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微量分光光度法检测光损伤状况下大鼠视网膜视紫红质含量的变化
目的:探索视紫红质在鼠视网膜光化学损伤中的变化规律.方法:用微量可见紫外分光光度仪分别测定接受连续光照1、2、3、4天后以及光照1和3天,置暗环境恢复2、7、14天后大鼠视网膜视紫红质含量的变化.结果:连续光照致视紫红质含量在光照开始的1～2天内急骤下降,以后趋于平缓.在一定范围内延长光照时间可使视紫红质含量水平更为低下.光照后暗环境中其含量的恢复并非呈直线上升,在1周左右表现为一个回落.结论:连续光照可使大鼠视网膜视紫红质含量显著减少;光照时间在一定范围内与含量水平密切相关.微量分光光度法为一种检测视网膜视紫红质含量的简便和快速的方法.
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视网膜色素变性患者视紫红质E341ter基因突变及临床表型分析
目的探讨常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因突变及其与临床表型的关系.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和单链构象多态性(single strand conformation polymorphism, SSCP)技术,对13个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系中的27例成员,进行视紫红质基因整个编码区的突变筛选,对SSCP检测有变异带的外显子PCR产物进行测序;同时应用裂隙灯、眼底镜、动静态视野计和视网膜电流图(ERG)对患者进行临床检测.随机收集30例正常人进行对照检测.结果发现1个家系患者有视紫红质E34lter突变,呈杂合子,密码子341第一个碱基由G变成T.该家系临床表现为青年期出现夜盲,视力和视野损害较重,ERG检查杆体和锥体无反应或仅有较小的锥体反应.结论视紫红质基因突变家系的视网膜色素变性病史开始于杆体功能的丢失,进而累及锥体系统,并终导致视功能严重丧失.视紫红质E34lter突变被认为是该家系的病因.
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人胚眼视网膜光感受器细胞的体外培养和鉴定
目的探讨人胚眼视网膜光感受器细胞的获取和体外培养方法，为进行人类视网膜光感受器细胞移植提供理论依据。方法采用酶分层消化法分离获取人胚眼纯视网膜光感受器细胞，使用视网膜色素上皮细胞的条件培养液，在体外长期培养并进行形态学鉴别；用苏木素-伊红染色显示消化后的视网膜组织结构层次，以确定所获取的视网膜光感受器细胞的纯度；用抗视杆细胞特异性视紫质蛋白抗体（rhodopsin4D2，Rho4D2）免疫细胞化学染色做细胞鉴定。结果酶分层消化法能获取较纯的视网膜光感受器细胞，抗Rho 4D2阳性，并能在体外存活较长时间。结论酶分层消化法所获取的人胚眼纯视网膜光感受器细胞能在体外较长时间存活，并可表达光感受器细胞特异性视紫质蛋白，将为人类视网膜光感受器细胞的移植和各种体外研究提供细胞来源。
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视紫红质基因在显性视网膜色素变性家系的突变筛查
目的:探讨视紫红质基因在视网膜色素变性疾病中的作用.方法:通过聚合酶链反应(PCR)对4个显性视网膜色素变性家系先证者视紫红质基因的5个外显子进行扩增,扩增产物进行直接测序.结果:视紫红质基因全部编码序列在4个家系先证者中均未发现碱基改变,TJE14及TJE15先证者第1外显子上游非编码区中第70个碱基出现A/G套峰,在TJE15先证者第5外显子第1185碱基出现A/C套峰;而在TJE16先证者中第1外显子上游非编码区中第45个碱基为纯合子GG,第70个碱基为纯合子AA;TJE17先证者第1外显子上游非编码区中第45个碱基为纯合子AA,第70个碱基为纯合子GG.结论:视紫红质基因在中国人群中突变率不如欧美人高,它可能不是导致中国人显性视网膜色素变性的主要致病基因.
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视网膜色素变性患者视紫红质基因突变分析
目的 研究中国人视网膜色素变性(RP)患者视紫红质(RHO)基因的突变频率及特征,探讨其在RP发病机制中的作用.方法 运用DNA直接测序法,对55例中国内地汉族RP先证者及55例对照者进行RHO全基因突变检测分析.结果 共检出7种碱基变异,其中2种为非致病错义突变,其余5种为非编码区单核苷酸多态性,RP组和对照组各单核苷酸多态性位点突变频率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 RHO基因在中国华南地区RP 患者中的突变率低于国外报道.检出的已报道的单核苷酸多态性位点与RP无显著相关性.
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火龙果皮也是宝
为了获得更多的营养,很多人选择吃葡萄不吐皮,吃苹果不削皮,番茄、冬瓜带皮炒.其实,火龙果皮也不该被丢弃,因为其中含有非常珍贵的营养物质——花青素.花青素是一种强力抗氧化剂,强于胡萝卜素10倍以上,且能在人体血液中保存活性75小时.它能够保护人体免受有害物质自由基的损伤,有助预防多种与自由基有关的疾病.花青素能够增强血管弹性,保护动脉血管内壁,降低血压,抑制炎症和过敏,改善关节的柔韧性,促进视网膜细胞中的视紫质再生,改善视力,还具有抗辐射的作用.总之,花青素从许多方面维护人体的健康,为我们带来多种益处.
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视网膜色素变性家系的产前分子诊断
目的 对1例常染色体显性遗传视网膜色素变性家系患者所怀胎儿进行产前分子诊断.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和直接测序技术法,对一常染色体显性遗传视网膜色素变性(ADRP)家系成员的所有现存人员的视紫红质基因的外显子进行测序分析.在采用STR位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,应用DNA序列测定对胎儿-羊水基因组DNA进行分析.结果 该家系的25名成员中12名患者有视紫红质基因(rhodopsin,RHO)的512C＞T(P171L)突变,均呈杂合子,该错义突变使密码子171由CCA变成CTA.而未受累者的视紫红质基因表现为野生型.对该家系成员进行产前诊断,发现胎儿具有同种致病性突变.结论 视紫红质基因RHO的一种已知突变512C＞T(P171L)是该家系的病因,胎儿带P171L突变,产前诊断和早期干预能避免视网膜色素变性患儿的出生.
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常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因和视网膜变性慢基因突变检测分析
视网膜色素变性(RP)是一组常见的视网膜感光细胞和色素上皮细胞变性导致夜盲和进行性视野缺损的遗传性眼底病,其发病机制尚未完全明确.RP具有高度的遗传异质性,其遗传方式非常复杂,分为常染色体显性遗传(ADRP)、常染色体隐性遗传(ARRP)、X-连锁遗传(XLRP)和双基因型遗传(Digenic RP),近报道还有线粒体遗传方式(mitochondrial RP)[1].视紫红质基因(RHO)是早被识别的RP基因,在ADRP中发病率占30%～40%[2],而盘膜周边蛋白/视网膜变性慢基因(peripherin/RDS)在ADRP中占5%[3].我们对13个ADRP家系进行了RHO和视网膜变性慢基因(RDS)检测分析,观察其突变特征,现将其结果报道如下.
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常染色体隐性遗传视网膜色素变性家系视紫红质基因突变的检测分析
目的观察一个近亲婚配常染色体隐性遗传视网膜色素变性(ARRP)家系中视紫红质基因(RHO)的突变特征,并探讨其视网膜色素变性(RP)发病机制.方法抽取8例该ARRP家系成员及10例正常对照者的外周静脉血5～8 ml;提取基因组DNA;采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增RHO基因第1～5外显子和第1内含子基因片段,用直接DNA测序法筛查RHO基因突变.结果来自同一家系3例患者RHO基因的第5外显子第344密码子发生了A→G碱基的错义突变,导致了谷氨酰胺变成了精氨酸(Gln344Arg),3例患者为该突变的纯合子.患者近亲婚配父母及1例未患病家庭成员为该突变的杂合子.2例未患病家庭成员及10例正常对照者均未发现RHO基因突变. 结论Gln344Arg突变可能是该ARRP家系的致病原因;在近亲婚配ARRP家系中RHO基因突变频率可能增加.
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玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞对糖尿病大鼠视网膜形态及胶质细胞原纤维酸性蛋白和视紫红质表达的影响
目的 观察玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对糖尿病大鼠视网膜形态及胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、视紫红质(RHO)表达的影响.方法 8周龄健康雄性Sprague-Dwaley大鼠78只用于实验.其中,70只大鼠按40 mg/kg剂量尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型;8只大鼠以相同剂量尾静脉注射0.1 mol/L pH 4.0柠檬酸缓冲液作为正常对照组,建模6周后,在建模大鼠中取10只作为糖尿病模型对照组;其余60只建模大鼠右眼玻璃体腔注射移值hUCMSC细胞悬液2μl作为实验眼,左眼玻璃体腔注射等量Dulbecco改良Eagle/F12培养基作为对照眼.注射移植后1、2、4周分别进行后续实验.实验眼记作U1、U2、U4组,对照眼记作D1、D2、D4组,每组各20只眼.摘除眼球作石蜡切片行苏木精-伊红染色,光学显微镜观察大鼠视网膜结构形态,测量视网膜外核层及内核层(INL)的厚度;冰冻切片-组织免疫荧光方法观察hUCMSC在大鼠视网膜的分布、迁移情况;实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测大鼠视网膜中GFAP、RHO的mRNA和蛋白相对表达量.结果 光学显微镜观察发现,正常对照组大鼠视网膜各层结构正常.糖尿病模型对照组大鼠视网膜神经纤维层(NFL)变薄,视网膜神经节细胞(RGC)数量减少.U1、D1组大鼠RGC数量减少、排列紊乱;U2、U4、D2、D4组大鼠RGC数量不断减少.与D4组比较,U4组大鼠视网膜INL厚度明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).冰冻切片-组织免疫荧光实验结果显示,U1组大鼠视网膜可见沿内界膜分布的hUCMSC;U2组大鼠视网膜hUCMSC数量逐渐减少,主要位于NFL和神经节细胞层.实时定量PCR及Western blot检测结果显示,随建模时间延长,糖尿病模型对照组及D1、D2、D4组大鼠视网膜中GFAP mRNA、蛋白相对表达量逐渐升高,RHO mRNA、蛋白相对表达量逐渐降低.分别与D2、D4组比较,U2、U4组大鼠视网膜GFAP mRNA、蛋白相对表达量均降低,RHO mRNA、蛋白相对表达量均升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 hUCMSC移植到糖尿病大鼠玻璃体腔后能够迁移、整合至视网膜;可降低GFAP表达,提高RHO表达.
关键词： 糖尿病视网膜病变/治疗 间质干细胞移植 视紫质 动物实验 -
视紫质样GPCR中偶联氨基酸的变构通讯网络
目的:预测视紫质样GPCR中由Leu-125等氨基酸组成的变构通讯网络.方法:基于视紫质蛋白的多序列比对,利用统计偶联分析方法计算该多序列比对中各氨基酸位点的统计能量.然后,提取该多序列比对在Leu-125氨基酸位点为异亮氨酸的序列组成子比对,根据子比对计算比对中任一位点和Leu-125氨基酸位点的统计偶联能量.结果:根据此统计偶联能量推测出与Leu-125偶联的氨基酸位点.结论:通过统计偶联分析推测出的与Leu-125偶联的氨基酸位点为研究证实了的视紫质样GPCR中的重要功能位点,它们构成了视紫质样GPCR的变构通讯网络.
关键词： 视紫质 统计偶联分析 蛋白偶联受体 Leu-125氨基酸 -
宝宝“亮眼”四搭档
"亮眼"搭档1:锌+维生素A近年来,锌营养元素对宝宝的重要影响一再被强调出来,缺锌会使宝宝出现生长发育迟缓、厌食、反复感染等症状,同时还会影响维生素A的生成转换,引起视网膜视紫质合成障碍,暗适应力减弱.锌的作用不容忽视,锌为构成多种酶的主要成分,还能增强视神经的敏感度.缺锌的宝宝经过补锌治疗后,症状均会得到明显改善,所以,爸爸妈妈不用担心哦!
