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BRCA1相关散发性乳腺癌的病理免疫组化研究
3基因和CerbB-2基因有密切的联系.
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慢性乙肝患者拉米夫定治疗前血清病毒载量和肝功能损伤程度与治疗后发生YMDD变异的关系
目的 观察慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前血清病毒载量和肝功能损伤程度与治疗后发生YMDD变异的关系.方法 选择使用拉米夫定治疗后的250例患者中发生YMDD变异的49例,分析血清病毒载量、肝功能损伤程度与YMDD变异类型、发生时间的关系.结果 YMDD各类变异型治疗前血清病毒载量和肝功能损伤程度显著高于YMDD未变异型(P＜0.05);各变异型发生时间与血清病毒载量呈负相关(P＜0.05),但发生变异时间与肝功能损伤程度不相关(P＞0.05);发生YMDD变异类型与治疗前血清病毒载量、肝功能损伤程度、肝功能各指标间也不相关(P＞0.05).结论 慢性乙型肝炎患者治疗前血清病毒载量越高,拉米夫定治疗越易发生YMDD变异且发生时间越早;肝功能损伤程度越重,也越易发生YMDD变异;血清病毒载量越高并伴肝功能损伤程度越重,YMDD变异发生时间越有提前的倾向.因此建议进行YMDD变异预测时,不仅要考虑患者血清病毒载量,而且还应结合患者肝功能损伤程度,并进行早期、动态的YMDD变异检测.
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神经调节因子与乳腺癌
神经调节因子(NRGs)是一类表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)类蛋白,其受体属于ErbB酪氨酸激酶型受体.NRGs在多种组织中都有表达,对神经系统、心脏和乳腺等器官的发育具有重要的调节作用.现已证实,NRGs在乳腺癌中有广泛表达,对乳腺癌发生、发展、侵袭、转移起着重要的作用.
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39例慢性乙型肝炎及相关性慢加急性肝衰竭患者多基因区变异位点分析
HBV感染是目前全球范围内公共卫生问题,每年因HBV所导致的肝硬化、肝衰竭以及肝细胞癌而死亡的人口达到了100万[1].肝衰竭是内科危重症,病情进展迅速,病死率高,其发病机制尚未完全明了,内科无特效治疗手段,且费用昂贵,在其众多发病原因中,HBV活动和变异为主要的病因[2].本研究旨在通过对20例乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭患者以及19例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBV多个基因区的PCR扩增、测序,进一步分析其基因型及各个基因区变异位点,以了解HBV变异与乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭之间的关系及规律.
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海岛地区NA治疗无良好应答CHB患者HBVP区耐药突变分析
目的：分析舟山地区经核苷类似物（NA）治疗无良好应答的慢性乙型肝炎（CHB）患者乙型肝炎病毒（HBV）P区耐药突变模式。方法收集2011年10月至2013年11月188例于浙江省舟山医院接受NA治疗无良好应答的CHB患者血清，采用直接测序法检测患者HBV P区基因突变状态。结果188例经NA治疗无良好应答的CHB患者HBV P区基因突变率为71.28%（134/188），主要模式：rtL180M+rtM204V/I/S突变率为26.12%（35/134），rtM204V/I/S突变率为25.37%（34/134），rtM181T/V/S突变率为16.42%（22/134）；其中113例服用单种NA无良好应答患者有73例发生耐药变异（73/113，64.60%），多位点（3个及以上耐药位点）突变率为12.33%（9/73）；75例服用多种NAs无良好应答患者有61例发生变异（61/75，81.33%），多位点突变率为16.39%（10/61），多药使用者发生耐药突变率明显高于单药使用者，差异有统计学意义（χ2=6.631，P<0.05）。结论在NA治疗无良好应答CHB患者中耐药变异发生率高，且长期服用多种NAs易发生多点突变；监测HBV P区耐药突变可为NA耐药CHB患者用药提供依据。
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一个弥漫性表皮松解性掌跖角化病家系角蛋白9基因R162W突变
目的 研究1个弥漫性表皮松解性掌跖角化病(epidermolytic plamoplantar keratoderma,EPPK)家系中的基因突变情况.方法 收集1个弥漫性表皮松解性掌跖角化病家系的外周血标本,采取聚合酶链反应结合DNA直接测序的方法,检测了该家系中4例患者及3名表型正常者和100名无亲缘关系健康个体的KRT9基因突变情况.结果 该家系中患者存在KR79基因上第484位C突变成T,使得KRTY基因的第1外显子162位密码子由CGG突变成TGG,导致正常精氨酸被色氨酸所取代,而该家系的正常人对照及无关健康个体不存在此突变.结论 EPPK家系中患者KRT9基因存在错义突变(484C→T),这可能是导致EPPK发病的分子机制之一.
关键词： 表皮松解性掌跖角化病 DNA突变分析 角蛋白9基因 -
中国人遗传性非息肉病性结直肠癌MSH6基因胚系突变的测序研究
目的 探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)家系中MSH6基因胚系突变.方法 采用PCR-直接测序的方法检测39个无胚系MSH2及MLH1基因突变、符合不同临床标准的中国人HNPCC家系先证者MSH6基因各外显子胚系突变;对137名正常人胚系基因组DNA进行错义突变相应外显子的测序分析.应用Envision二步法检测有突变的先证者肿瘤组织MSH6蛋白表达.结果 在39个HNPCC先证者中共发现6个MSH6基因的胚系突变,分别位于第4、6、9和第10外显子;突变类型为4个错义突变、1个无义突变、1个剪接区的插入突变;对4个错义突变的相应外显子的测序分析显示:137名正常人胚系基因组DNA 5例具有第6外显子1163密码子处的c.3488A＞T的错义突变,约占3.65%(5/137),为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP);其余错义突变在正常人群中均未发现.在6例有MSH6基因胚系突变家系的肿瘤组织中免疫组化染色除1例为SNP的肿瘤组织MSH6蛋白阳性表达外,其余均为阴性表达.经过查询国际HNPCC突变数据库及SNP数据库证实上述突变中5个为国际上尚未报道的病理性突变,1个为新发现的SNP.结论 MSH6基因胚系突变在符合不同临床标准的中国人HNPCC中均起一定作用,对无MSH2及MLH1基因胚系突变的先证者行MSH6基因胚系突变的测序分析对确诊HNPCC家系是必要的.
关键词： MSH6基因 遗传性非息肉病性结直肠肿瘤 DNA突变分析 -
非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体及K-Ras基因突变特征与临床病理特征的关系
目的 分析非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)及K-Ras基因突变情况,分析突变与患者临床病理特征的相关性.方法 选取本地区非小细胞肺癌手术标本90例,运用突变扩增阻滞系统(ARMS)-Taqman探针法检测EGFR及K-Ras基因外显子突变状态,并分析基因突变与临床病理特征的相关性.结果 90例非小细胞肺癌患者有39例检测到EG-FR突变,包括18例19-del和12例L858R,另有9例存在L858R和T790 M双突变;33例K-Ras突变,主要为12密码子突变;3例患者检测到EGFR和K-Ras同时突变,为无吸烟史晚期肺腺癌患者;不同性别、吸烟史、肿瘤类型等亚组患者中EGFR突变率有差异,二元logistic回归分析结果显示EGFR与性别、年龄、肿瘤类型相关,未发现K-Ras与以上临床病理因素的相关性.结论 EGFR基因突变类型以及是否伴随K-Ras突变对于非小细胞肺癌患者临床用药具有重要的指导意义,K-Ras基因与临床病理特征的相关性尚需进一步研究.
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无脉络膜症一家系的临床观察及基因突变检测
目的：观察一个无脉络膜症（CHM）家系的临床表现和CHM基因突变位点及其类型。方法一个CHM家系4代15名成员纳入研究。其中，患者5例，女性致病基因携带者2名，健康成员8名。患者中男性4例，女性1例。所有受试者均行佳矫正视力（BCVA）、间接检眼镜、荧光素眼底血管造影、光相干断层扫描、视野、全视野视网膜电图（ERG）检查。3年后仅对患者进行随访。随访时均行BCVA检查，女性患者同时行视野检查。采集所有受试者外周静脉血5 ml，提取基因组DNA，扩增候选基因CHM基因的15个外显子及外显子-内含子交界区位点附近的序列，直接测序法检测基因突变位点；通过蛋白数据库模拟蛋白结构，应用DeepView v4.0.1软件预测变异结果。同时招募180名健康志愿者作为对照组进行CHM基因测序比对。结果4例男性患者中，3例成年患者分别在年龄＜10、10、30岁时出现视力下降；平均BCVA为0.43；眼底呈典型CHM改变。仅存中央微小视野。全视野ERG视杆和视锥细胞反应均呈熄灭状。黄斑中心凹外椭圆体带消失。3年后随访时，平均BCVA为0.11，平均BCVA下降0.320。1例未成年患者双眼BCVA均为1.0；眼底仅见视盘周围环形区域颜色变淡；周边视野存在相对暗点。女性患者在年龄50岁时出现视力下降；双眼BCVA分别为0.5、0.25；眼底呈典型CHM改变。右眼周围视野可见相对暗点，左眼视野大面积绝对和相对暗点。3年后随访时，双眼BCVA均为0.2，平均BCVA下降0.175。2名女性致病基因携带者中，1名仅眼底周边部可见有斑片状色素沉着和视网膜色素上皮萎缩斑；1名晶状体轻度混浊，眼底、全视野ERG正常。患者及致病基因携带者DNA测序发现CHM基因第15外显子存在一个新的错义突变c.1837G＞A。人类Rep-1蛋白分子结构和剪接突变造模结果显示，Rep-1蛋白C末端结构改变导致Rep-1分子结构域缺失，影响与Rab蛋白相互作用，导致整个蛋白的构象改变。结论 CHM基因突变位点c.1837G＞A（p.D613N）是该家系的致病基因；女性致病基因携带者可有不同临床表型。
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家族性玻璃体淀粉样变性甲状腺激素结合蛋白基因突变及表达研究
目的 观察家族性玻璃体淀粉样变性(FTA)一家系甲状腺激素结合蛋白(TTR)基因突变位点及其mRNA、蛋白表达变化.方法 来自同一家系的家族性玻璃体淀粉样变性患者7例(发病组)、家系中未发病成员19名(未发病组)以及与该家系来自同一地区的正常健康者9名(对照组)纳入研究.采集3组受检者外周静脉血,提取DNA,采用逆转录聚合酶链反应(PCR)扩增TTR基因外显子1～4,进行测序.实时荧光定量PCR检测受检者血细胞中TTR mRNA的表达.蛋白免疫印迹法检测受检者血清中TTR蛋白表达.结果 发病组7例、未发病组3名受检者TTR外显子3的107位碱基出现杂合突变,由G变为C,出现套峰;即第83氨基酸的密码子发生碱基突变,由GGC突变成CGC,甘氨酸突变为精氨酸(Gly83Arg),其氨基酸的极性由中性转变为碱性.其他受检者未发现该位点基因突变.发病组患者TTRmRNA表达均较未发病组、对照组低,差异有统计学意义(P=0.032、0.001);未发病组受检者血细胞中TTR mRNA表达较对照组低,差异有统计学意义(P=0.001).发病组患者血清中TTR蛋白表达均较未发病组、对照组低,差异有统计学意义(P=0.035、0.038);未发病组与对照组受检者血清中TTR蛋白表达比较,差异无统计学意义(P=0.491).结论 该家系7例患者、3名未发病家系成员TTR基因第3外显子发生杂合突变,即Gly83Arg.发病患者TTR mRNA及蛋白表达较未发病家系成员及正常者降低.
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先天性视网膜劈裂症一家系基因突变位点分析
目的 对一个先天性视网膜劈裂(XLRS)家系进行基因分析,观察其视网膜劈裂基因(RS1基因)的突变位点.方法 家系研究.一个三代15人的XLRS家系纳入研究.包括先证者在内的9名家系成员行眼科常规检查.6名家系成员同时行眼底彩色照相、光相干断层扫描检查.其中,男性6人10只眼,女性3人6只眼.抽取家系成员中12人的外周静脉血,采用聚合酶链反应方法,对RS1基因的6个外显子各片段进行扩增后直接DNA测序分析,明确基因突变位点.结果 眼底检查者正常4人8只眼,其中男性1人2只眼,女性3人6只眼.均无视力下降主述.检查结果符合XLRS临床诊断者5例10只,均为男性.患眼视力手动～0.5.出现视力下降时年龄均＜10岁.眼底彩色照相检查可见黄斑区放射状囊样劈裂、周边视网膜劈裂；OCT检查可见黄斑区劈裂8只眼,周边视网膜劈裂6只眼.基因检测结果显示,正常者3人,男性.5例临床确诊者RS1基因在外显子4的末位碱基发生错义突变(c.326G＞T),该突变导致RS1基因编码的视网膜劈裂蛋白第109位氨基酸由甘氨酸变为缬氨酸(p.Gly109Val).1名3岁儿童具有与5例患者相同的基因突变.眼底检查正常的3名女性为p.Glyl09Val突变的杂合子,为致病基因携带者.结论 p.Gly109Val突变为XLRS家系的一个新的突变位点.
关键词： 视网膜劈裂症/遗传学 DNA突变分析 突变 -
卵黄样黄斑营养不良基因三个新的点突变与散发性Best病表现型关系的分析
Best病又称Best卵黄样黄斑营养不良(BVMD),是一种不规则的常染色体显性遗传性疾病,也有一些散发病例;临床特征是幼年或青年时期双眼黄斑部视网膜出现卵黄状的脂质样沉积物,而视力一般不受影响.随着病情发展,卵黄样物质逐渐吸收,开始出现视力波动.患者常在40岁左右时常发展为视网膜色素上皮(RPE)萎缩,黄斑部视网膜纤维瘢痕形成,以及继发性脉络膜新生血管(CNV)形成和视网膜下出血,终出现视力严重的不可逆性损害.
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常染色体隐性遗传视网膜色素变性家系视紫红质基因突变的检测分析
目的观察一个近亲婚配常染色体隐性遗传视网膜色素变性(ARRP)家系中视紫红质基因(RHO)的突变特征,并探讨其视网膜色素变性(RP)发病机制.方法抽取8例该ARRP家系成员及10例正常对照者的外周静脉血5～8 ml;提取基因组DNA;采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增RHO基因第1～5外显子和第1内含子基因片段,用直接DNA测序法筛查RHO基因突变.结果来自同一家系3例患者RHO基因的第5外显子第344密码子发生了A→G碱基的错义突变,导致了谷氨酰胺变成了精氨酸(Gln344Arg),3例患者为该突变的纯合子.患者近亲婚配父母及1例未患病家庭成员为该突变的杂合子.2例未患病家庭成员及10例正常对照者均未发现RHO基因突变. 结论Gln344Arg突变可能是该ARRP家系的致病原因;在近亲婚配ARRP家系中RHO基因突变频率可能增加.
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先天性视网膜劈裂症基因突变的分析
目的研究先天性视网膜劈裂症(XLRS)家系的XLRSl基因突变情况及其发病机制,为建立基因诊断的方法提供理论依据.方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序方法对两个家系的XLRS1基因编码区进行突变的筛选及检测.结果在家系1中发现Pr0193Ser突变.结论在XLRS家系中发现XLRS1基因突变.本研究结果可直接应用于XLRS的遗传咨询和产前基因诊断.
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中国人Leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变频谱
目的分析中国人Leber遗传性视神经病变(Leber′s hereditary optic neuropathy, LHON)线粒体DNA(mitochondrial DNA , mtDNA)3个原发致病基因突变的频谱及其遗传特征. 方法分别用突变特异性引物聚合酶链反应 (mutation-specific priming polymerase chain reaction, MSP-PCR)、异源双链-单链构象多态性(heteroduplex-single strand conformation polymorphism polymerase chain reaction,HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)和DNA测序等方法,对140个LHON家系的先证者(男120人,女20人)进行mtDNA 3个原发致病突变位点,即G11778A、G3460A和T14484C的检测,并对这些患者的家系进行遗传分析. 结果在140例LHON先证者中,130例(男113人,女17人)为G11778A位点突变,占92.9%;2例(男、女各1人)为G3460A位点突变,占1.4%;8例(男6人,女2人)为T14484C位点突变,占5.7%. 结论中国人LHON患者mtDNA 3个原发致病突变中,以G11778A位点突变为主,少数为G3460A 和T14484C位点的突变.
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常染色体显性视网膜色素变性家系视紫红质基因突变的检测分析
目的观察一个常染色体显性视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)家系的视紫红质(rhodopsin,RHO)基因突变特征. 方法抽取20个ADRP家系成员外周血3～5 ml并提取DNA;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增RHO基因第1～5外显子基因片段, 用直接测序法对20个DNA样本进行RHO基因突变检测. 结果该家系中10例ADRP患者的RHO基因的第182密码子发生G→A置换突变(Gly-182-Asp),而在2例患者和8个未患病家系成员中均未发现此突变. 结论 Gly-182-Asp突变不一定是ADRP家系的致病原因;在RHO基因附近可能存在新的基因, 但还需要进一步研究证明.
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小儿视锥细胞与视锥杆细胞营养不良的临床特点与候选基因突变分析
目的分析小儿视锥细胞和视锥杆细胞营养不良的临床特点及其候选基因变异情况. 方法连续收集分析18例年龄4个月至8岁的视锥细胞和视锥杆细胞营养不良先证者的临床资料.应用聚合酶链反应-异源双链-单链构像多态法分析锥杆同源异形盒基因(cone-rod homeobox gene,CRX)全部3个外显子、GUCY2D基因(retinal-specific guanylate cyclase gene)外显子2和8,寻找可能的变异. 结果 18例患儿因家人发现其有明显视觉障碍来诊.其中13例有眼球震颤,8例有畏光,7例有轻微、不典型眼底改变.11例眼底正常.4例可测定视力者视力均低于0.3,14例小于3岁者无法测定视力.视锥细胞营养不良与视锥杆细胞营养不良的临床症状和眼部表现相互重叠.均未发现CRX基因和GUCY2D基因突变. 结论小儿视锥细胞和视锥杆细胞营养不良视觉障碍明显,眼球震颤较多见.多数眼底正常,少数有眼底改变但不典型.本组病例可能与CRX基因和GUCY2D基因外显子2、8突变无关.
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Leber遗传性视神经病患者乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶的基因型
Leber遗传性视神经病 (Leber′s hereditary optic neuropathy,LHON) 是一种多累及青年人常常致盲的遗传性视神经异常,分子遗传学研究表明多种线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA)突变是LHON明显的病因.但是mtDNA的缺陷不是唯一的决定因素,因为带有这一特异性病症的mtDNA突变的15%的男性和近70%的女性终生不发病[1],因此尚未明确的环境因子可能扮演了这一疾病发生的额外的危险因素.许多LHON患者的饮酒量很大,而且在LHON患者当中饮酒者的比例偏高[2],因此酒精被认为是LHON的一个危险因素.2型乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH2)是一种线粒体酶,在酒精代谢过程中对大部分乙醛的氧化反应起主要作用.对于ALDH2基因的分子遗传学研究表明它具有多态性,并且ALDH2的基因型和表现型完全一致,该基因的多态性决定了酒精代谢的能力[3].基于上述背景,我们研究了ALDH2的基因型是否影响LHON的临床表现,同时还检测了另外一种与酒精代谢相关的酶即β-乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH2)的基因型,该基因在东方人中也具有高度多态性[3].
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视网膜色素变性和视锥-视杆细胞营养不良患者的基因型及临床表型分析
目的 观察视网膜色素变性(RP)和视锥-视杆细胞营养不良(CORD)患者基因突变及临床表型.方法 临床检查确诊的37例RP患者和6例CORD患者以及95名家庭成员纳入研究.详细收集患者病史、家族史;患者以及家庭成员均行佳矫正视力、裂隙灯显微镜、间接检眼镜、彩色眼底照相、光相干断层扫描、全视野视网膜电图、荧光素眼底血管造影检查.采集患者及其家庭成员外周静脉血,提取全基因组DNA.应用目标区域捕获结合二代测序技术对目前已知的232个视网膜疾病致病基因进行相关基因筛查,确定候选致病基因突变位点;聚合酶链反应和直接测序法进行验证,并在家庭成员中进行共分离,确定致病性突变位点.分析RP、CORD患者的基因型与临床表型的关系.结果 37例RP患者中,13例来自6个家系,其中常染色体显性遗传RP 10例(4个家系),常染色体隐性遗传RP 3例(2个家系);24例为散发RP.6例CORD患者来自4个家系,均为常染色体隐性遗传.43例患者中,21例患者检测出致病性基因突变,检测阳性率48.8％.21例患者中,RP患者15例,检测出USH2A、RP1、MYO7A、C8orf37、RPGR、SNRNP200、CRX、PRPF31、C2orf71、IMPDH1等10个致病性基因突变;典型RP 10例,无色素性RP2例,Usher综合征2型3例.CORD患者6例,均检测到致病性基因突变.其中,ABCA4、RIMS1基因突变各2例,CLN3基因突变1例,CRB1和RPGR双基因突变1例.结论 RP和CORD具有基因型多样化,临床表型相似性;早期RP和CORD诊断需结合临床表型和基因检测分析才能终确定.
关键词： 视网膜疾病/遗传学 色素性视网膜炎/遗传学 DNA突变分析 表型 -
Best病家系卵黄样黄斑营养不良基因突变分析
目的观察Best病家系卵黄样黄斑营养不良基因(VMD2)基因型与表现型之间的相互关系,为建立Best病基因诊断方法提供理论依据.方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序法对一个Best病家系10个成员的VMD2基因编码区和启动子序列进行突变筛查,并与同时采用相同方法结合构像敏感性凝胶电泳(CSGE)对100个正常对照者的VMD2基因筛查结果进行比较.结果Best病家系10个成员中,9人VMD2基因外显子2第223位碱基C-T颠换,其中6人通过眼底和眼电生理检查证实为Best病患者,2人为该突变的纯合子;另外有3个年轻成员虽然携带VMD2基因突变,临床上仅表现为眼电图的异常.在正常对照者中没有发现上述突变.结论Best病家系中VMD2表现型与基因型密切相关,VMD2基因突变是该家系的致病原因.VMD2基因突变筛查可用于Best病的诊断和遗传咨询.
