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卡培他滨促进胃癌细胞凋亡的实验研究
[目的]研究卡培他滨促进胃癌细胞凋亡的分子机制.[方法]卡培他滨处理人胃癌细胞BGC-823;用透射电镜和琼脂糖凝胶电泳(DNA Ladder)检测细胞凋亡;RT-PCR方法检测caspase-3 mRNA表达;Western Blotting检测Caspese-3蛋白表达.[结果]不同剂量的卡培他滨均可促进胃癌细胞BGC-823凋亡;中、高浓度卡培他滨处理的胃癌细胞与对照组比较,caspase-3 mRNA及蛋白水平均表达上调(P<0.05).[结论]卡培他滨可促进胃癌细胞BGC-823凋亡,机制可能是增加caspase-3 mRNA及蛋白表达,增强Caspases级联反应,从而促进凋亡的发生.
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不同浓度舒芬太尼对SGC-7901胃癌细胞活力的影响
目的 探究不同浓度舒芬太尼对人胃癌SGC-7901细胞活力的影响,以期为临床作出贡献.方法 将培养至对数生长期的胃癌SGC-7901细胞采用随机数字表法随机分为对照组(C组)、舒芬太尼0.5ng/ml组(F1组)、5ng/ml组(F2组)、50ng/ml组(F3组)和500ng/ml组(F4组),分别以0,0.5,5,50,500ng/ml浓度的舒芬太尼作用于胃癌细胞,通过FDA/PI荧光双染观察舒芬太尼作用后胃癌SGC-7901细胞存活情况,并于孵育24h、48h和72h后用CCK-8试剂盒检测细胞的活力,于孵育24h后用流式细胞仪和Annex-inV-FITC/PI双标记检测细胞周期分布和细胞凋亡率.结果 随着舒芬太尼浓度的增高,胃癌SGC-7901细胞死亡比例不断增加,正常细胞存活比例下降,胃癌SGC-7901细胞活力也下降;F4组细胞12h、24h、48h时和F3组细胞24h、48h时活力下降较C组明显,差异有统计学意义(P＜0.05);胃癌SGC-7901细胞凋亡率随着舒芬太尼浓度的增加而升高,其中F2～F4组胃癌SGC-7901细胞凋亡率升高较C组明显,差异有统计学意义(P＜0.05);F1组停滞在S期和G2/M期的比例与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);F2～F4组停滞在S期的比例明显下降,而停滞在G2/M期的比例明显升高(P＜0.05),且随着舒芬太尼浓度的升高,越来越多的细胞被阻滞于G2/M期.结论 舒芬太尼浓度≥5ng/ml时,可剂量依赖性抑制胃癌SGC-7901细胞的活力,其机制可能与诱导细胞凋亡,使细胞停滞于G2/M期有关.
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奥曲肽联合雷替曲塞对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响
目的 检测奥曲肽和雷替曲塞不同药物及浓度作用下胃癌细胞株SGC-7901表达VEGF-C阳性率,从细胞水平探讨联合用药对胃癌细胞的抑制作用.方法 选择胃癌细胞株SGC-7901进行常规培养、传代后,进行MTT实验,各组相应给予奥曲肽500μg/L、250 μg/L,雷替曲塞320 μg/L、160μg/L,联合用药组奥曲肽+雷替曲塞250 μg/L+ 160μg/L、125 μg/L+ 80μg/L,分别培养24 h、48 h、72 h后,测定各组细胞的抑制率并进行比较.另选择奥曲肽组500μg/L、雷替曲塞组320μg/L、联合用药组奥曲肽+雷替曲塞250 μg/L+160μg/L 3组培养48 h后,通过免疫组化方法测定各组VEGF-C的表达,用半定量法统计阳性率,进行比较.结果 奥曲肽及雷替曲塞组均随着浓度增高及作用时间的延长,对胃癌细胞抑制率逐渐增加,奥曲肽500 μg/L组作用72 h达到大抑制率,高于250 μg/L组(P＜0.05)；雷替曲塞组320μg/L作用72 h达到大抑制率,高于160μg/L组(P＜0.05).联合用药奥曲肽250 μg/L+雷替曲塞160 μg/L组对胃癌细胞的抑制率均明显高于奥曲肽500 μg/L组以及雷替曲塞320μg/L组(P＜0.05).免疫组化实验显示奥曲肽、雷替曲塞及联合用药组均可以抑制VEGF-C的表达,各组阳性率与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05),奥曲肽+雷替曲塞250 μg/L+ 160μg/L组VEGF-C表达阳性率为与奥曲肤500 μg/L组与雷替曲塞320 μg/L组相比有显著性差异(P均＜0.05).结论 奥曲肽具有雷替曲塞的增效作用.两药联合可以明显降低VEGF-C的表达,提示在抑制胃癌细胞生长的同时还可以抑制胃癌淋巴管形成,降低胃癌细胞的浸润和转移.
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叶酸缺乏协同保罗样激酶1小干扰 RNA 抑制胃癌细胞株生长的研究
目的：探讨叶酸缺乏和保罗样激酶1（PLK－1）小干扰RNA（ siRNA）的联合作用对胃癌肿瘤细胞的影响。方法 PLK－1 siRNA用LipofectamineTM 2000作载体转染胃癌细胞株 SGC7901和 BGC823， real-time PCR 和 Western blot 验证转染效果；然后将转染的SGC7901和 BGC823细胞株，继续在叶酸缺乏和正常叶酸浓度培养基中培养72 h，检测细胞增殖、凋亡、周期和蛋白Bcl－2的变化情况。结果叶酸缺乏与PLK－1 siRNA具有协同抑制SGC7901、BGC823细胞增殖，促进凋亡和使细胞周期停滞在G2／M期的作用，二者能协同抑制SGC7901、BGC823Bcl －2蛋白表达。结论叶酸缺乏和PLK－1 siRNA均能抑制胃癌细胞SGC7901、BGC823的生长，两者具有协同效应。该效应可能与Bcl－2蛋白的抑制有关。
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幽门螺杆菌根除治疗对肠上皮化生和萎缩性胃炎的影响
目的 探讨Hp感染致胃黏膜肠上皮化生和萎缩性胃炎的发病机制.方法 纳入266例Hp阳性者,随机分为对照组130例和治疗组136例.观察治疗组(予Hp根除治疗)、对照组(予安慰剂)肠上皮化生程度、萎缩性胃炎进展、端粒酶活性、Survivin-mRNA表达,并进行治疗前后及组间比较.结果 Survivin在肠上皮化生和萎缩性胃炎组织中高表达.对Hp感染患者进行根除治疗后促进肠上皮化生的逆转、减轻萎缩性胃炎、降低Survivin mRNA的表达、抑制端粒酶活性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 对Hp感染阳性患者进行根除治疗可以通过抑制端粒酶活性、Survivin mRNA表达途径阻止肠化的发生.
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端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的影响
目的 观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用.方法 用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性.结果 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,端粒酶活性抑制.结论 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导胃癌细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖.
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酸性应激引起胃癌SGC7901细胞自噬增强
目的 酸应激对胃癌SGC7901细胞自噬强度的影响.方法 选择人胃癌细胞系SGC7901作为研究细胞,用调节到pH 6.5或pH 7.4的完全培养基处理胃癌SGC7901细胞.采用免疫荧光检测酸应激时胃癌细胞系SGC7901中自噬体的形成情况,采用Western-Blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况.结果 激光共聚焦电镜下观察到酸应激处理的胃癌SGC7901细胞荧光呈颗粒状数较对照组细胞内荧光颗粒数显著增多.酸性完全培养基处理的胃癌SGC7901细胞较对照组SGC7901细胞LC3-Ⅱ生成增多,p62表达减少.结论 酸应激可以引起胃癌SGC7901细胞自噬增强.
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5-Fu对人胃癌细胞金属硫蛋白表达的影响
目的:探讨5-Fu对人胃癌细胞的杀伤作用及对金属硫蛋白(MT)表达的影响.方法:利用人胃癌BGC-823细胞株在培养过程中加入5-Fu继续培养5h或10h收获,然后用HE和免疫组化染色,光镜下进行观察.结果:实验组BGC-823细胞变形,MT表达强度和位置有明显变化.结论:5-Fu作用5h对胃癌细胞有杀伤作用,对癌细胞形态和MT的表达均有明显影响.
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NDV感染体外诱导胃癌细胞BGC-823的凋亡
目的:研究新城疫病毒在体外抗胃癌细胞活性及其与细胞凋亡的关系.方法:应用倒置显微镜观察细胞形态、MTT法测NDV在体外对BGC-823的抑制和杀伤作用,同时用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡情况及细胞分裂周期各时象的变化.结果:NDV在体外可使BGC-823胃癌细胞形成明显的细胞病变效应、细胞生长抑制及细胞凋亡,且细胞凋亡率与感染时间呈正相关.G2、S期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:NDV具有显著的抗BGC-823胃癌细胞活性.
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凋亡相关因子 p21和 Caspase -3及 Survivin 在胃癌中的研究进展
随着社会的发展，人类文明的进步，肿瘤已成为威胁人类生命和健康的首要疾病。肿瘤是机体在多种因素的作用下基因水平失调形成的新生物［1］。研究发现，发达国家和我国大中城市的癌症死亡人数占全部死亡人数的第一位，对人类的生存已构成严重威胁。胃癌（gastric carcinoma）起源于胃黏膜上皮细胞，临床表现无特异性，是癌症死亡的重要原因之一，其发生、发展涉及到细胞内基因水平、蛋白水平的相互交叉等共同参与，是中国乃至全世界多发肿瘤之一，在各种恶性肿瘤中位于第二位，反映了公众的健康问题［2-3］。一般而言，胃癌患者五年的平均存活率大约22%，进展期胃癌患者的五年存活率不到5%，由于胃癌的浸润和迁移，胃癌根治术后易复发。随着对胃癌发病机制研究的深入，人们发现胃癌的发生、发展与胃癌细胞的凋亡有着密切关联，胃癌的自主增殖和凋亡失控是肿瘤发生、发展的本质的生物学特性，因而研究细胞凋亡在胃癌的发生、发展中起重要作用［4］。
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砷剂对肿瘤的生物学作用
砷剂作为一种抗癌药用于治疗肿瘤已有几百年历史,19世纪初1%的亚砷酸钾用来治疗慢性粒细胞性白血病.同时砷剂又是一种毒物,随着化疗和放疗药物的临床应用,砷剂逐渐被淘汰.自哈尔滨医科大学首次报道静脉滴注三氧化二砷治疗复发急性早幼粒细胞白血病(APL)达到很高的完全缓解率后,国内外对砷剂与肿瘤的研究发展很快,发现砷剂对白血病、红白血病甚至实体瘤如胃癌细胞、胰腺癌细胞等有令人满意的效果,提示As2O3具有一个相对较广泛的诱导凋亡效应谱,故有必要深入了解其生物学作用.
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苏木提取液对胃癌细胞增殖及凋亡作用的研究
目的 探讨苏木提取液对人胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制及凋亡作用.方法 采用细胞计数法绘制生长曲线检测苏木提取液对SGC-7901细胞的生长抑制作用;苏木素-伊红(HE)及荧光染色观察用药后细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形.结果 生长曲线提示苏木提取液对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用;形态学观察可见典型的细胞凋亡特征,如细胞核固缩、染色质凝聚及凋亡小体形成,且药物作用呈现一定的浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯形.结论 苏木提取液对人胃癌细胞株SGC-7901有明显的生长抑制及诱导凋亡的作用.
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miR-105对2种胃癌细胞株生物学功能的影响
目的:探讨miR-105对胃癌细胞生物学功能的影响.方法:采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测miR-105在细胞株GES-1和SGC-7901中的表达水平.转染miR-105 mimics后,设立为miR-105 mimics组,并同时设立阴性对照组(NC组).RT-qPCR法检测miR-105表达水平,MTT法检测细胞活力,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Caspase3活性检测细胞抗凋亡能力.通过生物信息学软件分析预测miR-105的下游靶向调控基因蛋白激酶(AKT1),RT-qPCR和Western Blot检测AKT1表达水平变化.结果:miR-105 mimics转染SGC-7901后,miR-105的表达水平为2.58±0.08,与NC组相比明显增高(P＜0.05);miR-105 mimics组胃癌细胞活力为1.38±0.08,随着时间递增细胞增殖能力增强,高于NC组(P＜0.05);迁移能力增强到128.2±4.22,高于NC组(P＜0.05);miR-105 mimics组Caspase3活性在48 h降到低为0.53±0.13,低于NC组(P＜0.05);miR-105 mimics组中AKT1表达水平为1.54±0.03,高于NC组(P＜0.05).结论:miR-105能促进胃癌细胞SGC-7901增殖,增强其细胞活力、迁移能力,抑制其凋亡,可能参与了胃癌发生发展过程.
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Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞SGC-7901中的表达
目的:研究Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞中的表达,探讨其与胃癌发生的关系.方法:培养胃癌细胞(SGC-7901)和正常肠上皮细胞(IEC-6),用免疫细胞化学法检测两种细胞中Shh蛋白的表达,用RT-PCR法检测Shh mRNA在两种细胞中的表达.结果:Shh蛋白在正常肠上皮细胞中表达阳性率为15%,在胃癌细胞中表达阳性率为70%,Shh蛋白在正常肠上皮细胞中的表达明显低于胃癌细胞(P＜0.05).Shh mRNA在正常肠上皮细胞中不表达或低表达,在胃癌细胞中明显表达(P＜0.05).结论:Shh信号通路可能与胃癌发生有关.
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奥曲肽对胃癌细胞株中存活素表达的抑制作用
目的 探讨奥曲肽诱导胃癌细胞凋亡的机制.方法 将胃癌细胞分为6组:不加药组(阳性对照A组)、0.1 mg/L组(B组)、0.2 mg/L组(C组)、0.5 mg/L组(D组)、1.0 mg/L组(E组)、2.0 mg/L组(F组),每组设6个复孔,爬片后进行免疫组织化学染色,观察存活素(Survivin)表达情况,吖啶橙(AO)染色、荧光显微镜下观察细胞凋亡情况.结果 随着奥曲肽浓度的增大,Survivin表达阳性率逐渐下降,凋亡细胞数逐渐增多.结论 奥曲肽可诱导癌细胞发生凋亡,可抑制胃癌细胞中Survivin的表达,其诱导凋亡的机制可能与抑制胃癌细胞中Survivin的表达有关.
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MTT法和SUB-G1法检测金克对胃癌细胞的抑制作用
目的:拟探讨金克是否能诱导胃癌细胞凋亡,金克能否有效用于胃癌患者的治疗.方法:利用MTT法和SUB-G1法分析金克诱导抑制细胞的能力.将不同浓度的金克与胃癌细胞孵育,在不同的时间点收获,探求金克诱导胃癌细胞抑制的佳作用时间及作用浓度.结果:通过MTT法和SUB-G1法分析结果显示金克对胃癌细胞的抑制作用,浓度为1.5g/L的金克诱导胃癌细胞36小时后抑制率达到高峰.结论:MTT法和SUB-G1法是两种快捷、有效检测药物作用的方法,金克对于胃癌细胞的抑制作用介于低度敏感和不敏感之间,但是其能增强免疫,无明显毒副作用,具有广泛的临床应用前景.
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蒙药巴特日对胃癌细胞抑制作用及其机制研究
目的:研究蒙药巴特日对体外培养的人胃癌MGC-803细胞系的抑制作用,并探讨其作用机理.方法:通过倒置光显微镜观察细胞形态学变化,并利用RT-PCR技术对调亡相关基因bcl-2的表达进行研究.初步探讨巴特日对胃癌细胞调亡的影响及其分子机制.结果:蒙药巴特日能抑制MGC-803细胞的增殖,光学显微镜下可见凋亡细胞；RT-PCR结果显示,胃癌细胞经不同浓度巴特日处理后,抑制调亡的bcl-2基因表达较对照组减弱.结论:蒙药巴特日对人胃癌MGC-803细胞的增殖具有明显抑制作用,这种抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡而实现的.
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癌源exosomes的制备及其对胃癌细胞生长的作用
目的:分离癌细胞源exosomes,对其超微结构进行鉴定,探讨exosomes对胃癌细胞增值活性的影响.方法:采用超速梯度离心法从MGC 803胃癌细胞培养上清液中提取exosomes,通过透射电镜技术对其超微结构进行鉴定,并利用MTT法探讨exosomes对胃癌细胞增殖活性的作用.结果:胃癌MGC 803细胞来源的exosomess具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,直径约50～130nm.Exosomes以剂量依赖性的方式促进MGC803细胞的增殖.结论:癌细胞来源的exosomes能促进胃癌细胞增殖,其表面所负载肿瘤抗原可能在肿瘤细胞增殖过程中起重要的信息传递作用.
关键词： 癌源exosomes 胃癌细胞 生长 -
异鼠李素抑制人胃癌细胞表皮生长因子受体途径
目的 通过体外试验研究异鼠李素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长的表皮生长因子受体(EGFR)信号途径.方法 分别用0.8×10-4,1.2×10-4,2.4×10-4mol/L的异鼠李素、10%的RPMI 1640、0.048mol/L氟尿嘧啶处理SGC-7901细胞24h后收集细胞,计活细胞数,计算生长抑制率;用Lipofect转染法将EGFR或生长因子受体结合蛋白2(grb2 antisense)分别转入胃癌SGC-7901细胞中,用RT-PCR法分别检测EGFR和grb2 mRNA的表达水平;采用磷酸钙-DNA沉淀转染法测定AP-1活性.结果 0.8×10-4 1.2×10-4,2.4 x 10-4 mol/L异鼠李素和0.048mol/L氟尿嘧啶处理24h后对细胞生长的抑制率分别为55.06%,62.03%,66.46%.70.25%.3个剂量异鼠李素处理细胞后EGFR、grb2 mRNA表达水平、AP-1活性均明显下降,且随着剂量的增加而下降.EGFR、grb2 antiense分别转入SGC-7901细胞后,用2.4×10-4mol/L异鼠李索处理24h,阻断EGFR后转染细胞grb2的表达和AP-1活性比未转染的分别提高了62.79%和60%(P<0.05);阻断grb2后转染细胞AP-1活性比未转染的提高36%(P<0.05),而EGFR mRNA表达水平无显著变化(P>0.05).结论 异鼠李素是通过抑制EGFR信号转导途径的激活抑制人胃癌SGC-7901细胞生长.
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番茄红素对人胃癌细胞生长的抑制作用
目的 通过体外试验研究番茄红素对人胃癌(SGC)-7901细胞生长的作用.方法 将番茄红素作用于人胃癌SGC-7901细胞,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定半数抑制浓度(IC50),细胞计数法和集落形成试验检测细胞生长抑制率,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验测定对细胞DNA合成的影响,倒置显微镜下观察人SGC-7901的形态变化.结果 番茄红素作用于人SGC-7901细胞后,细胞生长明显受到抑制,24,48,72,96,120,148和172 h的IC50分别为1.0×10-4,9.2×10-5,2.6×10-5,4.8 × 10-5,3.5×10-5,4.3×10-5和3.1×10-5 mol/L.0.3×10-4,0.5×10-4,10-4mol/L的番茄红素对人SGC-7901 7 d的抑制率分别为64.75%,79.02%,87.13%,SGC-7901的集落形成率分别为(30.2±1.9)%,(22.0±2.1)%,(16.9±2.0)%.番茄红素作用于人SGC-7901 48 h的3H-TdR掺入量分别为(3757.06±114.27),(3148.24±190.23),(2408.32±155.83)cpm,显著低于阴性对照组的(5470.25±217.16)cpm(P＜0.01).不同剂量的番茄红素处理后的细胞变圆,变小,脱落,排列稀疏,部分细胞内出现大小不等的空泡.结论 番茄红素在体外能明显抑制人SGC-7901细胞增殖,且存在剂量-效应关系.
