首页 > 文献资料
-
左旋门冬酰胺酶杀伤 MOLT-4细胞的机制研究
目的:以左旋冬酰胺酶诱导 MOLT-4 T淋巴细胞白血病细胞发生氨基酸反应为模式,观察左旋门冬酰胺酶对 MOLT-4 细胞 CHOP,ASNS,Bax以及 Bcl2基因表达的影响,探讨可能存在的凋亡机制.方法:左旋门冬酰胺酶作用 MOLT-4细胞,于不同 时间点搜集细胞样品,并提取 RNA,相对定量 PCR法检测 CHOP,ASNS,Bcl2,Bax mRNA相对表达水平;台盼蓝拒染法检测细胞存 活率.结果:在左旋门冬酰胺酶用药后的 8 h和 18 h CHOP与 ASNS mRNA出现两次表达高峰,18 h后 CHOP mRNA水平维持在较 高水平,ASNS mRNA开始逐渐下降,Bax/Bcl2的比值也于 18 h后显著升高;细胞存活率于 24 h后下降明显,细胞存活数在 0～12 h 缓慢增加,随后开始下降,24 h开始下降为显著.结论:左旋门冬酰胺酶杀伤 MOLT-4细胞可能存在下列机制:CHOP通过上调 Bax/Bcl2比值激活线粒体凋亡途径;CHOP通过抑制抗凋亡基因 ASNS的表达杀伤细胞.
-
谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响
[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1 mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1 mg/L和4 mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1 mg/L和8 mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1 mg/L和12 mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12 h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P＜0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P＞0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P＜0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用.
-
抗肿瘤药物作用的新靶点——CHOP/GADD153凋亡通路
CHOP/GADD153是内质网应激反应特异的转录因子,参与各种细胞活动特别是能量代谢、增殖、分化、凋亡的调节.CHOP在正常情况下表达很低,在内质网应激反应时表达显著升高.CHOP介导的凋亡通路是内质网应激相关凋亡通路中的重要途径.本文综述了CHOP/GADD153介导的细胞凋亡与肿瘤研究的新进展,对于肿瘤的生物治疗具有一定的参考价值.
关键词： CHOP/GADD153 凋亡 肿瘤 -
内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在胎膜早破中的表达及其意义
目的 研究内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在胎膜早破中的表达及其意义.方法 选择胎膜早破患者40例(早破组)及相应孕周择期剖官产孕妇40例(对照组),采用RT-PCR技术和Western blot法检测两组孕妇胎膜组织中CHOP/GADD153的mRNA与蛋白表达.结果 早破组胎膜组织中CHOP/GADD153的mRNA[(8.016±0.016)vs.(1.716±0.251)]与蛋白表达水平[(15.210±0.217)vs.(2.710±0.019)]均显著高于对照组(P＜0.05).结论 CHOP/GADD153表达的增高与胎膜早破的发病相关.
关键词： 胎膜早破 内质网应激 CHOP/GADD153 -
内质网应激反应参与强噪声诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的研究
目的:探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)的凋亡,及观察凋亡蛋白酶Caspase-12、内质网应激相关因子Bip/Grp78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC中的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC损伤中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠20只,将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1,4,14d组及对照组在处死前测ABR(每组各5只).通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组化检测Caspase12、Bip/Grp78,CHOP/Gadd153蛋白的表达.结果:透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变.实验组SGC的TUNEL染色明显增强,免疫组化检测实验组Bip/Grp78蛋白明显高于正常组,且在1,4,14d都维持在比较高的水平.Caspase-12、CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d和4d达到高峰,14d减少.结论:强噪声可以诱导SGC凋亡,Caspase-12活化引起内质网应激反应性凋亡通道是此过程的信号途径之一.
-
CHOP/Gadd153在强噪声诱导下豚鼠耳蜗细胞凋亡中的表达和作用
目的:探讨强噪声对豚鼠耳蜗细胞死亡的机制及CHOP/Gadd153在强噪声诱导耳蜗细胞凋亡中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠32只,将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4 h,噪声刺激停止后1,4,14 d组(实验组)及对照组(每组各8只)在处死前测听性脑干反应(ABR).取每组4只豚鼠耳蜗作石蜡切片,另外4只豚鼠提取耳蜗总蛋白.脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测耳蜗凋亡细胞,免疫组织化学及western blot方法检测CHOP/Gadd153、Bcl-2蛋白的表达.结果:实验组耳蜗Corti's器、血管纹和螺旋神经节细胞(SGC)存在TUNEL阳性细胞,以1 d组多,而对照组未见阳性细胞.免疫组化、western Blot检测,实验组CHOP/Gadd153表达明显高于对照组(P＜0.01),各实验组CHOP/Gadd153表达没有差异(P＞0.05);免疫组织化学观察到实验组CHOP/Gadd153在Corti's器、螺旋神经节及侧壁有免疫反应阳性,定位于胞核,对照组表达阴性.Westerr Blot检测实验组Bcl-2蛋白无表达,而对照组Bcl-2的表达明显高于实验组(P＜0.01);对照组Corti's器、螺旋神经节及侧壁的细胞质上有染色程度不等的棕黄色颗粒分布,实验组表达阴性.结论:强噪声可以通过上调CHOP/Gadd153蛋白,进而下调Bcl-2蛋白的表达来诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡.
关键词： 强噪声 凋亡 耳蜗 CHOP/GADD153 Bcl-2 -
强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞内质网应激相关因子表达的改变
目的:观察内质网应激相关因子Bip/GRP78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞损伤中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠48只,将实验组豚鼠暴露在4 k Hz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1d、4d 、14d组及对照组在处死前测ABR(每组各12只).脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术( TUNEIL) 检测耳蜗凋亡细胞.免疫组化及Western Blot方法检测Bip/GRP78,CHOP/Gadd153蛋白的表达.结果:实验组耳蜗Corti/s器、血管纹(stria vascularis,sv)和螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)存在TUNEL阳性细胞,以1d组多,而对照组未见阳性细胞.免疫组化、Western Blot检测实验组Bip/GRP78蛋白明显高于正常组,且在1d、4d、14d都维持在比较高的水平;CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d、4d达到高峰,14d减少.结论:强噪声暴露启动内质网应激反应,诱导Bip/GRP78表达,降低细胞损伤,同时激活CHOP/Gadd153途径启动细胞凋亡来清除受害严重的细胞,这可能是内耳细胞内源性保护机制之一.
关键词： 强噪声 耳蜗 内质网应激 Bip/GRP78 CHOP/GADD153 -
内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在结肠癌组织中的表达及意义
目的:探讨结肠癌组织内质网应激相关蛋白CHOP/GADD 153的表达,并分析其与临床病理特征的关系.方法:选择82例结肠癌患者的结肠癌组织与相应的癌旁正常结肠组织(距癌组织＞5 cm)制作蜡块后构建组织芯片,分别用免疫组化法及Western blot法检测CHOP/GADD153蛋白的表达,并分析其表达与患者临床病理特征分关系.结果:免疫组化与Western blot结果均显示,结肠癌组织CHOP/GADD153蛋白的表达水平明显癌旁正常结肠组织(P＜0.05);与临床病理特征的关系分析显示,结肠癌组织中CHOP/GADD153蛋白的表达水平随结肠癌组织分化程度的降低而增强(P＜0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、肿瘤的浸润深度和淋巴结转移等因素无关(均P＞0.05).结论:结肠癌组织中CHOP/GADD 153蛋白的表达增高,并与结肠癌织的分化程度密切相关,提示内质网应激可能参与了肿瘤分化的调控.
关键词： 结肠肿瘤 CHOP/GADD153 应激 内质网 组织阵列分析 -
CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达
目的:探讨内质网应激相关因子CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达.方法:收集因PCOS不孕、行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞(PCOS组,n=45)及因男方因素不孕、行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞(对照组,n=45),应用RT-PCR和Western blotting方法检测患者卵巢黄体颗粒细胞CHOP/GADD 153的表达.结果:PCOS组CHOP/GADD153mRNA水平(0.45±0.20)及蛋白水平(0.62±0.26)均较对照组(分别为0.40±0.18、0.56±0.17)有增高趋势,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:内质网应激标志蛋白CHOP/GADD 153在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达无明显改变,推测PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞内质网应激尚处于保护性阶段.
-
谷氨酰胺对A549细胞内质网应激反应的保护作用
目的 探讨谷氨酰胺对内质网应激反应的细胞保护作用.方法 利用衣霉素制备细胞内质网应激模型:培养人肺腺癌细胞株A549细胞,用MTT法检测不同浓度(0.1 ug/ml,1 ug/ml,10ug/ml)衣霉素对A549细胞作用不同时间(6,12,24,48h)的细胞增值抑制率以选择衣霉素作用的合适时间及浓度.结果 衣霉素处理细胞A549浓度为1ug/ml,作用时间为12小时时细胞增殖抑制率为51.3％,接近50％,故选择衣霉素作用浓度为1 ug/ml,作用时间为12h.结论 谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞有保护作用.
