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双重复合染色在胶质肉瘤病理诊断中的应用
一、材料与方法?①Foot方法:0.25%Kmno4氧化3分钟,水洗入1%草酸漂白,蒸馏水洗,入碳酸氨银溶液内置于56℃暖箱中20-30分钟,蒸馏水速洗后入10%甲醛2分钟,0.2%氯化金调色,5% 海波还原,蒸馏水洗;②将浸银染色过的切片进行免疫组化染色,抗体为GFAP,SP法染色;(3)单纯免疫组化染色:抗体为GFAP、Vimentin,SP法染色.免疫组化抗体GFAP、Vimentin均购自DAKO公司,SP药盒购自北京中山生物公司.
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LASIK与LASEK术后兔角膜神经损伤和修复的实验研究
目的 比较准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileus,LASIK)与准分子激光上皮下角膜磨镶术(laser subepithelial keratomileusis,LASEK)两种准分子激光手术后兔角膜中神经生长因子(NGF)mRNA表达的差异及手术后兔角膜神经损伤和再生修复情况.设计 动物实验.研究对 象新西兰白兔60只.方法 将60只新西兰白兔随机分为6组,每组10只,1组为正常对照组,其余依术后取角膜时间不同分为5个实验组.实验组白兔一眼行LASIK手术,另一眼行LASEK手术.术后第1、7天、1、3、6个月取兔角膜,通过氯化金染色的方法观察兔角膜神经损伤及再生修复,用半定量RT-PCR的方法检测兔角膜中NGF mRNA的表达.主要指标 光镜下角膜神经损伤和再生修复的变化,角膜中NGF mRNA的表达量.结果 光镜下观察,LASEK手术后1天深层基质神经保留,术后7天切削区内的神经断端开始再生,术后6个月切削区前基质神经丛重构基本完成,形态与正常接近；而LASIK术后1天可见基质层神经纤维断端,术后7天深层基质神经无明显再生的神经纤维,术后1个月角膜瓣边缘神经断端再生神经增多,术后6个月角膜瓣内的前基质神经丛开始恢复,部分神经断端无神经再生,形成盲端.LASEK组在术后早期(1、7天)角膜中NGF mRNA表达增高(0.650±0.101、0.580±0.109),而LASIK组术后1个月才开始增高(0.661±0.032),随着手术后角膜神经再生修复时间的延长,两组角膜中NGF mRNA表达的差异越来越小(t=0.687,0.277,0.107；P=0.530,0.796,0.920).结论 与LASIK相比,LASEK术后兔角膜神经损伤轻,修复快.(眼科,2011,20:391-396)
关键词： 兔 准分子激光原位角膜磨镶术 准分子激光上皮下角膜磨镶术 神经再生 氯化金 神经生长因子 -
纤维性星形胶质细胞显示的改进
在脑和脊髓内,除了聚集大量的神经元以外,还有另一类不具有传导冲动机能的组织成份,即神经胶质细胞.这类细胞广泛分布于中枢神经系统,其数目比神经元多达10倍至50倍.胶质细胞是多突细胞,胞突无树突和轴突之分,胞浆内缺乏神经原纤维和尼氏体,胞核的核仁不明显.胶质细胞因其形态、起源和功能上的不同,而分为星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞.星形胶质细胞可分两种:即纤维性星形胶质细胞及原浆性星形胶质细胞.纤维性星形胶质细胞多集中于白质,夹在神经纤维之间,在灰白质交界处可见纤维-原浆性星形胶质细胞.纤维性星形胶质细胞的突起较少,突起纤维较长而细直,分枝不多,其中有一、二个较长的突起末端稍膨大,称为脚板,终止在小血管的管壁上.在普通染色标本中,这些细胞仅能染出细胞核、不能显出全貌,用硝酸银或氯化金浸染法可显出细胞的外形.但每一种染色法仅能揭露一种细胞,本文对Cajal金升汞法借助金属浸镀,对显示纤维性星胶质细胞稳定可靠,易于成功.
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一种改良Bielschowsky染色法显示触觉小体和游离神经末梢的方法
神经末梢是周围神经纤维的终末部分,包括感觉神经末梢和运动神经末梢,分布广泛并且形成多种多样的末梢装置,如:触觉小体、环层小体、游离神经末梢、肌梭、运动终板等.显示神经末梢的方法通常采用硝酸银浸染色法[1],氯化金浸染法和美蓝超生体染色法3类[2].
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改良氯化金染色法对髓鞘染色的定性、定量分析
目的 改良氯化金髓鞘染色方法并且证明该方法可用于髓鞘染色的定性、定量分析.方法 采用7、14、21日龄的新生正常SD大鼠,各5只;APP/PS1小鼠(阿尔茨海默病动物模型)5只和PS1小鼠(无淀粉样蛋白沉积的阴性对照正常小鼠模型)6只.断头取脑处理后冰冻切片机切片,用改良的氯化金染色方法对脑组织切片染色.直接在光学显微镜下观察髓鞘染色效果,测定目标区域平均吸光度值,进行髓鞘化定量分析比较.结果 新生7 d大鼠髓鞘化染色阴性,21 d大鼠的髓鞘化程度比14 d大鼠的髓鞘化程度明显增高.APP/PS1组小鼠可观察到病理性髓鞘染色,定量分析显示其目标区域平均吸光度值低于PS1组,APP/PS1组存在明显的脱髓鞘改变.结论 改良的氯化金髓鞘染色快速、简单、敏感、稳定,可进行髓鞘化定性、定量分析.
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氯化金压片显示运动终板方法的探索
氯化金压片法显示运动终板为传统方法之一,Ranvier氏认为用新鲜柠檬汁固定肌组织后用氯化金浸染制作运动终板效果特佳.我们经过实验,认为此法繁琐,且柠檬受季节和地区的限制.为寻求一种新鲜柠檬汁的替代品,我室试探用柠檬酸的不同浓度及20%的甲酸,通过多次对此试验,取得满意的效果.
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运动神经末梢显示方法探讨
中枢神经系统的传出神经纤维终止于骨骼肌,与肌纤维紧贴构成运动终板,一般常采用镀金压片方法显示.现将我们的改进方法体会简述如下.第一种方法:取材:以狗、猫、大小白鼠、荷兰猪、家兔肋间肌分别作了比较试验,我们认为以家兔肋间肌组织好,以刚生下来3hr左右的家兔理想.取家兔第二肋间肌用剪子剪成小碎块,还可以将肋骨连同肋间肌一起剪下来绑在载玻片上,先投入25%蚁酸40～50min,从蚁酸取出去掉玻片用干净的滤纸吸去多余蚁酸,再入1 %氯化金1hr,用滤纸吸取多余氯化金,再入5%蚁酸6～24hr,压片,在显微镜下有运动终板为止.第二方法:固定剪成小碎块组织,先入1%氯化金浸染.1%氯化金8ml ,蚁酸2ml,两者混合后煮沸,冷却过滤使用.肋间肌浸染20min～2hr,吸去多余蚁酸用蒸馏水洗,用纯甘油透明三次,甘油保存.取小块肌肉顺肌纤维方向用载片或用盖片轻轻压平,镜下观察,找到较完整运动终板为止.用PVP封片或用甘油明胶封片,PV P封片可长久保存.结果:神经纤维和运动终板呈褐黑色.被压开的染上氯化金的骨骼肌纤维为粉红色或淡兰紫色,神经纤维染成黑色,一条神经沿途分支可分布于多条肌纤维,每条肌纤维到达肌膜时失去髓鞘,其末端分散成爪状形成终板,我们的体会是(1)幼兔第二肋间肌运动终板多易浸染 ,取材要新鲜,取材时将肋间肌周围的结缔组织剥离干净,取肋间肌中间肌肉.(2)浸蚁酸时间不易过长以免使运动终板不完整.反之肌纤维散不开,严格掌握是关键.(3)配成1% 氯化金呈金黄色液体,不要用过期的氯化金,配好后液体入冰箱保存,外包黑纸,染色过程要严格避光.(4)氯化金是贵重药品,配时必须将瓶子用洗涤液浸泡冲洗干净,要求一次配制成功.(5)浸染组织所用摄子好用竹筷子或摄子上涂上层蜡.附:PVP配方:取聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolldone,P VP)10克,蒸馏水10～15ml在配制时用玻璃棒搅拌,出现很多小泡,静止后使用 ,入冰箱保存使用.甘油明胶配法:明胶5～6g,甘油1～2ml,蒸馏水28ml,置45℃恒温箱自然溶解.
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制作运动终板标本方法的改进
运动终板属运动神经末梢,由脊髓前角或脑干的运动神经元胞体发出长轴突抵达骨骼肌时失去髓鞘,并反复分支,形成葡萄状终末,与骨骼肌纤维建立突触连接.显示神经末梢的常用的方法是氯化金浸染法,通常使用磁漆封片.但此法有易脱落的缺点,为了更好地显示结构,克服传统封片技术的不足,满足教学之需要,我们对传统的制片方法进行了改进,获得了满意的效果.
