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Smad 4基因在鼻咽癌CNE2细胞中的突变分析
目的:研究CNE2细胞中Smad 4基因的突变.方法:运用RT-PCR方法从CNE2细胞中克隆人Smad 4 cDNA序列,然后与正常鼻咽组织及GenBank序列进行比较分析.结果:CNE2细胞中Smad 4基因没有发生任何形式的突变.结论:CNE2细胞可能是一种非Smad 4突变的恶性肿瘤,构建的含有人Smad 4编码序列的重组质粒,为今后开展Smad 4基因的功能研究奠定了基础.
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傣族、汉族非综合征型耳聋患者GJB2基因分析
目的 分析云南省普洱地区傣族、汉族非综合征型耳聋患者GJB2基因编码区核苷酸序列.方法 采集同一地区的傣族(20例)、汉族(74例)非综合征型耳聋患者(共94例)及152例健康人群(40例傣族和112例汉族)的外周静脉血,提取基因组DNA,进行GJB2基因编码区的PCR扩增,并对PCR产物进行测序,检测GJB2基因的突变位点.结果 GJB2基因检测发现了6种常见核苷酸序列的改变方式,包括79G→A、341A→G、109G→A、235delC、608T→C和257-258GC to CG.对照组中未检测到235delC致病突变.在94例非综合征型耳聋患者中发现3例(傣族1例,汉族2例)携带235delC纯合突变(3.19％).其余5种碱基改变为常见的多态性变化.结论 相对于中国内地的汉族而言,普洱地区的傣族、汉族非综合征型耳聋患者GJB2基因235delC的突变率较低.
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瘢痕疙瘩成纤维细胞p53基因突变的研究
目的探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞中p53基因第4～8外显子的突变规律及其意义. 方法取瘢痕患者手术切除的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕标本各12例,并设患者自身正常皮肤标本及血标本为对照.体外分离、培养上述组织标本的成纤维细胞.采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法和基因测序法,检测各种组织成纤维细胞中p53基因的突变情况.结果12例瘢痕疙瘩标本中有9例p53基因外显子4、5、6、7出现点突变和移码突变,增生性瘢痕标本、正常皮肤标本及血标本中均未检出突变.结论p53基因突变是瘢痕疙瘩形成和发展的重要因素之一.
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血友病A病人FⅧ基因突变的检测
目的 了解血友病A病人FⅧ基因突变情况,探讨FⅧ基因突变与血友病A发生的相关性.方法 采用Sanger测序的方法,检测1例血友病A病人及其母亲FⅧ基因外显子编码区突变;采用多重连接探针扩增(MLPA)技术,检测病人FⅧ基因各个外显子是否发生缺失、重复突变;采用长距离聚合酶链式反应(LD-PCR)技术,检测病人FⅧ基因的内含子1、内含子22倒位突变.结果 血友病A病人检测到FⅧ基因2158位点一个半合子的致病突变,其母亲检测到同一位点的杂合突变.结论 血友病A病人FⅧ基因2158位点发现突变,该突变遗传自病人之母,可能是导致血友病A发病的致病性变异.
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肝豆状核变性一核心家系ATP7B基因突变分析
目的 检测肝豆状核变性(WD)病人ATP 7B基因突变情况,探讨在WD发病中该基因复合突变的意义.方法 采用第二代DNA测序技术检测1例WD病儿及其生物学父母的ATP7B基因突变,通过PCR技术和Sanger测序技术进行突变位点的验证,以同样方法检测100例健康查体者的相同位点作对照.结果 经第二代DNA测序技术检测,WD病儿ATP 7B基因发现复合突变c.2333G＞T/c.3955C＞T,而其生物学父母分别检测到c.3955C＞T和c.2333G＞T;100例健康查体者均未检测到此突变.上述突变均经Sanger测序技术证实.结论 该WD病儿检测到ATP7B基因致病杂合突变,两个杂合突变均可能引起蛋白质结构和功能改变,其共同作用导致WD发病.
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胃肠道间质瘤的c-kit基因突变检测
目的 探讨CD117阳性的胃肠道间质肿瘤(GIST)c-kit基因突变分布及类型.方法 采用免疫组化技术,对10例GIST标本行CD117、CD34、SMA和S-100检测,以确诊为GIST;采用PCR技术对CD117阳性的GIST进行c-kit基因突变检测;采用直接测序方法对突变c-kit基因11、9、13和17号的外显子突变进行序列分析.结果 4例成功提取了肿瘤DNA,其中3例检出了c-kit基因突变,均分布于第11号外显子,均为557～558(WK)的缺失性突变;其中2例为纯合子性突变,1例为杂合子性突变.结论 CD117阳性的GIST通常有c-kit基因突变,其11号外显子是经典分布热点,变异纯合子和杂合子突变为常见类型.
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亲子鉴定中STR基因座可疑多步突变2例
1 案例两位母亲(胡某与杨某)均因为自己女儿(刘某与李某)办理出生医学证明所需,委托我中心进行亲子关系鉴定.本中心采集四位被鉴定人指尖血备检.用Chclcx-100法提取基因组DNA,分别采用AGCUEX22、AGCU 21+1试剂盒(无锡中德美联生物技术有限公司)对常染色体上39个STR基因座进行复合扩增,并用PowcrPlcx(R)16 HS试剂盒(美国Promcga公司)对常染色体上15个STR基因座进行复合扩增,对上述检验结果进行复核验证.
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SiFaSTRTM 23plex DNA身份鉴定系统在华东汉族人群中的法医学应用
目的 调查SiFaSTRTM 23plex DNA身份鉴定系统所包含的21个常染色体STR基因座及DY S391基因座在华东地区汉族人群中的遗传多态性,并评估其在法医学中的应用价值.方法 采用SiFaSTRTM 23plex DNA身份鉴定系统对2000名无关个体进行分型检测,统计分析上述STR基因座的群体遗传学参数.采用该试剂盒对支持亲子关系的3198例案例进行检测,观察21个常染色体STR基因座的突变情况.结果 21个常染色体STR基因座均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),Ho为0.6175～0.9270,DP为0.7964～0.9869,PIC为0.5611～0.9123,CDP为0.999999999999999,CPEduo为0.999997431701961,CPEtrio为0.999999999654865.DY S391基因座共检出5个等位基因,等位基因频率在0.0040～0.7290,GD为0.4189.除D13S317和D10S1248外,其余19个常染色体STR基因座共观察到76次突变,其中一步突变75次(98.68％),三步突变1次(1.32％),突变率为0.2465×10-3～2.7114×10-3,21个常染色体STR基因座平均突变率为0.8921×10-3(95％置信区间为0.70×10-3～1.10×10-3).33例三联体突变事件中,父、母源性突变比例为2.09:1.结论 SiFaSTRTM 23plex DNA身份鉴定系统在华东地区汉族人群中具有良好的遗传多态性,且各STR基因座突变率在可接受范围内,可用于法医学亲权鉴定和个体识别.
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20723例亲子鉴定中19个STR基因座的突变分析
目的 观察并分析肯定亲权关系的案件,探索STR基因座的突变规律.方法 采用Goldeneye 20A试剂盒对20723例肯定亲权关系的案件筛选等位基因突变事件,统计各基因座的突变率和突变等位基因的来源、片段大小、突变步数及重复单位的增加或减少情况,分析突变相关因素的特点.结果 19个STR基因座共发现548例突变,观察到557个突变事件,基因座的突变率为0.07‰~2.23‰.父系突变与母系突变的比例为3.06:1.突变以一步突变为主,增加与减少重复单位的情况相当;二步以上(含二步)突变更易出现重复单位减少.突变主要发生于中等位基因,重复单位增减比例相当,长等位基因突变中重复单位减少显著多于增加.父系突变出现重复单位增加与减少的比例相当,母系突变重复单位减少较增加多见.结论 各基因座的突变率差异具有统计学意义,当出现1~2个基因座不符合遗传规律时,应当加测其他检测系统,并结合突变基因座的信息计算PI值,以进一步明确鉴定意见.
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肥厚性心肌病RAF1c.770C>T基因突变1例并文献复习
目的 分析1例肥厚性心肌病(HCM)病儿临床表现 、基因突变结果及临床意义.方法 1例10月龄的病儿,因咳嗽 、发热 、呼吸困难及反复发绀而入院.首诊为 Ⅰ 型呼吸衰竭 、心功能不全与重症肺炎.超声心动图 、心脏计算机断层扫描 、心脏磁共振成像扫描以及心电图检查诊断为HCM.病儿及父母行全基因组测序,检测基因突变情况.结果 据测序分析,发现病儿携带一种新的杂合突变体RAF1 c.770C>T,但其父母未发现相同突变体.RAF1突变可能导致具有HCM特征的NOONAN和LEOPARD综合征,但结合病儿临床表现及相关检查,排除了这2种综合征的可能性.结论 首次报道了一种单独的突变体RAF1 c.770C>T,具有该突变体的病儿有HCM的特征,但发病极早,婴儿期即出现明显的心肌肥厚,临床表现极为严重.因此,应对携带该突变点的HCM病儿家族成员进行长期追踪随访.
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多模板液态活检技术在三阴性乳癌基因突变检测中的应用
目的 评估多模板液态活检技术在三阴性乳癌基因突变检测中的应用价值,以利于临床及时采取措施对病人进行干预.方法 分析美国Cynvenio公司对211例三阴性乳癌病人进行游离DNA(cfDNA)和循环肿瘤细胞(CTC)测序的结果.采用McNemer检验及Kappa值分析其检测结果的一致性.结果 77.25％的三阴性乳癌病人能在基因检测中发现突变,TP53、PIK3CA及EGFR为检出率高的突变类型.所有出现复发的病人均发现有cfDNA或(和)CTC突变.同一病人检测cfDNA与CTC能检出不同的突变.结论 采用多模板液态活检技术对三阴性乳癌进行连续监测,能够更完整地反映病人的基因突变情况,以对病人的复发或转移风险做出更准确评估.
