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血友病患者的临床防治体会
目的:探讨血友病患者的临床防疗方法分析.方法:选取临床2010年1月~2012年6月收治的血友病患者20例行替代疗法和药物治疗临床资料进行分析.结果:替代治疗引起的肝炎、艾滋病和抗FⅧ抗体的产生则与患者的预后密切相关.轻、中型预后相对较好,重型者因易发生危及生命的严重出血,预后不佳.结论:血友病的治疗仍以替代疗法为主,即补充缺失的凝血因子,是防治血友病出血重要的措施.预防损伤是防止出血的重要措施.
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血友病A患儿的家庭护理
血友病是遗传性凝血因子缺乏所致的一组出血性疾病.分为血友病A,血友病B,血友病C[1].临床以血友病A多见,缺乏第八凝血因子,又称真性血友病.血友病A全部为男性发病,多于婴儿期开始,表现为经常反复,自发性出血或轻微损伤后引起渗血或出血不止.出血部位以下肢,前臂,臀部皮下软组织及肌肉出血常见,负重关节如膝关节,髋关节,肩关节次之,内脏及颅内出血可危及生命.
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血友病性关节炎关节置换术后个性化预防血栓治疗的临床观察
目的:观察血友病性关节炎关节置换术后个性化预防血栓治疗的临床意义.方法:自2005年9月至2013年10月,11例甲型血友病性关节炎患者行关节置换术,共手术14次,其中包括1例双膝计1次,左膝6次,右膝5次,髋关节2次.11例均为男性,年龄23～57岁,平均(36.1±11.0)岁,平均体重(64.1±8.9) kg.术前结合影像学和实验室检查准确诊断和分型,评估关节功能和术后静脉血栓栓塞出现的风险,围手术期动态监测患者FactorⅧ:C、血常规和凝血功能.结合术前风险评估,术后根据检测结果个性化调整替代药物重组人凝血因子Ⅷ(拜科奇)剂量进行预防血栓治疗,观察患者血栓发病率.同时将患者分为术后远端关节活动组和非活动组,观察记录两组患者的凝血类各项指标和出院时间.结果:根据术后FactorⅧ:C,凝血类和血常规检查动态调整替代疗法预防血栓,纳入研究11例均未发生术后深静脉血栓或肺栓塞.早期指导肢体远端关节活动患者术后短期内APTT高于非活动组,D-2聚体低于非活动组,术后出院时间短于非活动组.结论:血友病性关节炎关节置换术后由于自身凝血功能障碍易发生出血,但并不意味着此类患者无术后血栓形成风险,根据动态检测调整替代药物剂量,完成个性化术后预防血栓、止血和凝血因子代替治疗的平衡,同时配合术后肢体远端功能,可以大大降低血栓风险,并且缩短出院时间.
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血友病A FⅧ基因内含子22重组基因型及检测方法
FⅧ基因内含子22重复序列发生染色体内相反方向的同源重组引起内含子22倒位,导致约45％-50％的重型血友病A;而同一染色体内、同源染色体间或染色单体之间的相同方向内含子22重复序列(intron 22 homologous region,int22h)的重组导致两序列中间区域的复制或缺失,可以引起内含子22倒位的检测出现假阳性或假阴性.改良的长距离PCR及反向转变PCR(inverse shifting PCR,IS-PCR)可用于区分上述所有可能的int22h重组基因型.
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遗传因素与血友病A凝血因子抑制物产生的研究进展
血友病A(HemophiliaA,HA)是一种X连锁隐性遗传性凝血功能障碍性疾病,由编码FⅧ(凝血因子Ⅷ)的基因突变引起的凝血因子不足或功能障碍所致.血友病A的治疗,在目前仍以凝血因子替代治疗为主.反复输注凝血因子制剂后会产生针对FⅧ的抗体,这是HA治疗的严重并发症之一.关于抑制物发生率,国内外文献报道差异较大.影响凝血因子抑制物产生的因素多种多样,主要分为遗传因素和环境因素,其中遗传因素是抑制物产生的主要因素.本综述主要阐述国内外HA凝血因子抑制物产生的相关遗传危险因素的研究现状.
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凝血因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列在云南省傣、彝和汉族人群中的多态性研究
研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子22(CA)n二核苷酸重复序列的多态性,获取高多态信息量的分子遗传标志.应用聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查.结果发现,傣族和彝族中至少有(CA)n拷贝数为24,25和26的3种等位基因片段,两民族中的频率分布分别为1.2%-57.5%和16.43%-63.00%;汉族人群中至少有5种等位基因片段,(CA)n拷贝数分别为24,25,26,27和28,频率分布在8.97%-32.00%.在上述三种民族人群中均未发现FⅧ基因内含子22二核苷酸重复序列的杂合子.本研究的结果提示,目前至少可认为该位点不宜作为云南省傣、彝和汉族人群的DNA遗传标志.
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重组狗凝血因子Ⅷ的慢病毒介导体外表达的研究
本研究的目的是制备携带狗凝血因子Ⅷ(cFⅧ)基因的慢病毒载体,探讨慢病毒载体能否介导cFⅧ在体外的有效表达.用构建携带cFⅧ基因的慢病毒载体pTK161(含PUB启动子)和pTK162(含2OH1启动子),同时构建含绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体pTK161'(含PUB启动子)和pTK162'(含2OH1启动子)的方法,分别与包装质粒ANRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,将包装好的病毒颗粒再感染293T细胞,检测病毒滴度和培养细胞上清中cFⅧ活性.结果显示:经限制性酶切鉴定,成功构建了pTK161、pTK162、pTK161'和pTK162'正向连接载体;pTK161'和pTK162'的病毒滴度分别为1.54×106U/ml和2.83×106U/ml;pTK161、pTK162感染靶细胞后24小时细胞上清中即可检测到cFⅧ的表达,72小时表达量达高峰.pTK162载体cFⅧ表达活性接近正常狗血浆FⅧ活性,而且明显高于pTK161(p＜0.05),6周后cFⅧ表达活性仍达高值的1/4.结论:构建的自身失活慢病毒载体可携带较大片段的cFⅧ基因,并在体外可获得有效表达;本研究为慢病毒载体介导的血友病A的基因治疗研究提供实验依据.
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长距离PCR检测重型血友病A病人凝血因子Ⅷ基因倒位
为了筛查山东省重型血友病A(hemophilia A, HA)凝血因子Ⅷ基因倒位的患者并检出携带者,采用长距离DNA扩增(LD-PCR)方法,以0.6%琼脂糖凝胶电泳技术,检测临床上确诊的55例重型HA患者及其家系成员中是否存在凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因倒位.电泳出现11 kb带,示凝血因子Ⅷ基因倒位;12 kb带,示非倒位;这两条带同时出现者为凝血因子Ⅷ基因倒位携带者.结果表明:55例无亲缘关系的重型HA患者中,发现22例患者(或家系成员)有凝血因子Ⅷ基因倒位,占重型HA患者的40%;15个家系中查出基因倒位携带者5名.结论:运用LD-PCR技术可以准确、简便、快速地检测重型血友病A患者是否存在凝血因子Ⅷ基因倒位.
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非病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在小鼠32D细胞系中的表达
为了观察非病毒载体pRC/RSV介导的人凝血因子Ⅷ基因在小鼠32D细胞系中的表达,将B结构域缺失(△760aa-1639aa)的人FⅧcDNA(hFⅧBDcDNA)亚克隆至质粒载体pRC/RSV,构建重组质粒载体pRC/RSV-hFⅧBDcDNA.经SuperFeot Transfection Reagent转染小鼠32D细胞系,分别采用一期法、ELISA法和RT-PCR检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性(hFⅧ:C)和抗原含量(hFⅧ:Ag)以及细胞中hFⅧBDcDNA的转录.结果表明:小鼠32D细胞系培养上清液中的人FⅧ:Ag高达到了450.08毫微克/(106细胞·24小时),hFⅧ:C高达到了2.01单位/(106细胞·24小时),RT-PCR可检测到32D细胞中hFⅧBDcDNA转录的mRNA.结论:非病毒质粒载体pRC/RSV介导的人凝血因子Ⅷ基因能够在小鼠32D细胞系中表达人FⅧ蛋白,所表达的FⅧ与正常人血浆中的野生型FⅧ具有相似的凝血活性.
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血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物筛查及分析
本研究通过检测重型血友病A(hemophilia A,HA)患者凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物,探讨抑制物阳性患者基因突变情况.选取58例一期法检测FⅧ:C均小于1% HA患者,以APTT法为基础进行FⅧ抑制物筛查,筛查阳性者用Bethesda法进行FⅧ抑制物定量分析.以基因组DNA为模版,对抑制物阳性患者FⅧ12、14、16外显子进行基因扩增,PCR产物通过直接测序检测突变情况.结果表明:58例HA患者中4例(6.9%)抑制物检测为阳性,FⅧ12、14、16外显子基因均未发现基因突变.结论:本组病例HA患者抑制物阳性率低于国外文献报道,抑制物产生的原因有待于进一步研究.
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中国甘肃省血友病中心223例血友病患者临床分析
目的:了解中国甘肃省血友病患者的发病及诊疗现状.方法:回顾性分析我中心2010年1月至2015年5月223例血友病患者的临床资料.共收集到来自甘肃14个市及周边临近省份223例病例,其中血友病A(HA)203例,血友病B(HB) 20例;在223例中男性222例,女性1例,农村患者177例,占79.4％.结果:首次出血的中位年龄2岁,确诊的平均年龄5.6±6.5岁,HA和HB患者诊断延迟时间分别为2.50±4.91年和2.07±4.76年.在所有患者中合并关节出血168例(75.3％),关节畸形123例(55.2％);91.6％患者按需治疗,乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝病毒(HCV)的感染率分别为1.7％和6.2％.86.9％的患者首次就诊医院为3级以下医院,其中仅15.9％首诊医生考虑患者为血友病.结论:甘肃省血友病患者的确诊率较低,诊断延迟时间较长,合并关节出血多,累计关节畸形比例高,丙肝感染率高.
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血友病A患者血浆抗因子Ⅷ同种抗体的检测及其与因子ⅧC区的关系
本研究应用快速而敏感的ELISA法检测血友病A患者血浆抗因子Ⅷ同种抗体,并探讨其与因子ⅧC区的关系.收集140例血友病A患者样本,其中重型(FⅧ∶C＜1％)84例,中型(FⅧ∶C 1-5％)34例,轻型(FⅧ∶C＞5％)22例；患者均已经过因子Ⅷ替代治疗.正常对照样本80例.以本室制备的抗因子Ⅷ单克隆抗体包被酶标板,封闭后加入重组人凝血因子Ⅷ,洗涤后加入待测稀释血浆,再次洗涤后加入HRP标记的羊抗人IgG,OPD显色,记录A490,以正常人血浆为对照,样本A490大于正常人对照3 SD定义为因子Ⅷ抗体阳性.以抗His抗体包被酶标板,封闭后加入本室制备的rFⅧ-C1C2区蛋白,洗涤后加入待测稀释血浆,再次洗涤后加入HRP标记的羊抗人IgG,OPD显色,记录A490,以正常人血浆为对照,样本A490大于正常人对照3 SD定义阳性.结果表明,通过ELISA法检测,56例(40％)血友病A患者血浆抗因子Ⅷ同种抗体阳性,其中46例(82.1％)因子Ⅷ同种抗体阳性的血浆样本中存在与因子ⅧC1C2结合的同种抗体.结论:因子ⅧC功能区是中国血友病A患者因子Ⅷ同种抗体的主要结合部位之一.
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慢病毒介导的B区缺失的人凝血因子Ⅷ在NOD/SCID小鼠中的持续表达
近年来,基因治疗作为一种新的治疗方法给血友病A的治疗提供了新的思路.本研究旨在探讨在体外和NOD/SCID小鼠中应用慢病毒载体介导的血友病A基因疗法的可能性.构建含有B区缺失的人凝血因子Ⅷ(BDDhFⅧ)基因和IRES-eGFP编码序列的慢病毒表达载体pXZ9/BDDFⅧ.通过3质粒共转染293FT包装细胞,包装后感染293FT,HLF,Chang-liver和人骨髓间充质干细胞.在感染后分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA),一期法,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和聚合酶链反应(PCR)法检测凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性,FⅧ抗原,FⅧ的mRNA转录和基因整合情况.超速离心收集病毒颗粒,并通过门静脉注射感染NOD/SCID小鼠.ELISA分析小鼠血浆FⅧ抗原,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,转导后1个月RT-PCR分析小鼠肝脏人FⅧ的转录情况.结果表明:成功制备高浓度的重组慢病毒,并能在体外高效转导靶细胞.感染后72 h能检测到高水平的FⅧ活性和FⅧ抗原.RT-PCR和PCR法能敏感检测到人FⅧ基因特录和整合至感染后的细胞中.在所有接受重组慢病毒颗粒注射后的NOD/SCID小鼠肝脏中均能检测到人FⅧ基因的转录,同时重组慢病毒也能在体内高效转导小鼠肝细胞.在感染后72 h小鼠血浆中人FⅧ水平为(49±6) mU,1周后为(54±8) mU,1个月后为(23±4) mU.结论:携带BDDhFⅧ基因的慢病毒颗粒在体内外能高效转导靶细胞,且所有被转导的靶细胞都能有效的分泌人FⅧ.经过门静脉注射慢病毒颗粒的NOD/SCID小鼠可以持续表达人FⅧ.
关键词： 慢病毒载体 NOD/SCID小鼠 血友病A B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因 基因治疗 -
一例血友病患者关节翻修术的围手术期护理
患者男，39岁，血友病A型（第Ⅷ因子缺乏），11年前无明显诱因出现左膝关节疼痛，活动受限，诊断为“左膝关节退行性骨关节病”，行左侧人工全膝关节置换术。1年前出现双膝关节疼痛活动受限，右侧明显，于第四军医大学第一附属医院行右侧人工全膝关节置换术。1月前左膝关节疼痛加重，活动范围较前明显减少。入院查体：一般情况好，生命体征平稳，心肺功能未见异常。专科检查：双膝关节前方可见20 cm纵向手术瘢痕，左膝关节略肿胀，双膝未闻及明显弹响，左膝关节周围间隙轻压痛（＋），髌周轻压痛（＋）。伸屈活动度：左／右＝5～60°／5～60°，膝过伸过屈试验左／右＝（＋）／（-），浮髌试验左／右＝（-）／（-），膝内外翻试验左／右＝（＋）／（-），前后抽屉试验左／右＝（-）／（-），髌骨研磨试验左／右＝（＋）／（-），麦氏试验左／右＝（-）／（-），研磨挤压试验左／右＝（＋）／（-），股四头肌肌力左／右＝Ⅴ／Ⅴ级，双侧胫前肌、腓肠肌肌力、伸趾、伸拇肌力左／右＝Ⅴ／Ⅴ级，双下肢皮肤感觉及末梢血运无异常，膝、跟反射双侧正常。 X线片示：双侧膝关节置换术后，假体周围骨质吸收，假体松动。患者在全麻下行“左膝人工关节翻修术”。术后疼痛缓解，住院期间未出现发热、切口感染化脓、下肢深静脉血栓形成、褥疮及肺部感染。术后经凝血因子Ⅷ继续静脉输液、预防感染、积极对症支持治疗及适当功能锻炼，患者膝关节活动度得到很大改善，生活质量提高。患者术后7d出院，对治疗效果满意。
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1例胰岛素瘤合并A型血友病患者的围手术期护理
患者男,32岁,因反复意识不清8个月,进食或输注含糖液后,可以缓解.于2011年3月1日收入中国医学科学院北京协和医院内分泌科.入院后查血糖为2.6 mmol/L,C-肽2.3 ng/ml.胰腺灌注CT:胰腺钩突部小结节样明显强化灶,大小约0.5 cm ×0.8 cm,考虑胰岛素瘤的可能性大.为行手术治疗转入我科,查凝血酶原时间(PT)11.1s,PT％ 100.7％,国际标准化比值(INR) 0.96,凝血酶原时间(APTT) 45 s;考虑为血友病A,请血液科会诊,建议先行Ⅷ替代治疗.患者夜间定时加餐,于3月2日行入凝血因子Ⅷ治疗,定时复查APTT及凝血因子Ⅷ活性,于3月9日在全麻下行剖腹探查、粘连松解、胰岛素瘤切除术.术后密切观察生命体征及病情的变化,观察伤口敷料有无渗血及引流液色、量、性状;继续Ⅷ因子替代治疗,协助适量活动,加强呼吸功能锻炼、营养支持及抑酸治疗,定时监测血糖及凝血功能.术后恢复良好,于3月24日带管出院.
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T2-mapping功能成像在兔膝关节内出血模型中显示出血后关节软骨异常的价值
目的 探讨T2弛豫时间图(T2-mapping)功能成像在兔膝关节内出血模型中显示出血后关节软骨异常的价值.材料与方法 选取8月龄新西兰雄性大白兔15只,以兔右腿为模型侧,左腿为空白对照.从耳缘采自体静脉血2.5 ml,注入关节腔,关节肿胀、关节腔内见暗红色积血,提示12只兔造模成功.在第1周和第2周末各重复注血1次,剂量同前.采用随机数字表法将12只兔随机分为两组,每组6只,分别于第4周、第8周行MRI扫描,动态监测双膝关节软骨变化,并于MRI检查后立即处死动物取材行病理检查观察软骨改变.MRI检查序列包括脂肪抑制的三维快速扰相梯度回波序列(3D-FS-SPGR)和T2-mapping.观察影像表现,测量并比较T2-mapping上T2值.结果 第4周和第8周模型侧与对照侧相比,三维快速扰相梯度回波序列所示软骨未见明显差异,滑膜无明显增厚.第4周,模型侧T2-mapping伪彩图未见明显差异;第8周,模型侧T2-mapping伪彩图见股骨远端软骨正常的蓝绿色阶因软骨损伤而出现红黄色色阶.第4周和第8周,模型侧软骨T2值分别为(71.57±13.41) ms、(73.50±10.04) ms,对照侧分别为(59.09±2.90)ms、(56.01-6.47) ms,模型侧均高于对照侧,差异有统计学意义(P=0.029、0.001);模型侧第8周T2值较第4周升高,但差异无统计学意义(P=0.131).结论 兔膝关节内出血模型T2-mapping功能成像能早于形态学显示出血后关节软骨异常.
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1例行眼球摘除术的血友病患者的围术期护理
总结了1例血友病A青光眼患者自发性眼球破裂行眼球摘除术的围术期护理.凝血功能监测和血液制品管理保证了替代疗法的有效性和安全性;做好心理护理,减轻了患者恐惧,使患者接受手术治疗;术后不仅密切观察手术相关的并发症和出血情况,还加强了专科健康教育,有力保护了患者健眼视力.患者经过精心护理,未出现局部和全身出血现象,眼部伤口愈合良好.
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A型血友病患儿家庭治疗护理状况回顾性调查分析
目的 调查中国A型血友病4～18岁患儿家庭治疗和护理状况。方法 2006年、2010年两次对血友病家庭治疗和护理状况进行调查。结果 A型血友病患儿诊断年龄和治疗年龄晚于首次出血年龄;凝血因子用量不足;血友病性骨关节病患病率高;开展了家庭治疗的血友病患儿从55例上升到119例,血友病患儿及家庭对发病原因、遗传规律、出血严重程度的评估和正确服用止痛药物认知率分别从80.8％、78.5％、37.4％和48.4％上升到94.7％、94.1％、52.7％和85.5％;在开展家庭康复训练、保持治疗记录完整两方面没有明显改善。结论 A型血友病患儿诊断治疗延迟,凝血因子用量不足,骨关节病发病率高,家庭护理水平仍然有待于进一步提高。
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血友病儿童45例关节健康状况分析及其与步态的相关性研究
目的 研究中国血友病儿童关节健康状况,及其对步态的影响.方法 分别收集在北京协和医院、广州南方医院、温州市第三人民医院、北京儿童医院就诊的4～18岁的儿童共45例,使用中文版血友病关节健康评估表(HJHS)2.0版评价患者的双膝、双踝、双肘关节的健康状况及步态,对结果进行总结,并将其中的步态分析得分与各关节的总评分及各关节评分做相关性分析.结果 93.3%的患者有至少1个关节受累,91.0%的患者有2个及以上关节受累,84.4%的患者有肘关节受累,93.0%的患者有膝关节受累,93.3%的患者有踝关节受累;年长儿童关节受累更严重;步态异常率为88.9%.步态异常与膝关节、踝关节受累明显相关,与关节疼痛、肌力下降、肌肉萎缩及关节屈曲度和伸展度下降有显著相关,而与关节肿胀、关节肿胀持续时间、关节运动时摩擦音无明显相关性.结论 中国血友病儿童关节受累常见,步态异常常见,膝关节与踝关节的受累,以及下肢关节疼痛、肌力下降、肌肉萎缩、关节屈曲度和伸展度下降与步态异常明显相关.
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血友病并发晚期急性重型乙型肝炎救治成功一例并文献复习
目的 通过分析1例血友病基础上发生的晚期急性重型乙型肝炎的救治过程,探讨重型肝炎的治疗并分享成功经验.方法 男性患者,28岁,治疗血友病期间感染急性乙型肝炎,起病5 d即进入深昏迷.通过病史、症状、体征及化验检查结果明确诊断,给予积极综合内科治疗,结合文献复习及本病例特点进行分析.结果 总胆红素高达552.3μmol/L,凝血酶原活动度低仅10.25%,颅脑CT显示沟回变浅,严重脑水肿,先后出现多种严重并发症,经过积极生命支持、内科综合诊治,62 d后痊愈出院,随访无复发.结论 急性重型肝炎十分凶险,有其他基础疾病时治疗难度很大,在无条件行肝移植和血浆置换术的情况下,需要全面积极综合诊治.
