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曼地亚红豆杉枝条中紫杉醇的提取纯化研究
目的:探索曼地亚红豆杉枝条中紫杉醇的提取纯化工艺.方法:提取阶段,对紫杉醇的溶剂提取、超声浸提和超临界CO_2萃取进行对比试验;纯化阶段,硅胶柱色谱及制备型薄层色谱处理提取物,正己烷沉淀结晶.HPLC检测试样中紫杉醇的含量.结果:超声提取紫杉醇的回收率高,超临界CO_2萃取紫杉醇的提取选择性好;硅胶柱色谱适宜的过柱次数为2次,流动相二氯甲烷.三氯甲烷一甲醇(53:44:3),薄层色谱展开剂为三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(88:7:5),提取所得浸膏经过分离纯化终得到淡黄色晶体.结论:产物中紫杉醇质量分数为87.43%,回收率89.57%,紫杉醇得到有效富集.
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曼地亚红豆杉IPI基因克隆与功能鉴定
紫杉醇(taxol)是从裸子植物红豆杉中提取的具有抗癌作用的天然药物.异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IPI)是紫杉醇生物合成途径上催化IPP和二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)之间进行可逆转化的异构酶.本研究从曼地亚红豆杉中首次克隆了编码IPI蛋白的基因序列(GenBank登录号为KP970677),并对其进行详细的生物信息学分析.研究表明,本研究所获得的IPI基因cDNA全长1 232 bp,编码233个氨基酸,包含Nudix保守结构域,与其他物种的IPI具有高度同源性;系统进化分析表明,植物IPI被分为被子植物和裸子植物两大类群,本文所研究的红豆杉IPI属于裸子植物IPI类群,该结果与红豆杉属于裸子植物这一事实相符;Southern杂交结果表明:TmIPI是紫杉醇等萜类生物合成途径IPI家族成员.功能验证结果表明:在大肠杆菌中过量表达IPI推动代谢流向下游流动,促进β-胡萝卜素的生物合成,说明IPI在紫杉醇等萜类相关产物生物合成中是一个重要的调节因子.
关键词： 曼地亚红豆杉 紫杉醇 异戊烯基焦磷酸异构酶 功能验证 -
曼地亚红豆杉中一个新3,11-环紫杉烷型二萜
研究曼地亚红豆杉针叶的化学成分,应用硅胶、Sephadex LH-20、MCI和反相HPLC等多种色谱手段进行分离和纯化,通过1D,2D NMR和MS方法确定化合物的结构.分离得到一个新化合物,命名为1β,2α,9α,10β-tetrahydroxy-5α-cinnamoyloxy-3,11-cyclotaxa-4(20)-en-13-one (1).另外鉴定了6个已知紫杉烷型二萜类化合物,分别为2α,7β,9α,10β,13α-pentaacetoxytaxa-4(20),11-dien-5α-ol (2),2-deacetoxy-5-decinnamoyltaxinine J (3),taxuspine F (4),taxuspinanane K (5),taxchin A(6),baccatin Ⅳ (7),其中化合物2,5,6,7为首次在曼地亚红豆杉中得到.
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曼地亚红豆杉枝叶化学成分研究
目的 研究曼地亚红豆杉Taxus media枝叶的化学成分.方法 通过硅胶、凝胶Sephadex LH-20、ODS等色谱方法分离纯化,运用1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等多种波谱技术鉴定化合物结构.结果 从曼地亚红豆杉乙醇提取物的石油醚、醋酸乙酯萃取部位分离鉴定出18个化合物,包括8个紫杉烷二萜类化合物:taxinine-11,12-oxide(1)、9α,10β-二乙酰基-2α-羟基-5α-桂皮酰基-3,11-环化紫杉烷-4(20)-烯-13-酮(2)、2-去乙酰氧基紫杉宁E(3)、7,9-二去乙酰基紫杉宁B(4)、紫杉吉酚(5)、9-去乙酰基紫杉宁A(6)、9-去乙酰基紫杉宁(7)、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ (8);5个黄酮类化合物:山柰酚(9)、香橙素(10)、芹菜素(11)、金松双黄酮(12)、银杏双黄酮(13);3个酚酸类化合物:对羟基苯甲醛(14)、对羟基苯甲酸(15)、邻苯二酚(16);以及β-谷甾醇(17)、正二十烷-10-醇(18).结论 化合物18为首次从红豆杉科植物中发现,化合物1～4、6、7、10、14～16为首次从曼地亚红豆杉中分离得到.
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不同产地及生长年限曼地亚红豆杉中10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇量的比较分析
目的 分析和比较5个不同产地、不同生长年限曼地亚红豆杉中3种紫杉烷类活性成分量的差异.方法 利用甲醇和三氯甲烷混合液超声浸提后再用甲醇溶解得到样品溶液;通过高效液相色谱法测定和比较10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB Ⅲ)、三尖杉宁碱和紫杉醇量及3者总量.结果 不同产地、不同生长年限的曼地亚红豆杉中3种紫杉烷类及其总量间存在极显著性差异(P＜0.01);10-DAB Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇和3种紫杉烷类总量相对较高的3个产地及生长年限分别依次为HK4＞ SM3＞ SM2、ZL3＞ HK4＞ ZL4、ZL3＞ SM2＞ HK4、HK4＞ ZL3＞ ZL6.除10-DAB Ⅲ与三尖杉宁碱量间不存在显著的相关性外,其余各成分间均存在极显著的正相关关系(P＜0.01);不同产地及生长年限间紫杉醇与3种紫杉烷类总量间呈现出同升同降的趋势;聚类分析表明福建福州产区紫杉醇量具有一定的特殊性,而河南开封3种紫杉烷类总量有别于其他产区.结论 产地和生长年限对曼地亚红豆杉中3种紫杉烷类量的变化具有明显的影响,可以通过对生物合成途径进行调控,继而达到获得更多紫杉醇原料药的目的.
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曼地亚红豆杉研究进展
曼地亚红豆杉Taxus media是东北红豆杉T.cuspidata和欧洲红豆杉T.baccata的天然杂交种.其枝叶中的紫杉醇量较高,是利用红豆杉树皮提取抗癌药物紫杉醇的佳替代原料.综述了曼地亚红豆杉的生物学特性及品系、生理生态、繁殖技术、细胞培养、紫杉醇生物合成相关酶基因的克隆及表达和分离纯化工艺等方面的研究进展.
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高速逆流色谱法纯化曼地亚红豆杉枝叶提取物中紫杉醇
目的 研究从紫杉醇浸膏中分离紫杉醇的方法.方法 利用高速逆流色谱技术,采用正己烷-酯酸乙酯-甲醇-水(4:5:3.5 : 5)为溶剂体系.结果 经过高速逆流色谱一次纯化,紫杉醇的质量分数由5.1%上升到85.5%,回收率达到98.6%.结论 为制备高纯度紫杉醇提供了一条新途径.
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曼地亚红豆杉的引种栽培和速生刺激剂的研究
紫杉醇(taxol)是用于治疗转移性卵巢癌、乳腺癌的新型抗癌药,自从1992年12月美国批准该药上市以来,许多国家已广泛应用此药治疗卵巢癌、乳腺癌及肺癌等癌症,并取得较好的疗效.
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曼地亚红豆杉针叶中紫杉烷二萜类化学成分
目的 研究栽培于我国辽宁本溪的曼地亚红豆杉(Taxus media'Hicksii')针叶中紫杉烷二萜类化学成分.方法 采用大孔树脂、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色谱及MDS柱色谱等方法进行分离纯化,通过NMR分析鉴定化学结构.结果 从曼地亚红豆杉针叶的乙醇提取物中得到6个已知化合物,分别鉴定为10去乙酰基-10β-羟基丁酸酯基紫杉醇A(1)、紫杉宁B(2)、5α-桂皮酰基红豆杉素(3)、紫杉宁A(4)、5α-去桂皮酰基紫杉欧吉酚(5)和10-去乙酰基巴卡亭(6).结论 化合物1、2、3,5为首次从曼地亚红豆杉中分离得到.
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栽培曼地亚红豆杉针叶化学成分的分离与鉴定
目的 对栽培于辽宁本溪的曼地亚红豆杉(Taxus media 'Hicksii')针叶的化学成分进行研究.方法 曼地亚红豆杉针叶的乙醇提取物经大孔树脂、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色谱进行分离纯化,依据1H-NMR、13C-NMR、ESI-Ms、HRESI-MS鉴定其结构.结果 从曼地亚红豆杉针叶的乙醇提取物中分离纯化得到6个化合物,分别鉴定为二萜类化合物:5-cinnamoy1-9-acetyltaxi-cin-Ⅰ(1)、5-cinnamoyl-10-acetyltaxicin-Ⅰ(2)、5-去桂皮酰基紫杉宁J(3)、紫杉醇(4);黄酮类化合物:柚皮素(5);脂肪酸类:十六烷酸(6).结论 化合物1、2、5和6为首次从曼地亚红豆杉中分离得到.
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海南和四川不同生长年限曼地亚红豆杉3种紫杉烷类活性成分的比较研究
目的:分析和比较海南和四川不同生长年限曼地亚红豆杉3种紫杉烷类活性成分的的含量差异.方法:利用甲醇和CHC13混合液超声浸提后再用甲醇溶解得到相关成分;通过高效液相色谱法对10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇含量进行测定和比较.结果:1)不同生长年限,海南栽培曼地亚红豆杉3年生枝条中10-DABⅢ和紫杉醇含量均高,7年生枝条中三尖杉宁碱含量高;四川栽培曼地亚红豆杉4年生枝条中10-DABⅢ和三尖杉宁碱含量均高,紫杉醇含量在不同生长年限间不存在显著性差异(P＞0.05).2)相同生长年限,四川栽培曼地亚红豆杉10-DABⅢ含量普遍高于海南栽培曼地亚红豆杉,三尖杉宁碱含量两个产地间有高有低,海南栽培3年生曼地亚红豆杉紫杉醇含量在所有年限间高.结论:四川栽培曼地亚红豆杉10-DABⅢ含量高于海南栽培曼地亚红豆杉,可以优先作为10-DABⅢ提取的材料来源产地;海南栽培4年生和3年生曼地亚红豆杉分别作为三尖杉宁碱和紫杉醇粗提原料来源更优.
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曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇含量动态变化分析
目的 分析曼地亚红豆杉Taxus media枝叶中紫杉醇含有量的动态变化.方法 HPLC法测定不同枝龄(1年生和2年生)、月份(1 ～12月)枝叶中紫杉醇含有量,分析其动态变化情况.结果 紫杉醇含有量在4月1年生枝叶中高(0.052％),并随月份增加而逐渐下降,而在各月份2年生枝叶中较稳定(0.018％～0.023％).到8月后,1、2年生枝叶中该成分含有量相当.结论 考虑到枝条生物量及紫杉醇含有量,曼地亚红豆杉佳采集时间和采摘部位为6月份1年生枝条.
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不同生长调节剂对海南曼地亚红豆杉扦插育苗的影响
目的 探讨不同生长调节剂对海南曼地亚红豆杉扦插育苗的影响.方法 以清水处理为对照,采用不同生长调节剂和自行设计研制的红豆杉专用生根剂:ABT1、IBA、NAA、NAA∶IBA=9∶1、NAA∶IBA∶6-BA=10∶10∶1、NAA:2,4-D∶6-BA=10∶3∶1,浓度为500 mg/kg,分别对海南曼地亚红豆杉(Taxus madia Rehd)扦插苗进行处理,从而研究不同激素处理对海南曼地亚红豆杉成活情况、生长情况以及生物量的影响.结果 用ABT1处理的曼地亚红豆杉扦插苗生根率、生物量高;IBA处理的扦插苗成活率高.而混合生长调节剂处理的曼地亚红豆杉扦插苗,其生根率、成活率与生物量均低.结论 为保证海南曼地亚红豆杉扦插苗较高的生根率和生物量,可选用ABT1作为育苗生长调节剂,为保证较高的成活率,应选用IBA作为育苗生长调节剂.
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曼地亚红豆杉与南方红豆杉不同部位中紫杉醇含量比较研究
目的：：比较曼地亚红豆杉和南方红豆杉不同部位抗癌活性成分紫杉醇的含量，为红豆杉资源开发利用提供依据。方法：利用丙酮和乙酸乙酯混合溶剂提取有效成分，用中性Al2 O3吸附柱色谱法粗提紫杉醇，用高效液相色谱法测定紫杉醇含量。结果：曼地亚红豆杉各部位紫杉醇含量均高于南方红豆杉，根皮中紫杉醇含量高，达0.0439%，约是南方红豆杉茎皮中紫杉醇含量的88倍。结论：曼地亚红豆杉根皮、茎皮、叶、幼枝、果实中均含有紫杉醇，其含量高于南方红豆杉茎皮中紫杉醇含量，可以对曼地亚红豆杉进行综合开发利用。
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HPLC法测定曼地亚红豆杉中紫杉醇的含量
目的:建立曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇含量的HPLC测定方法.方法:采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),以甲醇-乙腈-水(34∶32∶34)为流动相,流速为1.0 mL*min-1,检测波长227 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL.结果:紫杉醇质量浓度在4.2～42mg*L-1内线性关系良好(r=0.9996);平均加样回收率为98.6%,RSD为1.2%(n=6);精密度RSD为0.7%(n=6).结论:该方法简便、准确、重现性好,为曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的含量测定提供了一种可靠的检测方法.
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曼地亚红豆杉双黄酮结构表征和Taxol定量
目的:对曼地亚红豆杉黄酮类成分进行研究,对其不同药用部位紫杉醇含量进行测定.方法:采用反复硅胶柱层析进行分离纯化,根据理化性质、光谱特征鉴定其结构.采用HPLC法测定曼地亚红豆杉枝叶、主根、须根三种药用部位中紫杉醇的含量,色谱柱为C18ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(3:1),流速0.8 ml/min,检测波长228 nm.结果:从曼地亚红豆杉中分离得到三个双黄酮类化合物并进行结构鉴定为金松双黄酮(Ⅰ)、银杏黄素(Ⅱ)、7,7",4'-Tri-O-Methylamentoflavone(Ⅲ).曼地亚红豆杉枝叶、主根、须根中紫杉醇含量依次为:0.0308、0.02191、0.01983 mg/g.结论:化合物Ⅰ～Ⅲ为首次从该种植物中得到;曼地亚红豆杉中除树皮外的药用部位枝叶的含量高,主根次之,须根含量低.
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HPLC测定曼地亚红豆杉中的紫杉醇
目的 采用RP-HPLC法测定曼地亚红豆杉中紫杉醇的含量.方法 采用Diamond C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(52:48),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长227 mn,柱温30 ℃.结果 曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的平均含量达0.0237%,该检测方法可将紫杉醇与其类似物分离.结论 曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的含量较高,该检测方法稳定,可用于紫杉醇的快速定量测定.
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三种栽培红豆杉的生药学研究
目的:建立3种栽培红豆杉(云南红豆杉南方红豆杉曼地亚红豆杉)的生药鉴别方法,为其深入研究提供实验数据.方法:采用原植物形态鉴别、药材性状检索、组织横切、粉末显微观察及薄层层析方法对其进行生药初步研究.结果:其叶横切面特征三者叶表皮细胞的形状、大小和排列均不一样,叶中脉形状不同,所含草酸钙砂晶及色素物多少有差异.枝横切面特征中韧皮部细胞形状和排列松紧不一,木射线细胞中内含物仅云南红豆杉有.粉末特征中三者所含石细胞、草酸钙砂晶、树脂道的多少、大小和形状均有差异.薄层色谱图中,斑点颜色和位置有不同之处,可作为鉴别依据.结论:通过对3种红豆杉的生药学研究表明,3种栽培红豆杉在原植物形态、药材性状及显微特征中均有一定的差异,将为这3种红豆杉药材的鉴别及进一步研究提供资料.
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喜马拉雅红豆杉与曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱含量比较
目的：测定并比较维吾尔药材喜马拉雅红豆杉与人工栽培品种曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量。方法采用RP‐HPLC色谱法梯度洗脱，色谱柱为 Century SIL C18‐EPS 柱（250 mm ×4．6 mm ，5μm ）；流动相为乙腈‐水；流速为1．0 mL · min－1；检测波长为227 nm ；柱温为30℃。结果紫杉醇回归方程：Y＝2．050975×107 X＋5531．887，线性范围为0．042～1．69μg（r＝0．9999），平均回收率为98．0％，RSD＝0．98％（n＝6）；三尖杉宁碱回归方程Y＝1．806535×107 X＋3046．378，线性范围为0．040～1．6μg（r＝0．9999），平均回收率为96．6％，RSD＝2．97％（n＝6），喜马拉雅红豆杉叶中三尖杉宁碱平均含量高于茎中含量，曼地亚红豆杉相反；两者叶中紫杉醇含量高于茎中含量，而曼地亚红豆杉茎叶中紫杉醇含量并不低于喜马拉雅红豆杉。结论该方法简便、准确、适用于红豆杉药材的质量评价。
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南方红豆杉与引种德国曼地亚红豆杉茎、叶中紫杉醇和10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的比较
目的：建立HPLC法同时测定并比较南方红豆杉与德国引种曼地亚红豆杉茎、叶中紫杉醇和10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量。方法采用CosmasilTMC18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；以乙腈-水（50∶50）为流动相；流速为1．0mL·min-1；检测波长为227nm；柱温：30℃。结果紫杉醇、10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的线性范围分别为2．675～42．8μg·mL-1（r＝0．9993）和3．875～62μg·mL-1（r＝0．9996），平均加样回收率（n＝9）分别为98．1％和101．6％，RSD分别为2．7％和2．3％。南方红豆杉与德国引种曼地亚红豆杉的茎、叶中紫杉醇含量分别为0．12和0．10mg·g-1，10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量分别为0．12和0．14mg·g-1。结论引种红豆杉与南方红豆杉在同一地区的生态环境下生长，茎、叶中所含紫杉醇和10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量有显著性差异（P＜0．05）。所建立方法准确，简便，适用于红豆杉的质量评价，为不同栽培品种的选择提供参考。
关键词： 紫杉醇 10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ 南方红豆杉 曼地亚红豆杉 含量
