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沙门菌对小鼠胃癌细胞增殖及β-防御素-2表达的影响
目的 探讨沙门菌对小鼠胃癌细胞MFC增殖及β-防御素-2(mouse3-defensin,mBD-2)表达的影响.方法 将不同浓度(10、102、103和104个/ml)沙门菌分别作用MFC细胞不同时间(12、24和48 h)后,MTT法检测沙门菌对细胞抑制的佳浓度及时间;TUNEL法检测不同浓度(10、102、103和104个/ml)沙门菌作用MFC细胞不同时间(12、24和48 h)对细胞凋亡的影响;将不同浓度(10、102、103和104个/ml)沙门菌作用MFC细胞4、8和12h,定量PCR及Western blot法检测mBD-2 mRNA及蛋白水平.结果 浓度103个/ml沙门菌作用24h对MFC细胞的抑制作用明显,细胞凋亡也明显;沙门菌作用MFC细胞8 h时,mBD-2的表达量无论在蛋白还是mRNA水平均较高.结论 mBD-2的表达在浓度103个/ml沙门菌作用8h后达到高,为进一步研究mBD-2的产生机制奠定了基础.
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异鼠李素对人胃癌细胞生长的抑制作用
目的 通过体外试验研究异鼠李素时人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用.方法 将异鼠李素作用于人胃癌SGC-7901细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定IC50,细胞计数法和集落形成试验检测细胞生长抑制率,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验测定对细胞DNA合成的影响,倒置显微镜下观察人胃癌SGC-7901细胞的形态变化.结果 异鼠李素作用于人胃癌SGC-7901细胞后,细胞生长明显受到抑制.不同剂量的异鼠李素处理后的细胞变圆、变小、脱落,排列稀疏,部分细胞内出现大小不等的空泡.结论 异鼠李素在体外能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,且存在剂量-效应关系.
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bcl-2及相关基因在番茄红素诱导人胃癌细胞凋亡过程中的作用
目的 通过体外试验研究bcl-2及相关基因在番茄红素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用.方法 将番茄红素作用于人胃癌SGC-7901细胞,DAPI染色观察细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、bax、p53 mRNA的表达.结果 番茄红素作用于人胃癌SGC-7901细胞后,细胞发生凋亡,凋亡率为78.5%;随番茄红素浓度的增加,bcl-2 mRNA的表达明显降低,bax mRNA和p53 mRNA的表达均显著增加,并均呈剂量-效应关系.结论 番茄红素在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且以促进p53 mRNA过表达,从而上调bax mRNA的表达,下调bcl-2 mRNA表达,即通过改变bax与bcl-2的比例来促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡.
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铁筷子对胃癌及白血病K562细胞体外生长的抑制效应
应用细胞培养技术,观察了铁筷子根水提取物对人胃癌细胞及人白血病K562细胞系集落形成影响,结果表明该提取物对两种恶性肿瘤细胞的生长均有明显抑制作用,使其集落形成率显著低于对照组,镜下见细胞膜粗糙、毛刺,并有崩解破坏现象.
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HER2高表达胃癌细胞中miR-4728-3p表达及生物信息学分析
目的 探讨HER2高表达的胃癌细胞中miR-4728-3p表达状况及其调控靶基因所涉及的信号通路,旨在初步分析miR-4728-3p在胃癌中的作用机制及其与HER2的相关性.方法 首先采用Real-time PCR技术检测胃癌细胞株NCI-N87中miR-4728-3p及HER2 mRNA,然后通过miRanda、DIANA-microT、Targetscan和Targetmine软件预测miR-4728可能的靶基因,并通过DAVID数据库进行靶基因功能富集分析及信号转导通路富集分析.结果 miR-4728-3p及HER2 mRNA在胃癌细胞中均高表达,二者呈正相关(r=0.990,P=0.000).miR-4728-3p预测靶基因共有54个,靶基因功能主要富集于转录活性调节(P=0.014)、DNA结合(P=0.019)及蛋白质磷酸化氨基酸结合(P=0.036)等分子功能,RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控(P=0.001)、转录调控(P=0.003)及细胞内信号级联(P=0.021)等生物学过程以及轴突部分(P=0.008)等细胞组分上;信号转导通路则主要富集于肿瘤通路(P=0.013)和卵母细胞减数分裂通路(P=0.041).结论 miR-4728-3p在HER2高表达的胃癌细胞中表达上调,二者表达呈正相关;生物信息学分析提示miR-4728-3p通过调控其靶基因参与胃癌的发生发展.
关键词： HER2高表达 胃癌细胞 miR-4728-3p 生物信息学分析 -
三黄泻心汤对胃癌细胞增殖的影响
目的:探讨三黄泻心汤对胃癌细胞增殖的影响和机制.方法:以体外培养的胃癌细胞系HGC-27为研究对象,给予三黄泻心汤处理后,采用流式细胞仪检测三黄泻心汤对胃癌细胞系HGC-27细胞周期的影响,免疫荧光检测HGC-27细胞Ki67的表达,定量PCR实验检测增殖相关非编码RNA H19表达的影响.结果:当没有幽门螺旋杆菌时,三黄泻心汤对胃癌细胞系的细胞周期、Ki67及lncRNA H19的表达均无显著影响;而当存在一定浓度的幽门螺旋杆菌时,三黄泻心汤时处于分裂间期和前期(G0/G1期)的细胞的百分比显著的升高,处于DNA复制(S期)的细胞比例及Ki67、lncRNA H19的表达均明显的降低(P＜0.05).结论:在幽门螺旋杆菌存在时,三黄泻心汤显著抑制胃癌细胞系的增殖,可能与降低长链非编码RNA H19的表达有关.
关键词： 三黄泻心汤 胃癌细胞 幽门螺旋杆菌 增殖 LncRNA H19 -
胃肠安对胃癌细胞氧化应激及炎症活化的影响
目的:观察中药胃肠安对胃癌细胞的丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)及核转录因子NF-κB表达的影响,并探讨胃肠安在胃癌微环境中氧化应激及炎症活化的作用.方法:获取胃肠安药物血清,以胃癌细胞(SGC-7901细胞株)为研究对象,设对照组和胃肠安处理组,检测胃癌细胞SOD、MDA、LDH的水平,Western Blot检测胃癌细胞NF-κB蛋白的表达.结果:与对照组相比,胃肠安处理组中胃癌细胞MDA、LDH降低,而SOD水平升高;对照组胃癌细胞NF-κB蛋白相对表达量为(0.68± 0.12),与对照组相比,胃肠安处理组胃癌细胞NF-κB蛋白相对表达量(0.36±0.04)降低.结论:胃肠安可通过抑制胃癌细胞的氧化应激和炎症,改变肿瘤细胞生存微环境,终可能发挥抑制肿瘤生长的作用,其具体效应有待深入研究.
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重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究
目的:通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响.方法:实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素+奥沙利铂组.用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC-7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率.结果:体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC-7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素+奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性(P＞0.05),细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-GI期明显增加(P＜0.01),同时重组人类生长激素+奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加.重组人类生长激素+奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势.结论:体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用.
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靶向survivin基因的siRNA对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的影响
目的:研究靶向survivin基因的siRNA对胃癌细胞,survivin表达的影响,抑制survivin基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的影响.方法:通过脂质体将survivin siRNA导入胃癌细胞株BGC-803,用Real-time PCR和Western-blotting检测转染后细胞内survivin基因表达水平,流式细胞仪和Hochest染色检测细胞凋亡的改变.结果:姜黄素可抑制BGC-803细胞的生长,其生长抑制率和药物浓度与作用时间呈依赖关系;姜黄素作用BGC-803细胞后,survivin蛋白和mRNA表达降低;通过转染survivin siRNA抑制BGC-803细胞survivin基因的表达能促进姜黄素诱导BGC-803细胞凋亡的作用.结论:靶向抑制survivin基因表达后姜黄素诱导胃癌细胞BGC-803凋亡的作用增强.
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天然14肽生长抑素联合5-Fu对胃癌移植瘤的抑制作用
目的 观察14肽生长抑素(SST-14)及其联合5-Fu对BGC-823、MKN-28人胃癌细胞移植瘤生长抑制及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 构建BGC-823、MKN-28人胃癌细胞移植瘤模型,随机分为对照组、SST-14组、5-Fu组、联合组,腹腔注射药物治疗3周后处死裸鼠获取肿瘤组织.测量瘤体重量,计算抑瘤率;免疫组化及Western blot检测瘤组织VEGF的表达.结果 其他三组较对照组均可抑制肿瘤生长,联合组较SST-14、5-Fu单纯用药组抑制作用显著(P＜0.05).免疫组化及Western blot结果显示,与对照组相比,其他三组瘤组织VEGF表达下降(P＜0.05);其中联合组较SST-14组、5-Fu组显著下降(P＜0.05).结论 14肽生长抑素联合5-Fu能够有效抑制不同分化程度胃癌细胞移植瘤生长,且优于单纯用药组,两药具有协同抑制作用,可能通过下调VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成.
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舒林酸对胃癌细胞株SGC7901细胞周期调控及凋亡的影响
目的观察舒林酸影响胃癌细胞株SGC7901细胞周期分布,诱导细胞凋亡,探讨其作用机制方法采用MTT比色法观察舒林酸对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测舒林酸对细胞周期分布的影响,同时结合透射电子显微镜观察舒林酸诱导SGC901细胞凋亡的作用;免疫细胞化学方法观察舒林酸对胃癌细胞周期调控蛋白cyvclinE及P21WAF/CIPI的影响结果舒林酸可抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,改变细胞周期分布,使G-0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,并对SGC7901细胞有促凋亡作用.上述作用具有剂量和时间依赖性(P＜0.05).舒林酸还可上调P21WAF/CIPI蛋白表达.下调cyolinE蛋白表达.结论舒林酸可改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,并可诱导SGC7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.
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再生蛋白-1对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及其机制研究
目的 研究再生蛋白-1被干涉后对胃癌细胞株MKN45侵袭转移能力的影响.方法 通过实时定量PCR、Westem blot检测再生蛋白-1在正常胃黏膜细胞与不同胃癌细胞株中的表达水平;通过Transwell细胞转移实验、Transwell细胞侵袭实验检测再生蛋白-1对胃癌细胞株MKN45侵袭转移能力的影响.结果 再生蛋白-1在胃癌细胞株中的表达水平明显高于正常胃黏膜细胞;当再生蛋白-1被干涉后,胃癌细胞株MKN45的侵袭转移能力明显下降.结论 再生蛋白-1能够促进人类低分化胃腺癌细胞株MKN45的侵袭转移能力.
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胃癌淋巴管上皮β-catenin表达与癌转移相关性的研究
目的:通过试验来研究胃癌组织微淋巴管β-catenin的表达及癌细胞转移之间的关系与发生机制.方法:正常胃组织标本2例,胃癌病理组织32例.采用免疫组化方法,通过LYVE-1标记定位,对比不同条件下的转移与分化间的胃癌淋巴管β-catenin的表达情况.结果:LYVE-1在正常组织及癌组织中的微淋巴管上皮呈表达阳性,而正常组织微淋巴管β-catenin表达呈阴性,胃癌组织β-catenin在胃癌微淋巴管中表达不显著,β-catenin在微淋巴管的表达低分化表达率为66.4%,在有转移组中表达率67.7%,分别同高分化组和无转移组表达差异显著(P<0.05).结论:癌细胞的转移与胞质中β-catenin积累相关,促进了胃癌细胞周围微管道形成,提高了癌细胞的转移几率.
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miR-130b对胃癌细胞BGC823迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨microRNA-130b(miR-130b)对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制.方法 体外培养BGC-823胃癌细胞,通过Lipofectamine?2000试剂盒将培养基、miR-130b错义链、miR-130b抑制剂,分别转染进入正常组、对照组、抑制组肿瘤细胞株中.应用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐实验法(MTT)检测转染后胃癌细胞存活率增殖能力变化,划痕实验(wound-healing assay)和侵袭实验(Transwell invasion chamber assay)检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力变化,western blot实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭相关蛋白分子(Slug、matrix metalloproteinase-9(MMP-9))表达变化情况.结果BGC-823胃癌细胞转染后,与正常组和对照组比较,抑制组细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.01).同时,抑制组细胞迁移、侵袭能力相关蛋白表达水平较正常组和对照组降低(P<0.05).结论靶向抑制miR-130b可以降低BGC-823胃癌细胞的增值、迁移和侵袭能力.
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顺铂与白藜芦醇联合对胃癌细胞影响的研究
胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,并且容易发生转移,其中人胃癌MGC803 细胞对多种化疗药物敏感.虽然我国在胃癌综合治疗方面做了大量研究,并取得一定效果,但胃癌术后5年生存率仍不足40%[1-3].顺铂(Cisplatin,CDDP)具有独特的抗癌机理和神奇的抗癌功效,CDDP是近年来常用的抗肿瘤药物.本研究以人胃癌SGC7901细胞株为研究对象,观察了CDDP对胃癌细胞及正常人体细胞的作用,并进一步研究CDDP与常规化疗药物白藜芦醇(Resverat rol,RES)联合应用对胃癌细胞作用的影响.为指导临床治疗提出一些新的化疗方法.
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miR-130b促进人胃癌BGC823细胞增殖的研究
目的 观察靶向干扰miR-130ba对人胃癌细胞系BGC823的增殖作用及相关机制.方法 培养人胃癌细胞系BGC823,分成正常组、对照组、抑制组,采用脂质体2000分别转染PBS、miR-130b错义链(50nM)、miR-130b抑制剂(50nM),使用real time PCR方法测定转染后miR-130b水平,CCK8法检测转染后胃癌细胞增殖,Western blot检测转染后增殖细胞核抗原蛋白水平.结果 转染48 h后,抑制组胃癌细胞的miR-130b mRNA明显低于正常组、对照组(P＜0.01),同时抑制组胃癌细胞CCK8OD及增殖细胞核抗原蛋白水平均低于正常组、对照组(P＜0.05).结论 miRNA-130b可以促进胃癌细胞BGC823的增殖和增殖细胞核抗原蛋白表达.
关键词： 胃癌细胞 miRNA-130b 细胞增殖 -
三甲氧基二苯乙烯对胃癌细胞凋亡及抑制的作用
目的：研究三甲氧基二苯乙烯对人胃癌BGC823细胞的抑制和凋亡作用。方法用MTT法测定药物对细胞的抑制作用；用电镜、流式细胞仪观察其细胞变化；TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果0．1 mmol／L组、0．2 mmol／L组、0．3 mmol／L组三甲氧基二苯乙烯对胃癌BGC823细胞的抑制作用明显。可引起BGC823细胞S期延长，G1期细胞数增加，产生细胞凋亡。结论三甲氧基二苯乙烯可对人胃癌BGC823细胞产生抑制并能诱导其凋亡。其效果与剂量成正比。
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MTT法分析5-氟尿嘧啶缓释微球的体外细胞毒作用
目的:探讨两种不同制剂5-氟尿嘧啶在体外对胃癌细胞的影响,为临床腹腔灌洗防治胃癌腹腔种植奠定实验基础.方法:人胃癌细胞株BCG820常规培养于含10%小牛血清的DMEM, MTT法来观察不同处理因素(DMEM对照组、5-Fu组和5-Fu缓释微球组)随时间对肿瘤细胞生长的影响.结果:BCG820胃癌细胞在5-Fu组和5-Fu缓释微球组培养均出现细胞的大体形态改变,第6天BCG820细胞杀伤率, 5-Fu为91.6%;5-Fu缓释微球组为97.1%.结论:不同时间不同处理因素肿瘤细胞细胞杀伤率,可见5-Fu缓释微球组体外对胃癌细胞杀伤作用随时间延长优于5-Fu组.
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内质网应激激活P38通路诱导胃癌细胞对多柔比星产生耐药
目的:在二维及三维细胞培养模式下探讨内质网应激能否诱导胃癌细胞对多柔比星产生耐药及其可能机制.方法:本研究利用贴壁培养的胃癌细胞,采用流式细胞仪检测对照组、内质网应激诱导剂组、多柔比星组及内质网应激诱导剂加多柔比星组的细胞凋亡率;并检测P38通路受阻能否逆转内质网应激诱导胃癌细胞对多柔比星的耐药现象.利用前期建立的胃癌细胞三维培养模型,用流式细胞仪及live/dead assay进一步验证以上结果.结果:在贴壁培养模式下,与对照组相比,各药物处理组胃癌细胞的凋亡率均明显增高,多柔比星组细胞凋亡率显著高于内质网应激诱导剂加多柔比星组;且P38活化受阻可基本恢复内质网应激状态下胃癌细胞对多柔比星的敏感性.在三维培养模式下,流式细胞仪及live/deadassay检测结果与贴壁培养条件下一致.结论:在二维及三维培养模式下,内质网应激均可通过激活P38通路诱导胃癌细胞对化疗药物多柔比星产生耐药,阻断该通路可基本抑制内质网应激诱导胃癌细胞对该化疗药物的耐药现象.
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胃癌细胞中再生蛋白Ⅰ基因第2内含子的调控功能
目的:观察胃癌细胞中再生蛋白Ⅰ (Reg Ⅰ)基因第2内含子的调控功能.方法:分别从人外周血、胃癌细胞BGC823和SGC7901中提取基因组DNA,克隆Reg Ⅰ第2内含子.构建荧光素酶报告载体pGL4-Human-intron 2、pGL4-BGC823-intron 2和pGL4-SGC7901-intron 2,分别转染胃癌细胞BGC823和SGC7901,荧光检测仪检测荧光素酶活性.结果:RegⅠ基因第2内含子序列与GenBank公布的序列基本一致,但517～531的腺嘌呤A在不同来源的DNA中有差异重复.重组质粒转染胃癌细胞中的萤光素酶活性均高于对照组；转染胃癌细胞来源的intron 2重组质粒,荧光素酶活性低于转染人来源的intron 2.胃泌素孵育后,荧光素酶活性无明显改变.结论:胃癌细胞中Reg Ⅰ第2内含子具有促进基因表达的功能.
