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胸腺肽α1对肺癌细胞株A549细胞凋亡的影响
目的 研究胸腺肽α1诱导肺癌A549细胞凋亡的抗肿瘤机制.方法 用不同浓度的胸腺肽α1(0,50,100 mg·L-1)处理A549细胞.24～ 72 h后,用MTT法检测细胞的生长活力.于48 h用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,用western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax的变化,分析胸腺肽α1对p-AKT/AKT途径的影响.结果 0 mg· L-1胸腺肽α1组的72 h的细胞抑制率为0％,细胞凋亡率为(0.80±0.07)％,caspase-3为1.00±0.00,Bax为1.00±0.00,bcl-2为1.00±0.00,p-AKT抑制程度为0％;50 mg· L-1胸腺肽α1组72 h的细胞抑制率为(23.51±3.44)％,细胞凋亡率为(5.36±1.07)％,caspase-3为3.74±0.56,Bax为4.11±0.82,Bcl-2为0.52±0.13,p-AKT抑制程度为(24.17±8.71)％;100 mg·L-1胸腺肽d1组72 h的细胞抑制率为(31.90±5.04)％,细胞凋亡率为(10.00±2.97)％,caspase-3为3.74±0.56,Bax为4.11±0.82,Bcl-2为0.52 ±0.13,p-AKT抑制程度为(49.21±12.45)％.50、100 mg·L-1胸腺肽α1组的细胞抑制率、细胞凋亡率、caspase-3、Bcl-2及Bax、p-AKT水平与0mg·L-1组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胸腺肽α1可以通过抑制AKT通路和抑制肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.
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金松双黄酮联用紫杉醇对A549细胞凋亡的影响
目的 探讨金松双黄酮联用紫杉醇对 A549 细胞 caspase -3 蛋白及Bcl-2、Bax mRNA 表达的作用. 方法 实验分为对照组、紫杉醇组(浓度1 μg? L-1)、金松双黄酮+紫杉醇组(浓度分别为0.5,1.0 μg? L-1),在药物作用72 h后,用相差显微镜观察A549细胞形态学变化;逆转录-聚合酶链反应检测细胞中Bcl-2、Bax mRNA 水平;蛋白免疫印迹法检测caspase -3 蛋白的表达. 结果 与紫杉醇组相比,联用金松双黄酮组较多细胞出现细胞核浓缩、碎裂的凋亡特征,且caspase-3蛋白及Bax mRNA表达上调而Bcl-2mRNA表达下降. 结论 联用金松双黄酮可增强紫杉醇对A549 细胞凋亡作用,可能与调节Bc1-2、Bax及caspase-3的表达水平有关.
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纳米氧化铁颗粒对A549和MRC-5细胞的氧化损伤及DNA损伤毒性评价
目的:比较氧化铁纳米颗粒诱导肿瘤细胞和正常细胞氧化应激损伤和DNA损伤程度的差异.方法:首先,测定胺基表面修饰的氧化铁纳米颗粒(Amine-IONP)对人肺腺癌细胞A549细胞和入胚肺纤维细胞MRC-5细胞生长的影响.然后,联合胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量、线粒体膜电位(mitochondtial membrance potential,MMP)和内质网状态(endoplasmic reticulum stress,ERS)等指标,评价Amine-IONP对A549细胞和MRC-5细胞的氧化损伤的差异.后,用碱性彗星电泳试验检测氧化铁纳米颗粒对2种细胞DNA损伤的差异.结果:Amine-IONP对MRC-5细胞增殖的抑制作用大于A549细胞(P＜0.05).Amine-IONP能诱导A549细胞ROS水平、ERS升高,MMP下降(P＜0.05),并呈明显剂量依赖性;而在Amine-IONP相同条件作用下,MRC-5细胞仅显示MMP水平出现显著性降低(P＜0.05),且变化程度与A549细胞相比显著较小(P＜0.05).彗星试验结果显示,Amine-IONP可导致A549和MRC-5细胞出现不同程度的DNA损伤(P＜0.05),且变化趋势与ROS水平变化相同.结论:Amine-IONP对A549细胞的毒性大于MRC-5细胞,对A549细胞的氧化损伤和遗传毒性均强于MRC-5细胞.研究数据为选择适宜的细胞系来评价纳米材料细胞毒性和遗传毒性提供了理论支持.
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五环三萜抑制A549细胞生长与促进糖原累积作用的相关性研究
目的:研究五环三萜化合物(齐墩果酸和山楂酸)对人肺腺癌A549细胞的生长是否有抑制作用并对其可能的作用机制即抑制糖原磷酸化酶进行探讨.方法:用MTT法测定不同浓度的化合物对A549细胞生长的抑制作用；通过测定细胞中的糖原含量的变化证实化合物抑制了细胞中糖原磷酸化酶的活性.结果:MTT法测得化合物对A549细胞生长具有抑制作用.同时,测得齐墩果酸和山楂酸对A549细胞的糖原磷酸化酶具有抑制活性,其IC50分别是5.98和4.01 μmol·L-1.进一步经化合物处理后的细胞内糖原含量呈现剂量依赖性增加.结论:齐墩果酸和山楂酸具有抑制A549细胞生长的作用,其作用可能是通过抑制细胞内的糖原磷酸化酶活性而实现的.
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聚乙二醇化多西他赛白蛋白纳米粒用于非小细胞肺癌模型的实验研究
目的:制备聚乙二醇化多西他赛白蛋白纳米粒(PEG-albumin nanoparticles,PEG-DANPs),比较市售多西他赛(艾素(R),Aisu(R))、多西他赛白蛋白纳米粒(DANPs)和PEG-DANPs三者对裸鼠非小细胞肺癌模型的作用.方法:分别建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤及原位癌模型,待皮下组肿瘤体积到达120 mm3时,两组模型分别通过尾静脉注射葡萄糖注射液,Aisu(R),DANPs和PEG-DANPs进行治疗,每7d给药1次,共给药4次.在后1次给药2d后,将皮下移植瘤组和原位癌组所有裸鼠全部处死,取瘤块、肺脏、心脏、肝脏、脾送检HE (hematoxylin-eosin staining)染色切片.另选取裸鼠32只,建立皮下移植瘤模型,分别注射上述相同药物,持续治疗直至裸鼠自然死亡,终统计并绘制裸鼠生存曲线.结果:PEG-DANPs能够有效地抑制裸鼠皮下移植瘤及原位癌的增殖,它能够有效地控制原位癌的转移并且延长裸鼠的生存时间.结论:PEG-DANPs是一种抗肿瘤细胞效果明显、不良反应小的药物,具有广阔的应用前景.
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聚乙二醇化多西他赛白蛋白纳米粒的制备及其体内外抗肺癌作用的研究
目的:制备聚乙二醇(PEG)化多西他赛白蛋白纳米粒(PEG-DANPs),比较市售多西他赛(艾素(R),Aisu(R))、多西他赛白蛋白纳米粒(DANPs)和PEG-DANPs对人非小细胞肺癌(NSCLC)体内外抗癌作用的差异,从而为临床治疗NSCLC提供一种新思路.方法:利用乳化挥发交联法制备DANPs,再将其进行PEG化制备出PEG-DANPs.将Aisu(R),DANPs和PEG-DANPs分别进行体外溶血、体外释放实验,MTT法检测药物抑制NSCLC A549细胞增殖的情况,流式实验检测药物诱导癌细胞凋亡情况,激光共聚焦技术观察癌细胞对2种纳米粒制剂的摄取情况,终比较三者治疗NSCLC的差异.结果:相比于Aisu(R)和DANPs,PEG-DANPs具有明显的缓释效应,对机体红细胞破坏较少;PEG-DANPs能够更好地进入A549细胞,可以有效抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡.结论:PEG-DANPs是一种抗肿瘤细胞效果明显、不良反应较小的制剂,具有广阔的应用前景.
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羟基喜树碱对人肺癌和人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用
目的：研究羟基喜树碱（HCPT）对人肺癌细胞A549及人胚肺成纤维细胞MRC-5不同的细胞毒作用及其机制。方法 HCPT20-200μmol·L-1作用A549及MRC-5细胞24，48和72h或脉冲给予HCPT 50-400μmol·L-1作用24 h后恢复培养5 d，MTT法测定细胞存活；倒置相差显微镜下观察细胞形态学的变化；流式细胞术测定HCPT 50μmol·L-1作用A549及MRC-5细胞48 h后细胞周期及凋亡。结果HCPT 20～200μmol·L-1作用48 h对A549和MRC-5细胞的增殖抑制作用均存在浓度依赖性，浓度-效应相关系数分别为0．898（P＝0．015）和0．996（P＝2．56E-5），并且HCPT对A549细胞表现出更大的细胞毒活性，与MRC-5细胞相比有显著性差异（P＜0．05）。HCPT作用A549及MRC-5细胞48 h的IC50分别是（24．00±0．69）μmol·L-1和（123．63±3．89）μmol·L-1，表明A549细胞在HCPT作用48 h时对药物的敏感性高于MRC-5细胞4倍之多。形态学观察发现，HCPT 50μmol·L-1作用48 h可引起大量A549细胞变圆、收缩，细胞质膜出泡及细胞溶解发生，相同情况下MRC-5细胞形态变化不明显。细胞周期和凋亡检测发现，HCPT 50μmol·L-1作用48 h，引起A549细胞S期和G2/M期阻滞并诱导其凋亡，但是只引起MRC-5细胞发生S期阻滞，凋亡不明显。HCPT 50-400μmol·L-1脉冲作用24 h后5 d恢复生长实验表明，A549细胞比MRC-5细胞受到更强的生长抑制作用，并且在开始恢复的24 h内，HCPT对2种细胞增殖的抑制作用仍然存在。在观察测定的5 d时间内，A549细胞及MRC-5细胞都没有完全恢复生长，但MRC-5细胞的恢复速度要快于A549细胞。结论 A549细胞比MRC-5细胞对于HCPT更为敏感，可能的机制有HCPT可以引起A549细胞S期和G2/M期阻滞并诱导其凋亡，而HCPT仅仅引起MRC-5细胞S期阻滞。
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麦角甾醇与顺铂联合用药协同抑制人肺癌A549细胞增殖
目的 研究麦角甾醇(ERG)与顺铂联合用药对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用.方法 设细胞对照组、ERG 15.75～252μmol·L-1组、顺铂16.75～268μmol·L-1组及ERG 15.75～252μmol·L-1+顺铂33.5μmol·L-1组,分别作用12,24,48和72 h,MTT法检测细胞存活.另设细胞对照组,ERG 31.5μmol·L-1组、顺铂33.5μmol·L-1组及ERG 31.5μmol·L-1+顺铂33.5μmol·L-1组,作用24 h后,划痕实验检测细胞迁移能力;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期;Western蛋白质印迹法检测活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶1(PARP-1)的表达.结果 ERG 15.75～252μmol·L-1+顺铂33.5μmol·L-1各浓度组细胞存活抑制率相较于ERG等浓度15.75～252μmol·L-1及顺铂(33.5μmol·L-1)组均有不同程度的提高.ERG 31.5μmol·L-1+顺铂33.5μmol·L-1组出现凋亡样的细胞数量及凋亡率明显高于二者单用(P<0.01).与细胞对照组相比,其余各组显著上调活化胱天蛋白酶3的表达,ERG+顺铂组活化的PARP-1蛋白片段显著增加(P<0.01).结论 ERG与顺铂两药联用能显著抑制A549细胞增殖和迁移能力,阻滞细胞G2/M期分裂,诱导并激活PARP-1依赖的细胞凋亡.
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荷包牡丹碱对人肺癌A549细胞生长及端粒酶活性的抑制作用
目的 探讨荷包牡丹碱对人肺癌A549细胞生长的抑制作用及其作用机制.方法 A549细胞加入荷包牡丹碱0～200 μmol·L -分别作用24,48和72 h,MTT法测定A549细胞的生长抑制作用.荷包牡丹碱0 ～ 20 μmol·L-1作用72 h,端粒重复序列扩增(TRAP)法测定端粒酶活性.变温紫外法检测荷包牡丹碱9 μmol· L-1对端粒酶G-四链体的稳定作用.结果 荷包牡丹碱25,50,100和200 μmol·L-1作用细胞72 h后的抑制率分别为33.4％,88.2％,88.6％和89.4％,明显高于正常对照组细胞(P＜0.05),并具有量效(r =0.906,P＜0.05)和时效(r=0.949,P＜0.05)性.与正常对照组相比,荷包牡丹碱5,10,15和25μmol·L-1可有效抑制A549细胞端粒酶的活性(P＜0.05),相对TRAP端粒酶活性从正常对照组的1.471±0.102分别降低为1.093±0.054,1.013±0.016,0.554±0.034,0.365±0.081 (P ＜0.05).荷包牡丹碱9μmol·L -使G-四链体的熔点值从正常对照组的48℃提高到54℃.结论 荷包牡丹碱可以通过稳定G-四链体结构,抑制端粒酶活性,有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长.
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Rho GTP激酶对细胞摄取单壁碳纳米角的影响
Rho GTP激酶对调控细胞骨架具有重要影响,其可控制微丝、微管的生长与维持,进而对细胞形态发生、细胞迁移、内吞转运等生命活动产生影响.已知细胞对纳米药物的摄取离不开细胞骨架的调控作用,但已有研究却很少关注Rho GTP激酶对细胞摄取纳米药物或纳米药物递送载体的影响.为了探究这一问题,本研究选择了单壁碳纳米角作为纳米药物或纳米药物递送载体的一种模型,其独特的物理化学性质使其成为药物递送领域热门研究对象.利用激光共聚焦显微镜和TEM观察细胞对纳米材料的摄取情况以及胞内分布;随后以各类内吞抑制剂处理细胞,分析细胞对单壁碳纳米角的摄取机制.实验结果表明,Rho GTP激酶中的RhoA被抑制后会显著减少细胞对单壁碳纳米角的摄取.单壁碳纳米角经网格蛋白介导的内吞入胞,入胞后主要分布在溶酶体中.
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鸦胆子油乳对肺癌A549细胞凋亡及血管内皮生长因子分泌的影响
目的 观察鸦胆子油对肺癌A549细胞凋亡和血管内皮生长因子分泌的影响,以探讨其治疗肺癌的作用机制.方法 用不同浓度鸦胆子油乳(0.5,1.25,2.5,3.75 g·L-1)与A549细胞共育不同时间(6,24,48 h),采用流式细胞仪(Annexin V双标法、DNA含量测定和凋亡细胞DNA片段原位末端检测等方法)检测凋亡细胞百分比,采用定量Sandwich酶免疫技术(ELISA)观察细胞血管内皮生长因子(VEGF)分泌量.结果 3种检测方法均表明,中、高浓度鸦胆子油乳(2.5,3.75g·L-1)作用6 h以上,具有显著的诱导A549细胞凋亡的作用.Annexin V双标法和DNA凝胶电泳结果表明,1.25 g·L-1的鸦胆子油乳作用24～48 h,也能诱导A549细胞凋亡.2.5 g·L-1鸦胆子油乳作用48 h能使A549细胞分泌VEGF显著减少.结论 鸦胆子油乳通过诱导肿瘤细胞凋亡,减少肿瘤细胞分泌VEGF发挥其治疗肺癌的作用.
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小干扰RNA特异性抑制肺肿瘤细胞A549中绿色荧光蛋白基因表达
目的:探讨绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)特异的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)对肺肿瘤细胞A549中的GFP基因表达的抑制作用,建立以真核表达载体释放生成特异基因 siRNA的方法.方法:构建mU6启动子驱动的含有GFP特异siRNA的真核表达质粒,转染A549肺肿瘤细胞,观察共转染时不同剂量siRNA对 GFP的抑制效应.结果:针对GFP核酸序列设计的特异性siRNA GFP-siRNA可有效抑制其表达,并当比例为1∶ 1时效果佳,而空质粒载体及无关RNAi无此效应.结论:以mU6为启动子的含特异RNAi 的质粒可作为抑制特异基因表达的一种新的技术手段,并且为研究基因功能的一条有效途径.
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微波辐射非热效应对A549细胞损伤反应的研究
目的 研究探讨微波辐射的非热效应对人肺癌A549细胞损伤的反应,以期为微波治疗肿瘤提供更全面的理论依据.方法 采用剂量为100 W(12 mv/cm2)、150 W(18 mv/cm2)和200 W(21 mv/cm2)的微波辐射冰浴方法制备的非热效应细胞模型10min；24 h后收集细胞,以Western印迹方法分析细胞Cytochrome c、Caspase-3,GRP 78、Caspase-4,Cathepsin D的表达；MDC染色、激光共聚焦显微镜观察细胞溶酶体变化.结果 辐射后A549细胞Cytochrome c、GRP 78蛋白表达增加,并且凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-4活化;细胞溶酶体活性增强表现为Cathepsin D表达增加以及MDC染色荧光强度加强.结论 微波辐射非热效应对组织细胞所造成的损伤反应可能是通过细胞线粒体、内质网和溶酶体途径共同所诱导的细胞凋亡,为微波治疗肿瘤提供新的思考方向.
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天南星提取液抗肺癌细胞活性研究
目的 研究中药天南星提取液对人肺癌A549细胞的体外增殖抑制作用.方法 采用MTT法测定天南星醇提液和天南星水提取液对人肺癌A549细胞的增殖抑制率,考察敏感低药物浓度,并计算半数抑制率IC50.结果 24、48、72 h的天南星醇提液和水提液对A549细胞均有不同程度的增殖抑制作用,且呈现出一定的时间-剂量依赖性.天南星醇提液敏感的低药物浓度为3.9 μg/mL,IC50为64.46 μg/mL,天南星水提液敏感的低药物浓度为15.6 μg/mL,IC50为133.5 μg/mL.结论 天南星醇提液和水提液对人肺癌A549细胞均有一定的增殖抑制作用,天南星醇提液抑制作用更为明显.
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靶向IGF-1R的siRNA增强肺癌细胞对Trail诱导凋亡敏感性的研究
目的 研究IGF-1R特异RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变以及其对Trail的敏感性.方法 化学合成IGF-1R特异siRNA转录模板,与表达载体连接,转染大肠杆菌扩增后提取质粒,酶切鉴定和DNA测序分析.转染A549细胞后筛选稳定表达IGF-1R-siRNA细胞株,FQ RT-PCR、Western blot和免疫组织化学检测IGF-1R基因表达.MTT法和流式细胞仪测定Trail作用前后转染和非转染A549细胞增殖活性和凋亡率.结果 成功构建IGF-1 R-siRNA表达载体并筛选出稳定表达IGF-1R-siRNA单克隆细胞.和空白对照相比IGF-1R蛋白和IGF-1RmRNA表达分别下降79.01％ (0.17 ±0.06 vs.0.81 ±0.15) (P ＜0.01)和76.05％(1.36±0.26vs.5.68 ±0.45) (P＜0.01).免疫组织化学显示IGF-1R表达降低.Trail作用于IGF-1R-siRNA的A549,细胞增殖速度降低(P＜0.05);凋亡率明显增加(P＜0.01).结论 IGF-1R-siRNA表达载体具有RNA干扰作用.IGF-1R表达下降后A549细胞增殖速度减慢,对Trail诱导的细胞凋亡敏感性增加.
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呼吸道合胞病毒感染后IL-17、 hCLCA1表达变化及罗格列酮的抑制效应
目的 研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染A549细胞后过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、IL-17及人钙激活氯离子通道辅助蛋白1(hCLCA1) mRNA和蛋白表达变化及罗格列酮和IL-17抗体的干预作用.方法 将传代细胞随机分6组:罗格列酮/RSV组、罗格列酮/GW9662/RSV组、DMSO/RSV组、IL-17抗体/RSV组、GW9662/RSV组、细胞对照组.DMSO/RSV组予0.02％ DMSO预处理0.5h,罗格列酮/RSV组予罗格列酮(10μmol/L)预处理0.5h,罗格列酮/GW9662/RSV组在应用罗格列酮前先以GW9662(10μmol/L)预处理0.5h,IL-17抗体/RSV组在RSV感染前予IL-17抗体预处理2h.各组培养6、12、24h收获细胞及上清液待测.应用实时荧光定量RT-PCR检测PPARγ、IL-17、hCLCA1 mRNA表达,Western blot法检测hCLCA1蛋白水平,ELISA检测IL-17蛋白表达.结果 与细胞对照组相比,DMSO/RSV组PPARγ、IL-17、hCLCA1 mRNA和蛋白表达在3个时间点均明显升高,随时间增加表达量增加,24h达高峰,与12h比较,差异有统计学意义(P均＜0.05);在同一时间点上罗格列酮/RSV组、IL-17抗体/RSV组IL-17、hCLCA1 mRNA和蛋白均明显低于DMSO/RSV组,与罗格列酮/GW9662/RSV组相比,罗格列酮/RSV组IL-17、hCLCA1 mRNA和蛋白表达均明显降低.罗格列酮及IL-17抗体对IL-17 mRNA和蛋白的抑制作用在干预后6h强,与12、24h相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 罗格列酮可抑制RSV感染后IL-17、hCLCA1 mRNA及蛋白表达增加,机制可能为上调PPARγ基因的表达,使PPARγ活性增强,在转录水平下调IL-17表达,从而抑制气道黏液高分泌.
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紫草素通过促进ROS的产生诱导人非小细胞性肺癌A549细胞凋亡的机制
目的 研究紫草素对人非小细胞性肺癌A549细胞的抗肿瘤作用,并探讨其可能的机制.方法 不同浓度紫草素处理A549细胞和人正常肺MRC-5细胞,四氮唑盐还原(MTT)法检测细胞的活性;流式细胞术结合PI-FITC双染色测定细胞凋亡;2'7'-二氯双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS);Western blot法测定caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达.结果 紫草素对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01);当剂量≤l0μmol/L时,其对MRC-5细胞的增殖没有明显的影响(P＞0.05).不同浓度紫草素处理24h后,A549细胞的凋亡率(早期凋亡+晚期凋亡)显著增加(P＜0.05或P＜0.01),caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白被诱导活化,caspase抑制剂(Z-VAD-FMK)预处理则明显降低A549细胞的凋亡率(P＜0.01),并抑制以上3种蛋白的活化.另外,紫草素处理可引起A549细胞ROS的产生,且呈现出一定的剂量依赖性.ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)和L-谷胱甘肽(GSH)预处理可使A549细胞的凋亡率下降(P＜0.01).同时,紫草素处理可明显下调抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的表达(P＜0.01),NAC和GSH预处理亦能上调Bcl-2和Bcl-xL的表达(P＜0.01).结论 紫草素可明显抑制肺癌A549细胞的增殖,其作用机制与诱导A549细胞产生大量的ROS,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL表达,进而激活caspase依赖的凋亡途径有关.
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土荆皮酸对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 探讨土荆皮酸对肺癌细胞系A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 体外培养的A549细胞,用不同浓度的土荆皮酸(0、4、8、16、32 μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对A549细胞增殖的影响;土荆皮酸(0、4、8、16 μmol/L)处理A549细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,分光光度计检测Casepase-3相对活性,Western blot法检测PTEN、Akt、p-Akt的表达.结果 土荆皮酸能有效抑制A549细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性(P＜ 0.05);土荆皮酸作用A549细胞48 h后,细胞凋亡率从14.8％上升至37.7％,显著高于对照组(土荆皮酸0 μmol/L) (P＜ 0.05);流式细胞仪检测结果显示,土荆皮酸能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换;Casepase-3相对活性显著增加(P＜0.05);土荆皮酸可上调PTEN表达并抑制p-Akt的表达(P＜0.05).结论 土荆皮酸可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与上调PTEN并抑制Akt信号通路,继而阻滞细胞周期并激活线粒体凋亡途径相关.
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Bcl2-siRNA增加人肺腺癌细胞化疗敏感性的研究
目的 探讨bcl2-siRNA增加人肺腺癌细胞株A549对顺铂敏感性的作用.方法 在人肺腺癌细胞株A549细胞中转染bcl2-siRNA,48 h后加入不同浓度(0、0.5、1、2、3 μg/mL)新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48 h后,用CCK-8法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Realtime RT-PCR)检测A549细胞转染bcl2-siRNA后Bcl-2 mRNA的变化.Western Blot检测A549细胞转染bcl2-siRNA后Bcl-2蛋白的变化.结果 在A549细胞中转染bcl2-siRNA后,Bcl-2 mRNA的表达下降了93.2%(P = 0.037),Bcl-2蛋白表达也明显降低.同时,细胞对顺铂的敏感性明显增加69.8%(P = 0.024).结论 Bcl2-siRNA能降低A549细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,增加A549对顺铂的敏感性.
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探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制
目的:研究不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,并且观察对细胞中Bcl-2和Bad两种凋亡相关蛋白表达的影响.方法:体外培养A549细胞分别暴露于0、5、10、20、40 μmol/L的MG132,24 h后MTT法测定细胞存活率,流式细胞术(FCW)检测细胞的凋亡率,Western Blot方法测定A549细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况.结果:MTT法和流式细胞术检测结果显示,A549细胞的存活率和凋亡率与MG132呈浓度依赖性关系,MG132浓度越高细胞存活率越低,并且凋亡率越高.Western Blot方法测定结果显示A549细胞中Bcl-2的表达随着MG132浓度增高而逐渐减少,而Bad的表达无明显变化.结论:MG132可以诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,实现该作用的可能机制部分是通过降低Bcl-2蛋白的表达,而Bad在这一过程中似乎没有表现出明显的作用.
