OFF和pBX-nfl的细胞时,前者荧光素酶活性较后者降低4倍.结论转染TET-OFF基因表达调控系统的胃癌细胞SGC7901受强力霉素的诱导抑制;转染入胃癌细胞中的端粒片段降低了存在它附近荧光素酶报道基因的表达水平.
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胃癌细胞NF-κB和survivin的表达对 TRAIL抗瘤作用的影响
目的探讨胃癌细胞NF-cB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响.方法应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法,观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞凋亡率,Western blot方法分析四种胃癌细胞中NF-κB和survivin的表达.结果TRAIL300 ng/ml作用于胃癌细胞24 h后,胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-7901的凋亡率分别为36.05%、20.27%、16.50%和11.80%.Western blot结果显示SGC-7901细胞NF-κB、survivin的表达均高于MKN28细胞的表达.结论TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象,可能与凋亡抑制因子survivin和NF-κB的表达有关.
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IL-24联合靶向减毒沙门菌载体SL7207／pBud-V P3对胃癌细胞的生长抑制作用
目的：探讨白细胞介素（IL）‐24联合靶向减毒沙门菌载体SL7207／pBud‐VP3对胃癌细胞生长的抑制作用及机制。方法构建 pBud‐VP3‐IL‐24真核双表达质粒，利用高压电穿孔法将pBud‐Vp3‐IL‐24质粒导入减毒沙门菌SL7207株中，构成SL7207／pBud‐VP3‐IL‐24菌株。建立小鼠胃癌移植瘤模型，将模型随机分为生理盐水对照组、SL7207／pBud组、SL7207／pBud‐VP3组及SL7207／pBud‐VP3‐IL‐24组，菌株口服饲喂荷瘤小鼠，测量肿瘤体积并计算抑瘤率。采用蛋白质印迹法检测肿瘤组织中IL‐24的表达；采用实时荧光定量‐PCR（RT‐PCR）检测干扰素‐γ（IFN‐γ）、IL‐6及肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）水平；采用免疫组织化学法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶‐3（Caspase‐3）及血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果成功构建基于IL‐24的减毒沙门菌载体系统SL7207／pBud‐VP3‐IL‐24；治疗14 d后，胃癌组织可检测到IL‐24蛋白的表达；治疗28 d后，SL7207／pBud‐VP3‐IL‐24组与其他组比较，肿瘤体积缩小并能够明显抑制肿瘤生长，差异有统计学意义（ P＜0．05）。RT‐PCR及免疫组织化学显示，IL‐24联合SL7207／pBud‐VP3能够明显增加免疫因子IFN‐γ、IL‐6及TNF‐α的表达水平（P＜0．05），上调Caspase‐3及下调VEGF的表达（P＜0．05）。结论 IL‐24联合SL7207／pBud‐VP3可以协同发挥对胃癌细胞的生长抑制作用，其作用机制与肿瘤凋亡促进、肿瘤血管抑制、免疫调节等有关。
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胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响
目的探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响.方法应用细胞培养、PI染色、流式细胞仪检测的方法,观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率,western blot 方法分析4种胃癌细胞中bcl-2和Caspase3的表达.结果 TRAIL300ng/ml作用于胃癌细胞24h后, 胃癌细胞MKN28、 MKN45、 AGS 和SGC-7901的凋亡率分别为36.05% 、20.27% 、16.50% 和 11.80%.Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞,而bcl-2的表达在各细胞间并无明显差别.结论胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关,而与bcl-2的表达无关.
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左金丸醇提物抑制幽门螺旋杆菌感染人胃癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究
目的 研究左金丸醇提物对幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞生长及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 以不同浓度(7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 μg/mL)的左金丸醇提物分别作用于幽门螺旋杆菌感染的人胃癌MKN45细胞,24、48、72 h后用Western blot法检测不同浓度的左金丸醇提物作用于幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞时凋亡相关蛋白Bax、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达情况.结果 幽门螺旋杆菌感染MKN45细胞组、左金丸醇提物低剂量(40 μg/mL)组、左金丸醇提物高剂量(180 μ/mL)组凋亡细胞百分比分别为:(0.28±0.105)%、(3.27±0.702)%、(7.7±0.721)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率呈剂量依赖性;Western blot检测结果显示,左金丸醇提物低、高剂量作用幽门螺旋杆菌感染MKN45细胞24 h后,PARP蛋白(89×103)、Bax蛋白表达明显增强,凋亡率上升,并呈现剂量依赖性.结论 左金丸醇提物能抑制幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡.调控凋亡相关基因Bax、PARP的表达可能是其诱导幽门螺旋杆菌感染的人胃癌MKN45细胞凋亡的分子机制之一.
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低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例的影响与HIF-2α、OCT-4表达变化的关系
目的:通过观察低氧对人胃癌SGC7901细胞株侧群(side population,SP)细胞比例的影响及其与HIF-2α和OCT-4表达变化的关系,初步研究低氧对肿瘤干细胞的影响及机制.方法:Hoechst33342染色检测人胃癌SGC7901细胞系SP细胞比例,免疫荧光化学法检测OCT-4在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2α和OCT-4蛋白的表达.结果:常氧下人胃癌SGC7901细胞系中SP细胞的比例为2.36%,低氧诱导24、48、72h后其比例逐渐增加,分别为3.01%、3.23%、3.45%(P<0.05);常氧下OCT-4在SP和非SP细胞中的表达差异无统计学意义(P>0.05),低氧诱导24、48、72h后,OCT-4在SP细胞和非SP细胞中的表达逐渐增强(P<0.05),在SP细胞中的表达要高于非SP细胞.常氧下HIF-2α和OCT-4蛋白呈低水平表达,低氧诱导24、48、72h后,二者的表达逐渐增加(P<0.05),且HIF-2α和OCT-4蛋白呈高度正相关(P<0.05).结论:低氧可使人胃癌SGC7901细胞系中的SP细胞增多,其机制可能与低氧诱导HIF-2α-OCT4通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关.
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解毒益气方对胃癌细胞SGC-7901凋亡及相关基因的影响
目的:观察解毒益气方体外对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及凋亡相关基因的影响.方法:①应用MTT法检测解毒益气方体外对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响;②应用Annexin V/PI检测该方对胃癌细胞早期凋亡率的影响;③RT-PCR法检测该方体外对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响.结果:①解毒益气方对SGC-7901有良好的增殖抑制作用.②解毒益气方大、小剂量组作用胃癌细胞SGC-7901后早期凋亡率分别为27.79％、11.09％.③解毒益气能上调凋亡相关基因Bax表达,下调Bcl-2的表达.结论:解毒益气方对胃癌SGC-7901有明显的抑制增殖、促进凋亡的作用,其分子机制可能与上调Bax表达,下调Bcl-2表达有关.
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苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的研究
目的:探讨苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901增长的抑制并诱发其凋亡.方法:从新鲜的苦瓜种子中分离纯化的苦瓜蛋白,通过MTT比色法分析其对SGC1901细胞以及正常人二倍体细胞2BS增殖的影响,并应用光镜、电镜观察及流式细胞术等手段,研究苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901的形态学、DNA含量变化.结果:苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的IC50约为18ug/ml,在相同剂量下对2BS细胞的抑制率仅为8%;与对照组细胞相比,加药后的SGC7901细胞发生典型的凋亡形态学改变及DNA含量变化.结论:苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的增长具有明显的抑制作用,并能诱发其凋亡.
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γ射线照射对外周血单个核细胞体外抗瘤活性的影响
观察1 Gy γ射线照射的外周血单个核细胞对体外培养人胃癌细胞系MKN-28细胞的杀伤作用的影响,辐射剂量率为17 Gy/min.实验设MKN-28肿瘤细胞对照组、照射和未照射的外周血单个核细胞对照组、照射和未照射的外周血单个核细胞与肿瘤细胞共培养组.利用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光双染色法,定期观察外周血单个核细胞存活情况及共培养时对肿瘤细胞的杀伤情况,240 h后收获存活细胞做透射电镜观察.结果表明外周血单个核细胞照射后,其细胞存活时间明显比未照射组短;但培养至240 h时,照射与未照射组中都有少量细胞存活,但体积都比淋巴细胞大,经电镜观察表明主要是单核细胞(95%)和树突状细胞(5%);照射后的外周血单个核细胞与MKN-28肿瘤细胞共培养96 h后肿瘤细胞已全部死亡,与未照射组比较,照射组外周血单个核细胞对胃癌细胞的杀伤作用明显增强,因此1 Gy γ射线辐照可以增强外周血单个核细胞的杀肿瘤细胞作用,但1 Gy γ射线辐照可以导致外周血单个核细胞中的淋巴细胞在体外培养的存活时间明显缩短,而对其中的单核细胞和树突状细胞的存活和增殖能力影响不大.
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miR-339-3p和miR-339-5p在体外胃癌细胞中的表达和意义
目的 观察人胃癌细胞株及正常人胃黏膜上皮细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平,通过功能获得型(gain of function)实验验证miR-339-3p和miR-339-5p与胃癌的相关性,并阐明二者在肿瘤发生中的意义.方法 采用SYBR Green Ⅰ嵌合荧光法实时定量PCR技术分别检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,胃癌MKN-45、SGC-7901及BGC-823细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平;将外源性miR-339-3p mimics和miR-339-5pmimics转染胃癌MKN-45细胞株,采用RT-PCR法检测其转染率,并应用流式细胞术和CCK-8法分别检测转染72 h后MKN-45细胞的凋亡及增殖能力的变化.结果 miR-339-3p和miR-339-5p在胃癌MKN-45、SGC-7901及BGC-823细胞株中的表达均下调;与对照组相比,转染miR-339-3pmimics及miR-339-5p mimics后,MKN-45细胞株的凋亡率明显增高(P＜0.05),而增殖能力明显减弱(P＜0.01).结论 miR-339-3p和miR-339-5p在3种胃癌细胞株中均呈低表达.miR-339-3p和miR-339-5p可能参与了胃癌细胞的增殖与凋亡机理.
关键词： 微小RNA-339-3p 微小RNA-339-5p 胃癌细胞 增殖 凋亡 -
组织因子对人胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响
目的 构建稳定转染人组织因子(TF)的人胃癌细胞株SGC7901,研究TF对胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响.方法 采用巢式PCR技术自人胎盘组织克隆目的基因TF,应用脂质体介导的转染技术将其导入人胃癌细胞株SGC7901,采用G418筛选稳定表达TF的细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测TF mRNA及蛋白的表达,并进行Transwell实验及划痕实验观察细胞体外侵袭转移能力的变化.结果 经基因测序证实成功构建了稳定、高效表达TF的人胃癌细胞系SGC7901/TF.转染组TF mRNA及TF蛋白表达增高；与阴性对照组及空白对照组相比,转染组细胞的体外侵袭转移能力增强.结论 TF能够增强人胃癌细胞的体外侵袭转移能力.
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不同压强与时程CO2气腹对胃癌细胞黏附侵袭能力的影响
目的 分析不同压强与时程的CO2气腹对胃癌细胞黏附侵袭能力的影响.方法 建立体外CO2气腹模型,选用3种胃癌细胞株MKN-45、SGC-7901和MKN-28,分别暴露在0 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、9 mm Hg (2 h、4 h)和 15 mm Hg(2 h、4 h)的条件下.RT-PCR法检测胃癌细胞中黏附侵袭分子E-cadherin、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A) mRNA在上述条件下的表达水平; 流式细胞仪检测胃癌细胞中E-cadherin和ICAM-1蛋白在0 mm Hg和15 mm Hg(4 h)条件下的表达水平.结果 随着CO2时程延长或压强升高,E-cadherin mRNA的表达水平有下降趋势,而ICAM-1、MMP-2和VEGF-A mRNA的表达水平则有上升趋势; 流式细胞仪检测结果显示E-cadherin蛋白的表达水平有下降趋势,而ICAM-1蛋白的表达水平有升高的趋势.但各种条件下黏附侵袭分子的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在压强不高于15 mm Hg和时程不超过4 h前提下,不同压强与时程的CO2气腹对胃癌细胞株的黏附侵袭能力无明显影响,并不增加肿瘤的转移几率.
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胃癌细胞培养上清液及转化生长因子-β1促进腹膜间皮细胞βig-h3蛋白的表达
目的 研究胃癌细胞SGC-7901培养上清液及转化生长因子-β1 (TGF-β1)是否可促进人类腹膜间皮细胞表达βig-h3蛋白.方法 培养胃癌细胞SGC-7901,取第3天培养液上清与DMEM培养液的混合液(1:4)以及0、1.0、10.0和50.0 ng/ml的TGF-β1分别刺激人类腹膜间皮细胞HMrSV5 0、3、6、12及24 h,ELISA方法检测上清液中βig-h3蛋白浓度,Western blot法检测细胞内βig-h3蛋白浓度.结果 对照组有基础量的βig-h3蛋白表达；胃癌细胞SGC-7901培养上清液及TGF-β1均可明显增加HMrSV5细胞上清液及细胞内的βig-h3蛋白浓度(P＜0.05),且TGF-β1的刺激作用呈时间及浓度依赖性.结论 胃癌细胞SGC-7901培养上清液及TGF-β1可明显刺激HMrSV5细胞表达和分泌βig-h3蛋白.
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VEGF-ASODN转染对胃癌细胞VEGF表达及生长的抑制作用
目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染胃癌细胞SGC-7901对其VEGF表达和生长的抑制作用.方法 人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,24 h后实时荧光定量RT-PCR检测细胞VEGF mRNA起始拷贝数,ELISA法检测细胞及培养液上清中VEGF 蛋白含量,Western blot法检测细胞生存素(survivin)蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响.结果 VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA水平、降低胃癌细胞及其培养液中VEGF蛋白含量、降低survivin蛋白含量、增加细胞凋亡、抑制细胞活性及生长(P＜0.05).结论 VEGF-ASODN转染胃癌细胞SGC-7901能显著抑制VEGF和survivin蛋白表达、增加细胞凋亡、抑制细胞生长.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 反义寡核苷酸 转染 胃癌细胞 表达 -
P物质对体外培养的胃癌细胞内游离钙浓度的影响
目的 研究P物质(substance P, SP)对体外培养的人低分化胃癌细胞MKN45内游离钙浓度的影响.方法 在RPMI 1640培养液中培养人胃癌细胞系MKN45,应用钙特异性荧光指示剂Furu-3/AM负载细胞,用ASN-1377642(NK-1受体拮抗剂)、尼卡地平和不同浓度的SP作用于人胃癌细胞MKN45,采用激光扫描共聚焦显微镜观测胃癌细胞内游离钙浓度的变化.结果 在Hanks液(含钙离子)中加入10、50及100 nmol/L SP可以显著升高胃癌细胞内钙离子浓度(P＜0.05),并且呈剂量依赖性(P＜0.05); 在无外钙时,SP引起细胞内钙离子浓度升高的幅度低于有外钙时(P＜0.05); 在Hanks液中加入NK-1受体拮抗剂ASN-1377642和钙通道阻滞剂尼卡地平孵育后,SP引起胃癌细胞内钙离子浓度升高的幅度显著降低,与Hanks液组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论SP可以显著升高胃癌细胞内钙离子浓度,细胞内钙离子浓度的升高源于内钙释放和外钙内流.
关键词： P物质 胃癌细胞 钙离子 激光扫描共聚焦显微镜
