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赣榆地区健康人群低浓度血清乙肝病毒表面抗原测定及其意义
为了解赣榆地区公共场所从业人员健康人群中低浓度血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人群分布及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征,应用微粒子酶免疫发光分析技术(MEIA)测定8002例健康人群血清HBsAg阳性及其表面抗原、乙肝病毒e抗原及其e抗体、(HBeAg、抗-Hbe)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc),并结合PCR试验结果,确定浓度在5 μg/L以下的HBsAg阳性例数,并分析相关乙肝病毒(HBV)血清标志物模式.共检出HBsAg阳性369例,HBsAg浓度在5 μg/L以下的有85例,占总数的1.06%,占HBsAg阳性人群的23.04%,其中HBsAg浓度在1μg/L以下的38例 (44.70%);1～2 μg/L的有15例(17.64%);2～5μg/L的有32例(37.65%).对上述低浓度HBsAg人群的5项HBV血清标志物检测获得8种模式,以"HBsAg、抗HBc、抗Hbe阳性"和"HBeAg和抗HBs阴性"模式为主(70.59%);累计HBsAg和抗-HBc同时阳性者占91.77%;HBsAg与抗-HBs同时阳性只出现在HBsAg 1 μg/L以下人群中(6.45%).结果显示低浓度血清HBsAg人群不容忽视,提高HBsAg检测灵敏度具有重要意义,同时检测相关HBV血清标志物,对于确定上述人群有帮助.
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单克隆抗体生物素-亲和素系统诊断日本血吸虫病的研究
目的探讨TM5.28单克隆抗体-生物素-亲和素系统检测日本血吸虫循环抗原及其诊断效果.方法制备TM5.28抗日本血吸虫肠相关抗原单克隆抗体,建立单抗-生物素-链霉亲和素检测系统,对各类血清(50份急性血吸虫病人、224份慢性血吸虫病人、49份晚期血吸虫病人;46份血吸虫病治疗前、治疗后6个月和治疗后1年的连续追踪病人;19份华支睾吸虫病人;31份肺吸虫病人;23份乙型肝炎病人;100份正常人)进行检测.结果检测系统对慢性血吸虫病人和正常人检测的敏感性和特异性分别为83.1%和94.0%,Youden指数为0.771;对急性血吸虫病人的检出率94.0%;对肺吸虫、华支睾吸虫和肝炎病人的交叉反应为12.9、15.8和13.0%.血吸虫病人治疗后6个月和1年的阴转率分别为43.9%和62.1%,其OD值几何均数从治疗前的0.172下降到治疗后6个月的0.081和1年的0.068,下降了60.30%.轻、中感染度慢性血吸虫病人的检出率相近,分别为83.9%和82.1%,重感染度病人的检出率高达90.00%.结论该系统对血吸虫病人检测显示了较高的诊断效能和化疗后阴转率,对人群感染状况的判定和个体诊断有一定的应用价值,为日本血吸虫病的免疫诊断和疗效考核提供了一种可行方法.
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日本血吸虫核糖体蛋白S4基因的克隆、表达、纯化及免疫诊断价值的初步研究
目的 体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4(SjRPS4),并评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法 从日本血吸虫尾蚴cDNA文库获得了SjRPS4蛋白相关基因,将该段基因克隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达.融合蛋白经Ni2+-NTA树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白反应,通过Western blot和ELISA对其免疫原性进行鉴定.结果 成功构建了pQE30/SjRPS4重组菌.重组菌诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析可见在相对分子质量约30×103处有SjRPS4融合蛋白的表达,经纯化获得纯度达90%以上的表达蛋白.Western blot检测结果表明该重组蛋白能被日本血吸虫病患者血清识别.用ELISA法检测疑似血吸虫病患者血清,敏感性为90.91%(70/77),特异性为92.59%(25/27),SjRPS4重组表达蛋白阳性率为67.30%(70/104),与肺吸虫病患者血清无交叉反应.结论 成功克隆表达了SjRPS4蛋白,初步证实了SjRPS4在诊断血吸虫病中具有良好的应用价值.
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脐血对骨折愈合影响的实验研究
目的探讨同种及异种脐血是否有促进骨折愈合的作用.方法72只新西兰大耳兔在实验性胫骨横断骨折固定后,随机被分为兔脐血组、人脐血组、无脐血组及血肿组,每组18只.前三组均于骨折部位置引流管,密闭切口,术后行闭式引流大约24小时,再经皮于骨折处分别注入兔脐血、人脐血及生理盐水3ml,血肿组不引流也不注入任何试剂.分期抽血做免疫学检查,包括IgG和SIL-2R,取实验胫骨摄X线片及做光镜、电镜检查.结果血肿组较无脐血及血肿组骨折愈合时间短1周,两脐血组间无明显差异,骨愈合时间比上述二组短1～2周左右.免疫学检查术后各组间未见显著性差异.结论同种及异种脐血有促进骨折愈合作用.局部注射脐血无异常免疫反应.
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临床免疫检验自动化分析现状
传统的免疫学试验通常为自配试剂的手工操作,以定性或半定量报告结果,试验步骤繁杂,影响因素多.近20年以来,临床免疫检验新技术、新方法不断问世,逐步摆脱了手工操作方法,经历了半自动化、完全自动化的发展过程,已经进入信息化的超微量分析时代.
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血清肝纤维化指标及PAPP指数与肝纤维化的相关性研究
目的 探讨血清肝纤四项,即Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)以及PAPP指数,即凝血酶原时间(PT)、血清谷丙转氨酶(ALT)、全血血小板(PLT)计数、血清前白蛋白(PA)与肝纤维化的相关性.方法 选取行肝穿病理活检的不同程度肝纤维化患者80例(慢性肝炎60例、肝硬化20例;＜S0期34例、S1～S2期26例、S3～S4期20例),分别采集静脉血.采用化学发光法检测血清中C-Ⅳ、HA、LN、PⅢNP的水平,并分别应用全自动血液凝固仪、全自动生化分析仪和全自动全血细胞分析仪测定血清PAPP指数,分析各血清学指标与肝纤维化的相关性.结果 ①各血清学指标水平均随肝纤维化程度的不断加深而升高,并均在S3～S4期达到高水平,其中＜S0期患者血清HA水平与S1～S2期相比差异有统计学意义(t值为3.357,P＜0.05);＜S0期患者血清C-Ⅳ、HA、LN、PⅢNP、PAPP指数水平分别与S3～S4期相比差异均有统计学意义(t值分别为5.270、10.484、4.952、5.382、6.343,均P＜0.05);S1～S2期患者血清C-Ⅳ、HA、LN、PⅢNP、PAPP指数水平分别与S3～S4期相比差异均有统计学意义(t值分别为4.322、6.992、4.393、3.838、4.027,均P＜0.05);②各血清学指标与肝纤维化程度均呈正相关(r值分别为0.600、0.549、0.599、0.529、0.675,均P＜0.001);③肝纤四项与PAPP指数的灵敏度(Se)、特异性(Sp)、阳性预测值(Pv+)、阴性预测值(Pv-)形成互补;④慢性肝炎患者血清PAPP指数水平与肝硬化患者相比差异有统计学意义(t值为1177.500,P＜0.001).结论 肝纤四项与PAPP指数的联合检测有助于肝纤维化的临床诊断与分期以及对抗纤维化的疗效监测.
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常见乙型肝炎病毒表面抗原突变体的抗原性分析
目的研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策.方法应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒,分别在COS-7细胞中瞬时表达,定量后用常规HBsAg免疫诊断试剂盒检测,观察重组抗原与不同抗-HBs的结合能力.结果 T 126 S变异与单克隆抗体的结合力增高,G 145 R,K 141 E和2株三位点同时变异株则明显下降,对M 133 T变异与单克隆抗体的结合力影响不大.变异株与多克隆抗体的结合力也有变化,但仍能检测到大部分变异株抗原.结论 "a"抗原决定簇氨基酸的置换影响了HBsAg与抗-HBs的结合能力,并且氨基酸的置换位置和特性对抗原性的影响各有不同.因此,建议应用HBsAg多克隆抗体或开发研制"免疫逃逸突变株"的特异性抗体,以完善HBsAg免疫诊断试剂的抗体组成,减少免疫诊断对常见基因变异株的漏检.
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刚地弓形虫RH株主要表面抗原1的基因克隆及原核表达
目的从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增出其主要表面抗原1(SAG1)全长的基因编码序列,构建重组原核表达载体并在大肠埃希菌中进行表达,为进一步研制弓形虫病免疫诊断试剂盒打下基础.方法根据弓形虫RH株主要表面抗原SAG1的cDNA序列设计一对引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术从RH株弓形虫基因组中扩增出SAG1的全长基因,将其克隆到载体pGEX-4T-3中,并通过基因测序加以证实;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET-32c中,在大肠埃希菌中经IPTG 诱导表达.结果从刚地弓形虫RH株基因组中成功扩增到1 030 bp的全长SAG1基因,该基因在原核系统中经诱导表达出一分子量约37 000大小的融合蛋白,表达产物以包涵体的形式存在.结论 SAG1是弓形虫主要的表面抗原,原核表达的SAG1融合蛋白在弓形虫病的免疫诊断中具有明显的潜在应用价值.
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北京地区142家医疗机构互认实验室临床化学和临床免疫及临床检验专业室内质量控制现况调查
目的：了解北京地区医疗机构互认实验室临床化学、临床免疫及临床检验专业的室内质量控制现状。方法采用问卷调查及现场调查相结合的方式，使用参考方法定值的新鲜冰冻血清和全血标本，对北京地区142家互认实验室临床化学、临床免疫，临床检验专业的室内质量控制的现状进行调查，并对结果进行分析。结果发放临床化学、临床免疫和临床检验专业调查问卷各142份，分别有120、97和101家实验室回报了问卷，信息回馈率分别为84．5％、68．3％、71．1％，各专业有效回馈率均为100％。问卷调查结果显示：各专业＞50％实验室设置了质量控制目标且大多为误差检出概率（Ped）95％，假失控概率（Pfr）5％；约70％实验室不同的检测项目使用相同的质控方案；使用多的质控规则是12 s／13 s／22 s。现场调查结果显示，以临床化学专业为例，采用基于生物学变异的适当标准和WS／T 403－2012确定分析质量要求，发现在现有质量控制方法下，多数检测项目不能满足实验室所设置的质量控制目标要求，即Ped 95％，Pfr 5％。结论实验室需考虑实际情况，评估自身能达到的质量水平，为实验室设置合理的质量标准，制定适宜的个性化质量控制计划。（中华检验医学杂志，2016，39：922－929）
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重组泡球蚴主要表面抗原在棘球蚴病免疫诊断中的效果
目的 研究非融合表达重组抗原用于棘球蚴病免疫诊断的效果.方法 将泡球蚴主要表面抗原基因编码序列克隆于原核非融合表达载体pQE30(+)并进行表达.以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(WB)试验对重组抗原鉴定.亲和层析纯化重组抗原,用于酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清特异性抗体.结果 SDS-PAGE及WB分析显示泡球蚴主要表面抗原基因在大肠埃希菌内得到了高效非融合表达.以此重组抗原进行ELISA试验,检测棘球蚴病68例,阳性率达97.1%,检测囊虫等其他感染性疾病80例及健康人血清20份,阴性符合率达98%.结论 泡球蚴主要表面抗原基因在大肠埃希菌中获得了高效非融合表达,以该重组抗原建立的ELISA试验,对棘球蚴病诊断具有较高的敏感性和属特异性.
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我国HIV检测技术水平正在稳步提高
近年来我国HIV检测工作在政府"四免一关怀"政策的推动下得到了飞速发展.全国HW检测数量迅速增加,检测的领域也在不断扩大,从单一以血清学检测的诊断和血液筛查为主,扩展到为临床治疗、科学研究和为国家防治策略服务.HIV检测工作已逐渐由CDC系统为主转变为多系统共同参与,而且许多HIV检测新领域是由临床医疗部门的实验室开拓的.这既适应了我国AIDS检测工作的实际需求,也推动了我国HIV检测技术水平的稳步提高.
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临床免疫学检验的现状与思考
免疫学和分子生物学的发展日新月异,为临床免疫学检验带来许多新的启示和思路,在以临床路径管理和个体化医学为主要特点的时代背景下,如何准确把握这些变化,构建完善的临床免疫学检验质量体系、理清免疫学检验的路径并将其融入到临床路径管理中、扎实推进个体化诊断技术的推广和应用、准确评估临床免疫学检验新技术新项目的诊断价值,是值得每一个临床免疫学检验工作者深思的问题,本文对这些领域的现状和思考作一评述.
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临床免疫学检验的现状与发展趋势
随着21世纪快速发展的个体化医疗模式的推行与应用,依托基础免疫学理论与生命科学相关技术研究的快速发展,临床免疫学检验的应用已涉及多种疾病发病机制研究、疾病诊断、治疗方案选择与治疗效果评估等方面.现在,应关注临床免疫学检验新技术、新方法与临床的结合与应用,不断提高本专业人员的知识结构与应用能力,以便为临床医疗和患者健康提供更有效的服务.
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肝泡球蚴病超声声象类型及病理分型与血清sIL-2R的关系
B超对肝占位性病变的诊断具有直观和定位准确的特点,已被用作临床病理分型的主要手段[1,2].随着B超在泡球蚴病诊断和流行病学中应用的普及,泡球蚴病超声象的分型及临床分型日益受到重视.但直到现在对其声象类型仍有分歧[3,4].Hadni[5]参照肝癌的分型标准,将泡球蚴分为3种临床类型,①仅寄生于肝脏的P型;②侵犯肝脏周围组织的Ⅰ型;③有远端转移的M型.Hardni对P型又分为5级;P0:不能用B超测出;P1:病灶仅累及1～2个肝段,且肝内无小囊泡及肝内胆管病变;P2:病变大小同P1,肝内有小囊泡及肝内胆管病变;P3:病灶累及3～5个肝段,且肝内有小囊泡及肝内胆管病变;或具有多个病灶,但无肝内囊泡及肝内胆管病变;P4:病灶扩展6～8个肝段;或具有多个病灶,且伴有肝内囊泡及肝内胆管病变;Ⅰ型也分为3级,Ⅰ 0:尚无法确定病变涉及范围;Ⅰ1:仅一个器官被累及;Ⅰ2:有两个以上器官被累及.血清sIL-2R(可溶性白介素-2受体)常在肝病,某些免疫疾病及肿瘤患者血内增高[6-9].有人把它作为肿瘤分期的检测指标[10].我们在观察泡球蚴患者肝脏声象改变的同时,检测了血清sIL-2R水平,用于探讨超声声象下的泡球蚴病理改变与sIL-2R的关系.
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35例肠结核临床诊断分析
目的 分析肠结核的临床特点,以减少误诊.方法 对福建医科大学附属漳州市医院2011 2016年住院的35例肠结核患者的临床表现及实验室、影像学、内镜、病理检查资料进行回顾性分析.结果 35例肠结核患者中,年龄≤60岁者占71.4％(25/35);24例患者并发肺结核(68.6％).22例患者检测了血红细胞沉降率,增快者占81.8％(18/22);15例患者检测了C反应蛋白,升高者占80.0％(12/15);12例患者进行了结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB),阳性率为83.3％(10/12).5例患者行腹部CT扫描检查,3例显示肠道管壁增厚,1例呈聚集性狭窄;1例表现为病变段肠壁局限性不规则增厚或环形增厚、局部管腔不规则狭窄,增强扫描病变部位强化,考虑为肠癌,经手术切除后病理诊断为回盲部结核、肠系膜结核性淋巴结炎、肠旁结核性淋巴结炎;19例患者行腹部MRI扫描,其中14例肠道管壁信号异常,呈节段性、不规则增厚,主要累及回盲部(7例,占50.0％)、回肠末端(9例,占64.3％)、升结肠(9例,占64.3％);5例行腹部CT检查的患者有4例考虑为肠结核的诊断,19例行MRI检查的患者有5例诊断为肠结核.18例患者进行了电子肠镜检查,表现为多发或环形溃疡,炎性包块或不规则环形肿物、管腔狭窄,病灶周边充血水肿,考虑为增殖型结核3例.本组35例患者终通过手术标本病理检查,明确诊断为肠结核28例;其余7例患者经T-SPOT.TB检查结合诊断性抗结核药物治疗有效而确诊肠结核.结论 肠结核的临床表现复杂,需要综合临床表现及实验室、影像学、内镜、病理学检查,乃至于诊断性抗结核治疗效果等进行综合判断.
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肾细胞癌脆性组氨酸三联体FHIT蛋白表达缺失的临床病理意义
目的:探讨肾细胞癌中脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因蛋白表达状况及其与临床病理的关系.方法:采用兔抗人FHIT蛋白抗体和枸橼酸-微波-SP免疫组化方法检测86例肾细胞癌、52例癌旁组织和10例肾组织中FHIT的表达状况,并分析其与组织学分级、临床分期以及5年生存率的关系.结果:肾细胞癌FHIT表达较癌旁组织和正常肾组织明显降低,H=69.421,P=0.000.FHIT蛋白表达在肾癌组织学分型(H=11.557,P=0.003)、分级(H=13.402,P=0.001)及临床分期(H=18.168,P=0.000)中差异均有统计学意义.FHIT蛋白表达强阳性组患者5年生存率显著高于弱阳性及阴性组,Z=-2.390,P=0.017.结论:FHIT低表达或缺失可能提示其抑癌功能丧失,对肾细胞癌的发生和演化具有重要作用.FHIT表达缺失可能成为辅助肾细胞癌诊断及预后的一个新标记.
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脊髓包虫病二例
例1 男性,45岁.2003年5月9日因小便失禁,双下肢无力,麻木2个月余入院.体检:神清语利,双侧瞳孔正常,颈软,脊柱无畸形,活动正常,L5棘突有压痛.双上肢肌力Ⅴ级,双下肢远端肌力左Ⅱ级右Ⅲ级,双侧小腿外侧、足背外侧痛温觉减弱,巴氏征(-).包虫血清免疫学试验(+).腰椎MRI示:骶管蛛网膜囊肿可能,累及L5椎体.入院后择期在全麻下行L5、S1椎管探查术+包块摘除术.术中完整摘除包块,为囊性,其内有清亮囊液,残腔用双氧水及高渗盐水冲洗数次.病理诊断:细粒棘球蚴病.术后患者下肢肌力较术前有所恢复,近期随访无复发.
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斑点金免疫渗滤技术及其在检测中的应用
斑点金免疫渗滤技术是胶体金免疫技术与固相膜相结合发展起来的一项快速检测新技术,由于其具有简便、快速、经济、结果直观等特点而得到广泛的发展和应用,且有广阔的商业前景.本文综述了斑点金免疫渗滤技术的原理、制备过程及其在快速诊断中的应用,并对该技术的优缺点及发展趋势进行了讨论.
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模拟HCV HVR1免疫7肽对HCV感染者免疫细胞的影响
目的 了解在模拟HCV HVR1免疫7肽(7P)刺激条件下,HCV感染者免疫细胞变化情况.方法 分离HCV感染患者外周血单核细胞(PBMC),和7P共同孵育培养后,应用IL-10、IFN-γ、TNF-α抗体进行细胞内因子染色,应用FACSCalibur流式细胞仪及FACSCalibur软件进行检测分析.结果 肝硬化组CD4+CD8-T细胞和CD4-CD8+T细胞以及肝炎组的CD4+CD8-F细胞分泌INF-γ明显升高,NK及NKT细胞组也明显升高;肝硬化组CD4+CD8-T细胞及CD4-CD8+T细胞分泌IL-10明显升高,而所有的NK及NKT细胞组则明显下降;NK及NKT细胞分泌TNF-α明显升高.结论 7P能够通过调节细胞因子分泌改变免疫细胞的免疫反应方式,可能有利于清除病毒的同时缓解炎症反应.
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动物免疫血清的制备
目的:探讨制备动物免疫血清的方法和效果,以适应其在实验教学中的需要.方法:制备好的免疫原,按照一定的免疫程序(免疫途径、次数、间隔时间、剂量)接种给所选择的动物.待动物体内产生抗体后,采集动物血液,分离血清对其效价进行测定.结果:经免疫后的抗血清终分别达到1:2040以上的高效价.结论:此方法制备的抗血清效价高,特异性高,亲和力强,既经济又方便,适用于实验教学,提高了实验的开出率.
