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针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应
目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白(HSP)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)及其mRNA表达的效应. 方法将24只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为3组:电针(EA)组、对照1(C1)组和对照2(C2)组.将3组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜(NCM)两种标本,应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测HSP70、iNOS及iNOS mRNA. 结果 HSP70定位于巨噬细胞的胞质和胞核;iNOS mRNA及iNOS均定位于巨噬细胞的胞质;3组的iNOS mRNA、iNOS、HSP70的斑点印迹的扫描数值均为EA组>C2组>C1组(P<0.01). 结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的HSP70、iNOS及iNOS mRNA表达.
关键词: 巨噬细胞 一氧化氮合酶基因表达 热休克蛋白 电针 -
免疫抑制大鼠肺部感染时一氧化氮合酶基因表达与肺血管损伤的关系
研究显示,免疫抑制宿主(immunocompromised host,ICH)肺部感染时其肺部中性粒细胞炎症反应并不严重,但肺血管损伤严重[1].一氧化氮合酶(NOS)有3种异构体,包括神经元型(nNOS,Ⅰ型),诱导型(iNOS,Ⅱ型)和内皮型(eNOS,Ⅲ型).其在ICH肺部感染时存在的变化尚不清楚.
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急性心肌梗死大鼠心脏内皮型一氧化氮合酶基因表达减少及左旋精氨酸增加内皮型一氧化氮合酶基因表达
关键词: 急性心肌梗死 大鼠心脏 内皮型 一氧化氮合酶基因表达 -
大鼠阴茎组织一氧化氮合酶基因表达的雄激素依赖性
一氧化氮(NO)是由一氧化氮合酶(NOS)催化产生,介导阴茎勃起的主要神经递质。我们建立雄激素变化SD大鼠模型,测定睾酮(T)、游离睾酮(FT)和二氢睾酮(DHT)变化后阴茎组织神经型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)的信使核糖核酸(mRNA)表达,以明确nNOSmRNA、eNOS mRNA的雄激素依赖性。1.材料与方法:模型建立:SD雄性大鼠160只:A组,5周龄56只;B组,10周龄50只;C组,58周龄54只。A、B和C各组均分成:(1)正常对照组;(2)去势组;(3)去势,每月肌注25mg/kg的十一酸睾酮;(4)去势,每月肌注50mg/kg的十一酸睾酮;(5)抑制DHT组:每天喂饲保列治4.5 mg/kg。模型建立后4、10周,各组大鼠半数抽取静脉血处死,放射免疫法测定血液T、FT和DHT浓度;阴茎海绵体组织-196℃液氮处理、-80℃冰箱保存。
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大鼠脊髓伤后伤段脊髓一氧化氮合酶基因表达及其活性动态变化
一氧化氮(NO)作为一种新型神经递质,既能影响脊髓组织血液循环,又能促进神经毒性因子释放,因而在继发性脊髓损伤中具有关键作用。本研究从基因和蛋白质水平系统地探讨脊髓伤后催化NO产生的一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的动态变化规律。 一、材料与方法 1.实验分组:健康SD大鼠36只,体重220~300 g,雌雄不拘。随机分为6组:无损伤组,损伤后2、6、12、24、48 h组,每组6只。 2.主要仪器及材料:日本岛津UV-1206分光光度计,美国GeneAmp 9600 PCR仪、GDs 7600凝胶扫描分析系统、美国Promege总RNA提取试剂盒,北京邦定公司一氧化氮合酶(NOS)活性检测试剂盒。所用聚合酶链反应(PCR)引物由上海生工公司合成。
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首乌丹参方预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤iNOS mRNA表达的影响
目的:研究观察首乌丹参方预处理后对心肌缺血再灌注损伤(I/R)心肌梗死范围及血中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,观察大鼠心肌诱生型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的变化,探讨首乌丹参方对心肌细胞的保护作用.方法:实验共设7个组,假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和首乌丹参方高、中、低剂量组,对照药组(复方丹参滴丸、消心痛),采用结扎大鼠冠状动脉前降支30min/开放120min建立心肌I/R模型,观察I/R大鼠心肌梗死范围以及血中的IL-1β、TNF-α含量的变化;采用RT-PCR检测各组心肌iNOSmRNA的表述,同时电镜下观察心肌超微结构变化.结果:首乌丹参方高、中两个剂量组梗塞程度明显减轻,梗塞区重占全心脏及左心室的百分比与模型组比较均有显著性差异(P<0.01-0.001),以首乌丹参方中剂量组为优;首乌丹参方给药后血中TNF-α、IL-1β有不同程度的下降,其中以高、中剂量组为优(P<0.01);假手术组心肌iNOSmRNA弱表达,I/R组呈现高表达,首乌丹参方可下调iNOSmRNA基因表达;电镜下I/R组心肌组织严重损伤,首乌丹参方用药后可见局灶性损伤和毛细血管狭窄,心肌轻度损伤.结论:通过首乌丹参方预处理,可以减轻TNF-α、IL-1β对I/R心肌的损伤,下调I/R大鼠心肌iNOSmRNA的表达,达到保护心肌的作用.
关键词: 缺血再灌注损伤 IL-1β TNF-α 一氧化氮合酶基因表达 -
抗氧化剂抑制内毒素性休克大鼠诱导型一氧化氮合酶基因表达
感染性休克时循环机能障碍的显著特点表现为进行性、顽固性低血压,伴对血管活性药物敏感性降低,以至组织器官灌注不足、重要器官机能代谢障碍,病死率仍高达30%~70%.休克时循环机能障碍所涉及的病理生理机制极其复杂,脂质过氧化物的堆积和NO的爆发生成是其中的关键病理因素之一.我们以往的研究中发现抗氧化剂能部分逆转内毒素休克大鼠的血管低反应性[1],为了进一步探讨其治疗学机制,本实验对抗氧化剂在内毒素性休克大鼠iNOS mRNA表达中的作用进行了观察.
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病理生理教学实验中应培养学生研究疾病机制的能力
不少研究因设计不完善而导致错误的结论,如根据实验中动物吸入低氧气体可使肺动脉压升高和血中组胺浓度升高,给正常动物注射组胺也引起肺动脉压上升,就得出组胺在缺氧性肺动脉高压的发生中起介导作用的错误结论。后来实验发现,给动物注H1受体阻断剂不影响缺氧性肺动脉高压的形成,而H2受体阻断剂则可显著增强缺氧引起的肺动脉高压反应。表明在机体缺氧时组胺的生成增多主要作用于肺血管H2受体使肺血管舒张,从而对缺氧性肺血管收缩反应起调节作用。有人仅用体外培养的肺动脉内皮细胞研究缺氧对一氧化氮合酶基因表达的影响,发现缺氧使其表达减少,就认为一氧化氮的生成减少是导致缺氧性肺血管收缩反应的因素。后来有不少整体实验证明,吸入低氧气体可使肺内产生的一氧化氮增多,用一氧化氮合酶抑制剂可增强缺氧性肺血管收缩反应,表明一氧化氮在缺氧性肺血管收缩反应中是起调节作用。肺血管收缩引起的肺血流动力学变化是刺激一氧化氮合酶基因表达的主要因素,而离体培养的内皮细胞无血流动力学变化的作用,故实验结果与整体实验不符。不少申报的课题只研究某一因子的变化与病情的相关性,企图从中说明该因子是这种疾病的致病因素。这种课题很难得到资助,因为实验并不能说明该因子与疾病的因果关系,究竟是该因子引起疾病?还是疾病引起该因子的变化?或者两者都是由一病因所致,两者间并不存在因果关系。