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  • 微小RNA-7对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭能力的影响

    作者:秦安东;刘兴祥;李晶;刘娟;李雨松

    目的 探讨过表达微小RNA-7(miR-7)对肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭能力的影响及调控机制.方法 采用实时荧光定量PCR法检测肝癌组织和癌旁正常组织中miR-7 mRNA和Raf1 mRNA的表达,分析miR-7 mRNA的表达与肝癌患者临床病理特征的关系.将肝癌HepG2细胞分为空白对照组、miR-7阴性对照组和miR-7模拟物转染组,采用脂质体转染技术将miR-7模拟物和阴性对照瞬时转染HepG2细胞,以实时荧光定量PCR法检测miR-7 mRNA的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点各组细胞的增殖活性,采用Transwell侵袭实验检测各组侵袭细胞数目.通过TargetScan在线预测miR-7作用的靶基因,采用荧光素酶报告基因实验验证miR-7对预测靶基因Raf1的3′非翻译区的靶向作用.采用Western blot法检测肝癌组织、相邻正常组织和各组细胞中Raf1蛋白的表达.采用Pearson法分析miR-7 mRNA与Raf1 mRNA表达的相关性.结果 肝癌组织和相邻正常组织中miR-7 mRNA的相对表达水平分别为0.49±0.02和1.21±0.05,差异有统计学意义(P<0.01);miR-7 mRNA的表达水平与肿瘤大小、是否转移和预后有关(均P<0.05).miR-7模拟物转染组HepG2细胞中miR-7 mRNA的相对表达量为12.67±0.40,明显高于空白对照组(0.49±0.01,P<0.01).与空白对照组比较,转染48和72 h时,miR-7模拟物转染组的吸光度明显降低(P<0.01),侵袭细胞数目明显减少(P<0.01),野生型Raf1报告基因的荧光素酶活性明显降低(P<0.01).肝癌组织和相邻正常组织中Raf1蛋白的相对表达量分别为3.15±0.10和0.53±0.03,差异有统计学意义(P<0.01).miR-7阴性对照组和miR-7模拟物转染组HepG2细胞中Raf1蛋白的相对表达量分别为0.98±0.02和0.24±0.01,差异有统计学意义(P<0.01);肝癌组织中miR-7与Raf1的表达呈负相关(P<0.05).结论 miR-7在肝癌组织中的表达明显降低,与肝癌患者的较差预后相关;miR-7能通过调控Raf1基因的表达抑制肝癌HepG2细胞的体外增殖和侵袭能力.

  • miR-195靶向RAF1调控口腔鳞状细胞癌的生长、凋亡及迁移侵袭

    作者:郭芳;黄硕;刘宁;朱勇;刘昌奎

    目的 探讨miR-195与RAF1的靶向关系及二者对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长、凋亡及迁移侵袭的调控. 方法 构建miR-195过表达载体并合成si-RAF1,转染入SCC-4细胞,以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-195及si-RAF1在SCC-4细胞中的转染效率.MTT法、克隆形成及细胞周期实验评价miR-195对SCC-4细胞生长的影响,流式细胞仪检测miR-195对SCC-4细胞凋亡的影响;并通过双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR及Western blot检测miR-195与RAF1的靶向关系. 结果 成功构建miR-195真核表达载体并合成si-RAF1,qRT-PCR显示miR-195真核表达载体及si-RAF1在SCC-4细胞中均具有较高的转染效率(P<0.01).miR-195的过表达能够显著抑制SCC-4细胞的增殖活性及克隆形成,诱导细胞周期G1/S的阻滞,并促进细胞凋亡的发生;同时双荧光素酶报告基因分析表明,miR-195过表达能够显著抑制RAF1野生型报告载体荧光活性;Western blot和qRT-PCR进一步证实了miR-195能够抑制RAF1的mRNA和蛋白的表达. 结论 miR-195可能通过直接靶向RAF1来抑制OSCC细胞的生长及迁移侵袭,诱导细胞凋亡的发生.

  • 降低Raf1表达促进膀胱癌T24细胞凋亡的研究

    作者:冯春青;周洪革

    目的 下调T24膀胱癌细胞株中Raf1的表达,观察癌细胞株的细胞凋亡情况.方法 使用SiRNA干扰方法阻断Raf1在T24膀胱癌细胞株中的表达,随后用流式细胞仪观察细胞凋亡情况,使用westem-blot法确认细胞凋亡途径.结果 使用SiRNA干扰后Raf1表达显著降低,随之凋亡细胞数量明显增高,western-blot法确认Raf1表达降低后Caspase-3和PARP蛋白被激活.结论 Raf1表达抑制促使T24细胞凋亡,其凋亡通路是通过Caspase-3和PARP途径,此研究可能对膀胱癌的治疗提供新思路.

    关键词: 膀胱癌 Raf1 T24细胞
  • 双丁酰环腺苷酸抑制甲状腺癌细胞株 FTC-133增殖

    作者:王玉林;王辉;巴颖

    目的:探讨双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)对甲状腺癌细胞株 FTC-133增殖的影响。方法将 FTC-133细胞进行常规培养,分为对照组,处理组(dbcAMP 0.5、1.0、2.0 mmol/L)共4组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、生长曲线法观察0.5、1.0、2.0 mmol/L dbcAMP 经24 h、48 h 对甲状腺癌细胞株 FTC-133细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,使用反转录定量 PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹实验(Western Blotting)方法检测 Raf1的 mRNA 和蛋白表达水平。结果与对照组比较,不同浓度 dbcAMP 和时间处理的 FTC-133细胞增殖均受抑制,并表现出时间-剂量依赖性;S 期细胞显著减少,G2/M期细胞显著增加;Raf1 mRNA 和蛋白水平明显减低。结论dbcAMP 显著降低甲状腺癌细胞株 FTC-133的增殖能力,促进凋亡,可能与激活 ERK MAPK 通路有关。

  • RAF1与SWH信号通路的关系及其在头颈部鳞癌中的作用

    作者:王燕一;史琦;张蕾;步荣发

    SWH信号通路是在果蝇与脊椎动物之间共同存在的保守信号通路.SWH信号通路在果蝇与脊椎动物的器官发育中起一定的作用.在哺乳动物细胞中,维持生理平衡的过程中的压力信号激发STK3.当STK3被过度表达时会引起细胞凋亡.RAF1有抑制STK3的作用.通过RNAseq和微阵列的实验数据可以看出RAF1与TP73在头颈部鳞癌中的关系,可以看出RAF1与SWH信号通路的关系在头颈部鳞癌中可能的作用.

  • 肥厚性心肌病RAF1c.770C>T基因突变1例并文献复习

    作者:王晓琴;李一飞;石晓青;李莉;王一斌

    目的 分析1例肥厚性心肌病(HCM)病儿临床表现 、基因突变结果及临床意义.方法 1例10月龄的病儿,因咳嗽 、发热 、呼吸困难及反复发绀而入院.首诊为 Ⅰ 型呼吸衰竭 、心功能不全与重症肺炎.超声心动图 、心脏计算机断层扫描 、心脏磁共振成像扫描以及心电图检查诊断为HCM.病儿及父母行全基因组测序,检测基因突变情况.结果 据测序分析,发现病儿携带一种新的杂合突变体RAF1 c.770C>T,但其父母未发现相同突变体.RAF1突变可能导致具有HCM特征的NOONAN和LEOPARD综合征,但结合病儿临床表现及相关检查,排除了这2种综合征的可能性.结论 首次报道了一种单独的突变体RAF1 c.770C>T,具有该突变体的病儿有HCM的特征,但发病极早,婴儿期即出现明显的心肌肥厚,临床表现极为严重.因此,应对携带该突变点的HCM病儿家族成员进行长期追踪随访.

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