首页 > 文献资料
-
不同表面修饰的氧化铁纳米颗粒对A549细胞的毒性及DNA损伤
目的:比较不同表面修饰的氧化铁纳米颗粒(IONPs)对A549细胞的细胞毒性、染色体和DNA损伤及其作用机制的差异.方法:比较相同粒径范围(约5 nm)的胺基表面修饰的纳米氧化铁颗粒(Amine-IONP)和聚乙二醇表面修饰的纳米氧化铁颗粒(PEG-IONP)对A549细胞存活率和细胞周期的影响;使用高内涵法检测细胞经IONPs处理后的胞内活性氧簇(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和内质网(ER)状态的变化;采用体外胞质分裂法微核试验和彗星电泳评价IONPs对染色体和DNA完整性的影响.结果:两种纳米氧化铁颗粒处理48 h对A549细胞生长抑制率均小于20％.相同浓度条件下,PEG-IONP主要表现为对A549细胞G0/G1期阻滞,自20 μg/mL起即明显减少S期细胞比率(P＜0.01),320 μg/mL PEG-IONP处理24 h后可诱导p21与p53表达水平显著升高(P＜0.05).给药48 h时,Amine-IONP作用后细胞ROS、MMP及ER水平显著性改变的起始浓度分别为20、20和80 μg/mL,而PEG-IONP作用后产生显著性改变的起始浓度分别为40、40和160 μg/mL.此外,与PEG-IONP比较,Amine-IONP可在较低浓度条件下诱导微核和彗星拖尾形成(Amine-IONP的起始浓度为20和80 μg/mL;而PEG-IONP则为40和160 μg/mL).经氧自由基清除剂乙酰半胱氨酸和叔丁基对羟基茴香醚预处理后,两者导致的胞内ROS含量和尾部DNA百分率均明显降低(P＜0.05).结论:带正电荷的Amine-IONP更易于诱导A549细胞氧化应激及与之有关的DNA损伤;相比之下,PEG-IONP的细胞毒性和遗传毒性较弱,但除氧化损伤外也可通过抑制细胞周期干扰细胞增殖,作为肿瘤诊断试剂具有一定优势.
-
纳米银对人肺癌和肝癌细胞毒性的差异
目的:研究纳米银对人肺癌(A549)和人肝癌(HepG2)细胞系增殖和凋亡的影响,并探讨纳米银对两种细胞系毒效应的差异及其机制.方法:用20、40、80、160、320、640 μg/mL的纳米银分别染毒A549和HepG2细胞,染毒时长均为24和48 h,以细胞培养液为对照,采用MTTr法检测各组细胞的存活率;谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测细胞内GSH含量和SOD活力.除上述各染毒组,两种细胞均另设置N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后160 μg/mL纳米银染毒组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:与对照组比较,染毒24和48 h后,≥40 μg/mL剂量组A549细胞和所有剂量组HepG2细胞存活率均降低(P＜o.05或P＜0.01);与相同染毒条件下的A549细胞比较,40～640 μg/mL剂量组HepG2细胞的存活率较高(P＜0.05或P＜0.01).SOD活力和GSH含量检测发现,纳米银染毒A549细胞24 h后,40 μg/mL剂量组SOD活力与对照组比较显著降低(P＜0.05),而GSH含量上升(P＜0.05);染毒48 h后,SOD活力和GSH含量在40～160 μg/mL剂量组下降,其中80 μg/mL剂量组GSH含量与对照组间的差异显著(P＜0.05).纳米银染毒HepG2细胞24、48 h后,SOD活力和GSH含量都表现为上升,其中40、80 μg/mL组SOD活力和20 μg/mL组GSH含量与对照组间的差异显著(P＜0.05).细胞凋亡率检测发现,染毒24 h时,各剂量组A549细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而各剂量组HepG2细胞凋亡率均显著增加(P＜0.05或P＜0.01);染毒48 h时,≥40 μg/mL剂量组A549细胞和160 μg/mL剂量组HepG2细胞凋亡率均高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).使用NAC预处理细胞后,160 μg/mL剂量组两种细胞系凋亡率均显著下降(P＜0.01).结论:纳米银可以引起A549和HepG2细胞表现不同程度的增殖抑制和凋亡,而细胞内不同的SOD和GSH改变可能是纳米银引起两种细胞系不同毒作用的原因之一.
-
去甲斑蝥素对人肺腺癌A549细胞的抑制作用
目的：研究去甲斑蝥素(NCTD)对人肺腺癌A549细胞的细胞毒作用，并初步探讨其作用机制。方法：采用四甲基噻唑蓝(MTT)试验检测0~240μmol/L NCTD在0~72 h内对A549细胞活力的影响；NCTD处理A549细胞24 h后换正常培养基，用MTT方法检测细胞恢复与增殖的情况；采用倒置显微镜观察A549细胞经40、50和60μmol/L NCTD处理0~72 h后细胞形态学的改变；通过流式细胞术检测40~60μmol/L NCTD对细胞周期和凋亡的影响。结果：30~240μmol/L NCTD对A549细胞有明显的生长抑制作用(P<0.05)；在30~120μmol/L浓度范围内，NCTD对A549细胞的生长抑制作用在NCTD撤除24 h后逐渐消失，30~60μmol/L NCTD作用A549细胞24 h后，A549细胞的活力在恢复培养的第5天完全恢复；40、50和60μmol/L NCTD作用A549细胞0~72 h，细胞表现为明显的G2~M期阻滞，与对照组相比，NCTD诱导A549细胞凋亡作用不明显(P>0.05)。结论：40~60μmol/L NCTD主要通过诱导A549细胞G2~M期阻滞而抑制细胞生长。
-
纳米氧化锌与常规氧化锌对A549细胞的毒性与DNA损伤的比较研究
目的:比较纳米氧化锌(Nano-ZnO)和常规氧化锌(Micro-ZnO)对人肺腺癌A549细胞的毒性及DNA损伤作用.方法:采用不同浓度(25、50、100 μ/ml)的纳米ZnO(30 nm)和常规ZnO(≤1 μm)染毒体外培养的A549细胞,实验同时设对照组(DMEM培养液).分别于染毒后6、12、24、48 h,观察细胞形态及生长情况,采用MTT法和单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测细胞毒性及对DNA的损伤作用.结果:纳米 ZnO和常规ZnO对A549细胞的半数致死浓度(IC50)分别为53.91和190.15 μg/ml;纳米ZnO在50 μg/ml剂量时对A549细胞就已出现明显的生长抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖效应关系;而常规ZnO在100 μg/ml剂量时才出现细胞生长的抑制.纳米ZnO与常规ZnO的剂量-效应曲线和时间-效应曲线的斜率比较差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,纳米ZnO能够导致A549细胞产生DNA损伤;常规ZnO在相同受试剂量下未观察到DNA损伤.结论:纳米ZnO与常规ZnO均对体外A549细胞产生细胞毒性,但纳米ZnO产生毒性的剂量低、出现时间早,并产生了常规ZnO未观察到的遗传毒性.
-
瘦素激活ERK1/2信号通路诱导肺癌细胞增殖
背景与目的:研究瘦素(leptin)及其瘦素受体(OB-Rb)在肺癌和癌旁组织中的表达情况,并探讨瘦素介导的ERK1/2通路在促进人肺癌A549细胞增殖过程中的作用.材料与方法:采用免疫组织化学法检测24例人肺癌和癌旁组织中瘦素及其OB-Rb的表达情况,同时采用免疫荧光染色和RT-PCR法检测A549中OB-Rb的表达,并用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和免疫印迹(Western blot)法检测瘦素对AS49细胞促增殖效应以及ERK1/2是否介导了该作用.结果:人肺癌组织中瘦素及其OB-Bb阳性表达率(分别为83.37%,66.7%)明显高于癌旁肺组织(分别为33.3%,29.2%)(P＜0.01);A549细胞中存在OB-Rb的表达,且瘦素能明显促进A549细胞增殖,经100 ng/ml瘦素处理24 h后,其增殖效应显著,并且100 ng/ml瘦素处理20 min后,ERK1/2的磷酸化显著增加.应用特异性的ERK激酶抑制剂PD98059抑制ERK1/2的激活后,瘦素的促A549增殖作用明显减弱.结论:瘦素及其受体在肺癌组织中高表达并通过激活ERK1/2信号通路促进A549细胞的增殖,表明瘦素可能通过刺激ERK1/2信号通路的持续激活而促进肺癌的发生发展.
-
X射Bmi-1肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响
目的:研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响.方法:用不同剂量(0、2、4、6Gy)的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,2、4、6GyX射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);(2 Gy 48 h组除外),2 Gy组照射后6h、4 Gy组12 h、6Gy组24h升高显著(P＜0.05).照射后48 h内蛋白表达升高(4 Gy除外),48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平.各时间点(除4 Gy 48 h和72 h外)的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低.
-
Survivin基因沉默抑制肺腺癌A549细胞增殖并增强其对吉非替尼的敏感性
目的:研究Survivin基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖和对化疗药物吉非替尼敏感性的影响.方法:设计合成survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染入A549细胞.采用RT-PCR和Western blot检测survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期.通过MTT法和细胞克隆形成试验法察survivin基因沉默后A549细胞对吉非替尼的敏感性.结果:Surivin基因沉默48h后,A549细胞的survivin基因和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;差异有统计学意义(P＜0.05).survivin基因沉默组细胞对吉非替尼的敏感性显著性增强.结论:特异性siRNA介导的Survivin使细胞A549增殖减少,增强其对易瑞沙的敏感性.
-
谷氨酰胺对A549细胞内质网应激反应的保护作用
目的 探讨谷氨酰胺对内质网应激反应的细胞保护作用.方法 利用衣霉素制备细胞内质网应激模型:培养人肺腺癌细胞株A549细胞,用MTT法检测不同浓度(0.1 ug/ml,1 ug/ml,10ug/ml)衣霉素对A549细胞作用不同时间(6,12,24,48h)的细胞增值抑制率以选择衣霉素作用的合适时间及浓度.结果 衣霉素处理细胞A549浓度为1ug/ml,作用时间为12小时时细胞增殖抑制率为51.3％,接近50％,故选择衣霉素作用浓度为1 ug/ml,作用时间为12h.结论 谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞有保护作用.
-
夏枯草提取物对肺腺癌细胞A549蛋白质组的影响
目的 研究夏枯草提取物对肺腺癌细胞A549蛋白质组的影响.方法 选择A549细胞与利用300ug/ml夏枯草提取物处理的A549细胞总蛋白,严格按照双向电泳技术进行分离操作,通过银染并扫描后获得蛋白质组图谱,分析其中具有差异的蛋白质组,选择2倍以上差异的蛋白质作为差异蛋白进行质谱评价,后由Western印迹方式进行验证.结果 夏枯草提取物A549细胞中微丝交联蛋白亚型2、1,4,5-三磷酸肌醇受体相互作用样前体蛋白、丝氨酸-苏氨酸激酶相关受体蛋白、MED12L蛋白以及细胞周期蛋白B3表达量较高;而M2型丙酮酸激酶、热休克蛋白β1、无机焦磷酸酶、GDP分离抑制剂以及异源二聚体A链表达量较低.结论 夏枯草提取物均具有一定抗肺腺癌效果,其机制与细胞周期、防止癌细胞繁殖及转移密切相关.
-
夏枯草提取物对肺腺癌细胞A549蛋白质组的影响
目的 研究夏枯草提取物对肺腺癌细胞A549蛋白质组的影响.方法 选择A549细胞与利用300ug/ml夏枯草提取物处理的A549细胞总蛋白,严格按照双向电泳技术进行分离操作,通过银染并扫描后获得蛋白质组图谱,分析其中具有差异的蛋白质组,选择2倍以上差异的蛋白质作为差异蛋白进行质谱评价,后由Western印迹方式进行验证.结果 夏枯草提取物A549细胞中微丝交联蛋白亚型2、1,4,5-三磷酸肌醇受体相互作用样前体蛋白、丝氨酸-苏氨酸激酶相关受体蛋白、MED12L蛋白以及细胞周期蛋白B3表达量较高;而M2型丙酮酸激酶、热休克蛋白β1、无机焦磷酸酶、GDP分离抑制剂以及异源二聚体A链表达量较低.结论 夏枯草提取物均具有一定抗肺腺癌效果,其机制与细胞周期、防止癌细胞繁殖及转移密切相关.
