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金松双黄酮对尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶的抑制作用
借助体外代谢孵育体系考察了金松双黄酮(sciadopitysin,SP)对12种人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGTs)的抑制作用,通过体外-体内外推(IV-IVE)预测体内药物-药物相互作用(DDI)的风险.以混合人肝微粒体(HLM)及重组表达的人UGTs作为酶源,选用4-甲基伞形酮(4-MU)、三氟拉嗪(TFP)、N-3-羧丙基-4-羟基-1,8-萘酰亚胺(NCHN)分别为UGTs酶的广谱探针底物、UGT1 A4和UGT1A1的特异性探针底物,评估金松双黄酮对12种人UGT酶的抑制作用.通过非线性拟合求得半数大抑制浓度IC50和抑制动力学常数Ki及抑制类型;并基于体外参数预测了金松双黄酮通过抑制UGT1A1引发的潜在DDI风险.体外抑制实验表明,金松双黄酮对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10有较强的抑制作用,当终浓度为10 μmol·L-1时,UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10的残余活性均小于30％.金松双黄酮对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10的半数大抑制浓度IC50为0.20～1.34 μmol·L-1,抑制动力学常数Ki为0.07～2.12 μmol·L-1.口服金松双黄酮240 mg·d-1可导致UGT1A1底物的AUC增加19％～147％.金松双黄酮可竞争性的抑制UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10催化的4-MU-O-葡糖醛酸化反应及UGT1A1催化的NCHN-O-葡糖醛酸化反应.金松双黄酮对UGT1A1的强抑制作用有可能减缓UGT1A1底物的代谢,进而引发DDI风险.上述研究提示金松双黄酮与临床药物联合应用时,应该特别注意其通过抑制UGT酶而引发的DDI.
关键词： 金松双黄酮 尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶 抑制 药物相互作用 -
金松双黄酮联用紫杉醇对A549细胞凋亡的影响
目的 探讨金松双黄酮联用紫杉醇对 A549 细胞 caspase -3 蛋白及Bcl-2、Bax mRNA 表达的作用. 方法 实验分为对照组、紫杉醇组(浓度1 μg? L-1)、金松双黄酮+紫杉醇组(浓度分别为0.5,1.0 μg? L-1),在药物作用72 h后,用相差显微镜观察A549细胞形态学变化;逆转录-聚合酶链反应检测细胞中Bcl-2、Bax mRNA 水平;蛋白免疫印迹法检测caspase -3 蛋白的表达. 结果 与紫杉醇组相比,联用金松双黄酮组较多细胞出现细胞核浓缩、碎裂的凋亡特征,且caspase-3蛋白及Bax mRNA表达上调而Bcl-2mRNA表达下降. 结论 联用金松双黄酮可增强紫杉醇对A549 细胞凋亡作用,可能与调节Bc1-2、Bax及caspase-3的表达水平有关.
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紫杉中紫杉烷和双黄酮类成分的薄层色谱鉴别
目的:建立紫杉药材中紫杉烷类和双黄酮类成分的薄层色谱鉴别法.方法:以紫杉宁为对照品,石油醚-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(8:2:2:1)为展开剂系统,用硅胶G板鉴别紫杉烷类成分;以金松双黄酮和银杏双黄酮为对照品,石油醚-乙酸乙酯-甲醇(4:1:1)为展开剂系统,用聚酰胺薄膜鉴别双黄酮类成分.结果:本方法斑点清晰,重复性好,并可将紫杉区别于一些松、杉、柏类植物的枝叶.结论:本方法简便,快速,可用于紫杉药材的质量控制.
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金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长及凋亡的影响
目的:研究金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长及凋亡的影响及其可能的机制.方法:取对数生长的肺癌A549细胞,分为对照组、紫杉醇组、金松双黄酮组、金松双黄酮联合紫杉醇组.采用MTT法研究金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测A549细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:金松双黄酮联合紫杉醇对肺癌A549细胞的生长抑制率高达64.81％,显著强于单纯紫杉醇作用组(P＜0.05),且两药合用可显著升高肺癌A549细胞的凋亡率(P＜0.01),并抑制凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白的表达,上调Bax的表达.结论:金松双黄酮联合紫杉醇能够增强紫杉醇对肺癌A549细胞生长的抑制作用,促进细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡基因Bc1-2、Bax的蛋白表达有关.
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从银杏叶中制备金松双黄酮对照品的研究
目的:建立从银杏叶中制备金松双黄酮对照品的方法.方法:结合硅胶柱色谱和重结晶方法对银杏叶乙醇提取物进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定,利用TLC和HPLC进行纯度验证.结果:从银杏叶中制备得到的金松双黄酮对照品,其纯度质量分数为98.5%.结论:建立的制备方法简单,对照品质量分数高,可作为银杏叶药效物质基础研究和银杏叶药材质量控制的对照品.
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湖北钟祥南方红豆杉中5种黄酮全年含量变化分析
目的:建立南方红豆杉枝叶中芦丁、槲皮素、异银杏双黄酮、穗花杉双黄酮、金松双黄酮的含量测定方法,并测定湖北钟祥地区南方红豆杉中5黄酮全年含量变化,考察其相关性.方法:采用ZORBAX Eclipse plus C18 (4.6 mm×250 mm,5 μrn)色谱柱,甲醇和水梯度洗脱,检测波长为330 nm,柱温为30℃,流速为1.00 mL·min-1,进样量为10μL,理论塔板数不低于2 500.结果:5种黄酮年平均含量从高到低依次为芦丁、异银杏双黄酮、金松双黄酮、槲皮素和穗花杉双黄酮;5种黄酮含量随季节性变化明显,含量高的是在1-3月,含量低的是6月;芦丁、异银杏双黄酮、金松双黄酮含量相互间有影响,槲皮素、穗花杉双黄酮含量与其他3种黄酮含量相互不影响.结论:该测定方法简便、准确、重复性好,可用于南方红豆杉枝叶中黄酮含量的定量测定.
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曼地亚红豆杉双黄酮结构表征和Taxol定量
目的:对曼地亚红豆杉黄酮类成分进行研究,对其不同药用部位紫杉醇含量进行测定.方法:采用反复硅胶柱层析进行分离纯化,根据理化性质、光谱特征鉴定其结构.采用HPLC法测定曼地亚红豆杉枝叶、主根、须根三种药用部位中紫杉醇的含量,色谱柱为C18ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(3:1),流速0.8 ml/min,检测波长228 nm.结果:从曼地亚红豆杉中分离得到三个双黄酮类化合物并进行结构鉴定为金松双黄酮(Ⅰ)、银杏黄素(Ⅱ)、7,7",4'-Tri-O-Methylamentoflavone(Ⅲ).曼地亚红豆杉枝叶、主根、须根中紫杉醇含量依次为:0.0308、0.02191、0.01983 mg/g.结论:化合物Ⅰ～Ⅲ为首次从该种植物中得到;曼地亚红豆杉中除树皮外的药用部位枝叶的含量高,主根次之,须根含量低.
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HPLC法测定云南红豆杉枝叶中金松双黄酮的含量
目的:建立以高效液相色谱法测定云南红豆杉枝叶中金松双黄酮含量的方法.方法:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm).流动相为甲醇-水(80:20),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为272 nm,柱温为40℃.结果:金松双黄酮的进样量在0.88～4.40μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为95.40%,RSD=3.5%(n=6).结论:本方法准确、可靠、稳定,可用于云南红豆杉的质量控制.
