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检测肠产毒性大肠埃希菌GM1-ELISA方法的建立
肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)是重要的致病因子不耐热肠毒素(LT),由一个具有5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)糖基化活性的A亚单位(LTA)和神经结苷脂(GM1)有特异性高亲和力的B亚单位(LTB)构成.
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TSH受体抗体的测定与临床意义
促甲状腺素受体(TSH-R)位于甲状腺滤泡上皮细胞质膜上,由糖蛋白和神经节苷脂组成.TSH-R具有高、低两种亲和力,糖蛋白为高亲和力的识别部位,也是一种异质性受体,能特异地与TSH结合,可以代替TSH抗体,建立放射受体分析(RRA),检测待测物生物活性,而RIA测定待测物免疫活性.1 TSH-R的制备取人或牛的新鲜甲状腺,剪碎,组织匀浆,用0.1mol/L二碘水杨酸锂,处理甲状腺滤泡上皮细胞膜,获粗制受体液.再行蔗糖密度梯度离心,得分子量为280、160、75、15-30kD的四种具有结合TSH活性的TSH-R,又称为增溶受体.后经胰蛋白酶水解成15-30kD的纯TSH-R蛋白.
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初发性类风湿关节炎患者外周血中Tfh细胞及其相关细胞因子的临床意义
滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh细胞)是近年来新发现的,真正意义上辅助B细胞功能的T细胞亚群,其辅助B细胞活化、增殖、分化和分泌免疫球蛋白[1].在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中,B细胞分泌大量高亲和力抗体可诱发炎性反应,致关节损伤[2].本实验拟通过对RA患者外周血Tfh细胞表型及相关细胞因子的检测,探讨其与初发性RA发病的关系.
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活化诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)抗病毒作用研究进展
APOBEC ( apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like protein )家族为载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白,具有脱氨酶功能,到目前为止共发现了11种该家族成员:APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3s(A~C,DE,F~H)、APOBEC4、AID[1]。 APOBEC家族成员可以通过固有免疫和适应性免疫作用抑制病毒感染和限制病毒复制[1]。作为APOBEC家族成员之一,活化诱导的胞嘧啶脱氨酶( ac-tivation induced cytidine deaminase , AID)主要通过介导免疫球蛋白基因类别转换( gene class switch DNA recombination , CSR)和体细胞高频突变(somatic hypermutation,SHM)产生高亲和力抗体参与机体的适应性免疫功能[2],近年来研究发现AID可以通过介导病毒感染细胞凋亡或病毒基因组降解等方式发挥抗病毒作用[3-6]。本文主要对AID在抗病毒中发挥作用进行综述。
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CCL17和CCR4与消化系统肿瘤
趋化因子是一类能够趋化细胞定向移动的小分子肽类物质,分子量在7~12 kDa。根据氨基端两个保守半胱氨酸排列方式的不同,趋化因子目前分为4个亚类,即CXC (α趋化因子)、CC(β趋化因子)、C(γ趋化因子)和CX3C(δ趋化因子)类,X代表两个半胱氨酸间间隔的任意氨基酸及数量[1]。 CCL17,又称为胸腺和活化调节趋化因子( thymus and activation regulated che-mokine ,TARC),曾被认为是Th2细胞的特异性趋化因子,能将Th2细胞从外周血募集至炎症部位,参与局部的炎症反应。近年来发现,CCL17也可以趋化Th17细胞和调节性T细胞( regulato-ry T cell,Treg),使病变局部的免疫调节更加复杂[2]。 CC趋化因子受体4( CC chemokine receptor 4, CCR4)是 CCR 家族受体之一,是CCL17的高亲和力受体。近年来有关研究发现, CCL17/CCR4不仅参与机体的过敏反应、自身免疫性疾病的发病机制,在肿瘤的发生、发展中也发挥一定作用[3-4]。本文就 CCL17/CCR4与消化系统肿瘤的关系作一综述。
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维生素D在呼吸系统感染性疾病和脓毒症中的作用
维生素D除经典的调节钙磷平衡和骨代谢方面作用外,近年来发现具有免疫调节作用。维生素D的来源包括食物摄入和皮肤暴露于阳光紫外线(290~315 nm)下由7-脱氢胆固醇合成维生素D3前体[1]。维生素D3前体经过自发异构化为维生素D3进入循环系统,在肝脏25羟化酶( CYP27A1)的作用下转化为25(OH)D3,而后在肾脏1α羟化酶(CYP27B1)的作用下转化为维生素D的生物活性形式1,25(OH)2D3。24羟化酶可将1,25(OH)2D3转化为非活性形式。维生素D受体(vitamin D re-ceptor,VDR)属于类固醇激素核受体,1,25(OH)2D3与高亲和力VDR结合后可调节超过900个靶基因的表达,在不同细胞、不同1,25(OH)2D3给药浓度和不同刺激时间等条件下,所调节的靶基因数量有所不同[2]。研究显示VDR表达于多种免疫细胞,提示维生素D3在调节免疫应答方面具有重要作用[3-5]。本文将对维生素D的免疫调节作用及在防治常见呼吸系统感染性疾病和脓毒症方面的作用进行综述。
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SELEX技术检测小分子化学物研究进展
Tuerk等[1-2]于1990年发明一种体外筛选新技术,即指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligandsby exponential enrichment,SELEX),分别筛选出针对噬菌体T4 DNA聚合酶和有机染料分子的特异性适体.适体(aptamer)指用SELEX技术从体外合成的随机寡核苷酸序列库中人工筛选出的与靶标有高亲和力和特异性结合的寡核苷酸序列.
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抗肝癌人源化单链抗体hscFv25的体外亲和力成熟
目的:提高人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的亲和力.方法:设计并合成人源化抗肝癌单链抗体hscFv25重链及轻链CDR3的半随机突变引物,构建突变体抗体库,竞争筛选亲和力更高的突变体抗体,对所得到的高亲和力的候选抗体,在大肠杆菌中进行可溶性表达,并采用细胞ELISA、细胞涂片免疫组织化学染色的方法,对该抗体进行初步的活性鉴定.结果:得到了3株候选高亲和力突变体抗体,其中的一株在大肠杆菌中获得了可溶性表达后,进一步的活性检测结果表明,该抗体的相对亲和力比亲本单链抗体提高了60倍左右,同时该抗体对肝癌细胞(SMMC-7721)的免疫组织化学染色呈强阳性,着色情况与亲本抗体相一致,而对正常肝细胞(HL-02)染色呈阴性.结论:成功地构建了人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的突变体抗体库,并筛选到了一株亲和力更高的突变体抗体.
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支气管哮喘患者IgE高亲和力受体β链基因多态性与血清总IgE关系的研究
IgE高亲和力受体β链(FcεRI β)基因定位于染色体11q13区,被认为是特应性和支气管哮喘(简称哮喘)易感性的主要候选基因之一[1].FcεRI β基因存在数个单一核苷酸变异的多态性位点[2] , 其中Ile/Leu181、Val/Leu183、Glu/Gly237的3个位点与哮喘相关研究国内已有报道,而启动子区-109C/T位点的研究报道较少,我们应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对-109C/T位点进行分析, 研究江西籍汉族人群中该位点与哮喘发病及其血清总IgE水平之间的关系.
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罗格列酮经p38MAPK通路下调胃癌细胞基质金属蛋白酶2表达
在我国,胃癌的死亡率居各类恶性肿瘤之首,侵袭和转移是其主要致死原因.过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ/)是一类由配体激活的核转录因子,与恶性肿瘤的关系已越来越引起人们的关注.以岁格列酮为代表的唑烷二酮类化合物是一类高亲和力PPARγ激动剂,临床用作胰岛素增敏剂.研究证实PPARγ激动剂对多种肿瘤细胞具有抑制作用,我们前期研究已经发现罗格列酮能够通过非PPARγ依赖途径抑制来源于胃癌转移瘤的SGC-7901细胞的侵袭转移,并可下调基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达~[1].本研究拟在此基础上探讨罗格列酮下调MMP-2表达的分子机制.
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姜黄素和干扰素γ联用对K562细胞信号转导和转录激活因子5的影响
姜黄素是从姜科姜黄属姜黄根茎中提取的一种酚类色素,它广泛用于食品的上色和调味剂,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗凝、降血脂及抗粥样硬化等药理作用.其抗癌谱较广,毒副作用小,抗肿瘤作用日益受到人们的重视,成为目前的研究热点.干扰素γ(IFNγ)是一种细胞因子,它能高亲和力的与特异性细胞受体结合而发挥生物学效应,调节特异性基因表达;抗病毒和抑制细胞增殖.文献[1]报道,姜黄素与IFNγ联用具有协同作用,能有效的抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡,而对正常细胞诱导凋亡的作用较小.我们以K562细胞系为模型,探讨姜黄素和IFNγ对信号转导和转录激活因子5(STAT5)信号途径的影响.
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滤泡辅助性T细胞与自身免疫性疾病
自身免疫性疾病系自身反应性T细胞和自身抗体形成存在受抑缺陷.高亲和力致病性自身抗体的产生是发病的核心.淋巴滤泡内生发中心(GC)是T细胞依赖应答的必需结构,是体细胞高频突变、抗体类别转换和高亲和力B细胞选择的场所.CD+4T细胞对于GC的形成是必需的,它可提供信号使经抗原选择的高亲和力GC B细胞分化为记忆B细胞或浆细胞,以维持长期体液免疫.所以CD+4 T细胞在滤泡内辅助B细胞分化或维持耐受是自身免疫性疾病能否发生的关键环节.
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中国北方汉族人群哮喘患者受体基因多态性研究
支气管哮喘是一种多基因遗传病,本研究通过检测支气管哮喘患者β2肾上腺素受体基因第46、79位点及高亲和力免疫球蛋白Eβ链受体基因第5189、5191、5195、6843位点的多态性,探讨其与支气管哮喘发病的相关性。 一、对象与方法 1.对象:哮喘组:支气管哮喘患者55例,男30例,女25例,年龄20~66岁。诊断符合中华医学会呼吸病学分会1997年制定的诊断标准。根据临床症状和所需药物情况,将患者分为轻度(包括间歇发作)和中重度,轻度患者25例,中重度患者30例。正常对照组:正常健康成人38例,男15例,女23例,年龄25~46岁。两组均为北方汉族人。
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双膦酸盐的发展及临床应用
骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,以骨组织丢失,微结构破坏,以及骨脆性增加为特征,导致骨折风险增加,骨折发生前的骨丢失及低骨量通常是无症状的.绝经后雌激素缺乏是骨质疏松常见的原因.双膦酸盐是治疗骨质疏松的经典药物.一、双膦酸盐的发展简史目前临床使用的双膦酸盐都含有P-C-P键,结构非常稳定,且耐高温,对许多化学物质稳定.该结构与骨质中的羟膦灰石呈高亲和力,能特异的与骨质中的羟膦灰石结合,抑制破骨细胞活性,从而抑制骨质吸收.与其具有类似的P-O-P结构的焦磷酸盐在自然界广泛存在.很久以前人们就发现焦磷酸可抑制膦酸钙沉淀,成为身体内生的"水软化器",从而开启了双膦酸盐的研发之旅.
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下丘脑-垂体轴外GnRH-R研究现状
促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑神经内分泌细胞合成的十肽激素,以脉冲形式分泌,通过垂体门脉系统进入垂体,与垂体前叶促性腺细胞上的特异性高亲和力促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)结合,刺激黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的合成与分泌,作用于性腺,从而维持正常的内分泌和生殖系统功能.
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褪黑素受体1B基因rs10830962位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病发病的关系
妊娠期糖尿病(GDM)是1种妊娠后首次发现或发病的糖尿病,不仅增加围产期孕妇和胎儿的风险,也增加这些孕妇远期发生2型糖尿病(T2DM)、代谢综合征及其子代肥胖的概率。目前,GDM的病因及发病机制尚未完全明确,但其与T2DM具有相似的临床特征,均存在胰岛素分泌缺陷或胰岛素抵抗,提示两者可能存在相同的遗传基础[1-2]。近年来的研究证实,褪黑素受体(MTNR)1B基因是T2DM的候选基因[3],MTNR1B基因rs10830962位点单核苷酸多态性(SNP)与葡萄糖代谢和胰岛β细胞的功能密切相关,与T2DM的发病具有高度的相关性[4]。该基因位于染色体11q21~q22,编码高亲和力G蛋白偶联受体,与松果体分泌的激素--褪黑素(melatonin)结合而发挥生理作用。2012年,Kwak等[5]通过对韩国GDM人群的研究发现,MTNR1B基因rs10830962位点SNP与GDM的发病具有显著相关性。2013年,Li等[6]通过对中国汉族的GDM患者及正常孕妇的MTNR1B基因rs10830962位点进行研究,结果发现, rs10830962位点SNP与GDM发病无明显相关性。上述两项研究的结果不同,提示,GDM的发病在不同的人群中可能存在一定的遗传异质性。本研究采用Sanger测序技术及小测序法(SNaPshot)分型技术,探讨MTNR1B基因rs10830962位点SNP与GDM发病的关系。现将结果报道如下。
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brivaracetam获FDA批准用于发作性癫痫辅助治疗
优时比公司的brivaracetam(Briviact)于2016年2月获FDA批准用于≥16岁部分发作性癫痫的辅助治疗。该药可与大脑中的突触蛋白2A呈高亲和力和高选择性结合,从而具有抗惊厥作用,然而其作用机制尚不清楚。该药将以3种剂型上市,即薄膜衣片、口服溶液及注射液,推荐起始剂量为50 mg,每日2次(100 mg/d),根据个体差异和耐受,剂量可减半或加倍。
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舒马曲坦鼻吸粉获FDA批准用于治疗偏头痛
Avanir公司的舒马曲坦鼻吸粉剂(sumatriptan nasal powder,Onzetra xsail)于2016年1月获FDA批准用于治疗急性和无先兆的成年偏头痛患者。该药是血清素5-HT1B/1D受体激动剂,与人类5-HT1B/1D受体以高亲和力结合,可能通过对颅内血管与三叉神经感觉神经的5-HT1B/1D受体激动效应,导致脑血管收缩和抑制促炎性神经肽的释放以达到治疗偏头痛的效果。Onzetra xsail为鼻腔给药的粉末,配以xsail呼吸动力输送装置。推荐剂量为22 mg,通过鼻甲给药,每鼻孔11 mg。24 h内大剂量不应超过2剂(44 mg),间隔2 h以上使用。
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治疗干眼症新药lifitegrast
lifitegrast是一种新型小分子T细胞抑制剂,通过影响细胞粘附分子(ICAM-1)与淋巴细胞功能相关抗原(LFA-1)的结合,有效阻断炎症通路,抑制T细胞介导的炎症反应,从而改善干眼症患者的症状与体征.多项动物试验及临床研究显示,lifitegrast具有良好的安全性和耐受性.2016年7月美国FDA批准其上市,用于干眼症的治疗.本文对其药理作用、药动学、临床研究及安全性等进行综述.
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噻唑烷二酮类的降糖外作用
噻唑烷二酮(thiazolidinedione,TZD)类是近年来发现的一类新型口服胰岛素增敏剂,包括一系列具有2,4-噻唑烷二酮结构的化合物,如Ciglitazone,Pioglizone,Troglizone,Rosiglizone,Englitazone等,它们具有不同的侧链取代基团而药理特点各不相同.目前认为TZD的作用靶点是过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ).它属于核受体超家族成员,初于脂肪细胞中检测到,有诱导脂肪细胞分化的作用,之后发现它还广泛表达于T淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞及癌细胞等.配体与PPARγ结合并使之激活后与维甲酸类X受体(RXR)或糖皮质激素受体形成异二聚体,再结合于特定DNA序列而使靶基因激活.TZD是PPARγ的高亲和力配体.