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丁酸钠对大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)丁酸钠对在体外与膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)接触共培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化能力的影响.方法 常规培养大鼠BMSCs及BSMCs至第3代,种植于多孔膜两侧进行接触共培养.实验组BMSCs培养上室面添加含3 mmol/L丁酸钠诱导其分化;对照组不含丁酸钠行接触共培养.免疫荧光化学染色法对2组BMSCs中平滑肌标志性蛋白calponin进行检测,同时用逆转录PCR(RT-PCR)和荧光定量PCR法(real-time PCR)对BMSCs中平滑肌α肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、calponin、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle-myosin heavy chain,SMMHC)行进鉴定.结果 大鼠原代BMSCs流式检测显示CD29、CD44、CD166表达阳性,阳性率分别为96.55%、92.76%、99.54%;CD31、CD45表达阴性,阳性率为1.39%、5.56%.BSMCs鉴定α-SMA、calponin、SM-MHC 3种标志性蛋白的表达均为阳性.细胞免疫荧光染色显示平滑肌标志性蛋白calponin的表达均随时间的延长而增加,实验组表达强度明显高于对照组.RT-PCR和荧光定量PCR显示实验组中BMSCs平滑肌标志性基因α-SMA、calponin、SM-MHC 随共培养时间的延长逐渐增多,与对照组比较有明显差异(P＜0.05).结论 HDACi丁酸钠可以增强BMSCs向平滑肌细胞的分化能力,提示提高组蛋白乙酰化程度可以促进BMSCs分化.
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丁酸钠抑制缺氧致人脐静脉内皮细胞通透性增加及机制
目的 研究丁酸钠对缺氧血管内皮细胞通透性改变的影响及其机制.方法 人脐静脉内皮细胞(Human umbelical vein endothelial cells,HUVECs)分为常氧组(21％O2)、缺氧组(1％O2)及缺氧+丁酸钠组(n=3),缺氧+丁酸钠组分为0、0.3、1、3 mmol/L 4个剂量组(n=3).利用三气培养箱模拟缺氧环境,将缺氧组及缺氧+丁酸钠组置于箱内培养,常氧组置于普通培养箱中培养;利用Transwell小室检测HUVECs单层通透性;Western blot检测黏附连接相关蛋白p120、β-catenin蛋白表达;免疫荧光检测技术观察p120、β-catenin的表达和分布.结果 缺氧组HUVECs单层通透性较常氧组增加,差异具有统计学意义(16％ vs 10％,P＜0.05);在丁酸钠(1 mmol/L)作用下,缺氧所致的单层通透性增加被抑制,与缺氧组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).与常氧组比较,缺氧组培养12 h,内皮细胞p120蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),而缺氧对β-catenin蛋白表达没有明显影响;缺氧+丁酸钠(1 mmol/L)组与缺氧组比较,p120蛋白水平增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).另外,免疫荧光数据显示:缺氧导致p120荧光强度降低,而复合1 mmol/L丁酸钠,p120蛋白荧光强度增高.结论 在缺氧引起的血管内皮细胞高通透性的模型中,丁酸钠可能通过升高p120蛋白表达,抑制内皮细胞间黏附连接的破坏,从而维持缺氧血管内皮完整,抑制缺氧血管内皮通透性的增加.
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丁酸钠抑制人喉癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究
目的 研究丁酸钠对人喉癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法 将人喉癌细胞株Hep-2细胞接种于12只裸鼠皮下,建立喉癌移植瘤模型.分为实验组和对照组,每组6只,分别给予丁酸钠和磷酸盐缓冲液(PBS)治疗4周.治疗过程中定期测量肿瘤大小及裸鼠体质量,于治疗结束时取肿瘤组织切片进行HE染色、电镜观察、TUNEL标记及免疫组化S-P法检测Ki-67、survivin蛋白表达情况,取心、肝、肺、脾、肾等组织切片进行药物毒性评估.结果 治疗组肿瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织内坏死面积增大,细胞凋亡率显著增高,Ki-67核抗原、survivin蛋白表达水平降低.治疗过程中裸鼠生长良好,无明显毒性反应.治疗结束时,心、肝、肺、脾、肾组织切片光镜下检查未见异常.结论 丁酸钠对人喉癌裸鼠皮下移植瘤有明显的生长抑制作用,其机制可能与抑制survivin表达而诱导细胞凋亡及抑制Ki-67表达有关.治疗剂量的丁酸钠对裸鼠心、肝、肺、脾、肾等组织无毒性.
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丁酸钠与顺铂联用对非小细胞性肺癌细胞生长的抑制作用
目的 研究丁酸钠和顺铂联合作用对非小细胞性肺癌A549细胞增殖的影响及作用机制.方法 采用CCK-8细胞计数法测定丁酸钠、顺铂联用对A549细胞增殖活性的影响,流式细胞法检测细胞周期和细胞凋亡的改变,RT-PCR法检测p21基因的表达.结果 丁酸钠、顺铂联用可抑制A549细胞增殖且呈剂量依赖性,联用后的IC50降低至5.44 μmol/L,与单用DDP的IC50(10.25 μmol/L)相比降低了46.93%(P＜0.01).联用可使细胞周期阻滞于G0/G1期,同时诱导细胞凋亡和p21基因表达的上调.结论 丁酸钠与顺铂联用能抑制A549细胞生长,其作用机制与促进细胞凋亡及诱导p21基因表达有关.
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丁酸钠对甲基硝基亚硝基胍所致胃粘膜上皮细胞非程序DNA合成、脂质过氧化和ras p21表达的影响
目的观察丁酸钠(sodium butyrate, SB)对甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N′-nitro-N-nitrocoguanidine, MNNG)所致胃粘膜上皮细胞非程序DNA合成、脂质过氧化和ras p21表达的影响.方法分4组:MNNG、10-5 mol/L SB+MNNG、10-6 mol/L SB+MNNG、10-7 mol/L SB+MNNG,各组测定UDS、LPO和ras p21蛋白.结果胃粘膜细胞先用10-5 mol/L、10-6 mol/L丁酸钠预处理4 h,再给MNNG,细胞非程序DNA合成水平、脂质过氧化和ras p21蛋白含量均显著低于MNNG组(P<0.05, P<0.01).结论一定剂量丁酸钠对MNNG诱导的胃粘膜细胞损伤有保护作用.
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胰岛素和丁酸钠对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞组蛋白乙酰化及增殖相关基因和蛋白的影响
目的 研究组蛋白乙酰化修饰对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及表型转换的影响.方法 原代培养自发性高血压大鼠(SHR)VSMCs.免疫印迹检测胰岛素、PD98059、丁酸钠对VSMCs组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、组蛋白乙酰化、血小板衍生生长因子(PDGF)和α平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)的影响.RT-PCR检测其对MAPK、PDGF和α-SM actin基因转录的作用.结果 (1)胰岛素促进HDAC1的表达,丁酸钠明显抑制HDAC1的表达,PD98059对HDAC1的表达无明显影响;(2)免疫印迹显示胰岛素促进组蛋白H3乙酰化,而PD98059抑制胰岛素的这种作用;(3)胰岛素上调PDGF的表达,同时下调α-SM actin的表达.该作用可被PD98059和丁酸钠阻断.结论 组蛋白乙酰化的改变参与了胰岛素介导SHR VSMCs增殖的过程,且这种过程通过MAPK信号传导途径.
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丁酸钠通过NF-κB途径上调NB4细胞共刺激分子表达
目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠上调NB4细胞共刺激分子表达的作用,并探讨其分子机制.方法流式细胞术检测NB4细胞经不同浓度丁酸钠处理不同时间后CD86、CD80分子表达变化,观察NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对丁酸钠上调CD86表达影响,NF-κB试剂盒检测NB4细胞核内NF-κB含量.结果经丁酸钠处理后,CD86和CD80分子比对照组出现不同程度上调,并具有时间-剂量-效应依赖性.PDTC可部分抑制丁酸钠对CD86分子表达的上调作用.丁酸钠处理NB4细胞后核内NF-κB含量增多.结论丁酸钠通过NF-κB途径上调NB4细胞共刺激分子表达.
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丁酸钠对三硝基苯磺酸实验性结肠炎的疗效研究
目的观察丁酸钠对三硝基苯磺酸(TNBS)大鼠结肠炎灌肠的治疗作用,并初步探讨其作用机制.方法建立TNBS大鼠结肠炎模型,并随机分为3组,予丁酸钠、柳氮磺胺吡啶(SASP)和生理盐水每日灌肠.在第19日处死,评价大体、组织学损伤及髓过氧化物酶(MPO)活性,并比较丁酸钠和SASP组的核分裂指数.结果用丁酸钠和SASP治疗组与生理盐水组比较,腹泻明显好转,体重恢复无明显差异,大体及组织学损伤计分明显改善,MPO活性明显降低(P<0.05),但丁酸钠和SASP治疗组之间无明显差异(P>0.05).丁酸钠组核分裂指数明显高于SASP组(P<0.05).结论丁酸钠灌肠治疗可促进实验性结肠炎的愈合,其疗效可与SASP媲美.
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丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究
目的:观察丁酸钠对体外培养的HT-29细胞的促凋亡作用.方法:采用流式细胞仪、DNA电泳及透射电镜观察经丁酸钠作用的漂浮细胞是否发生了凋亡.结果:丁酸钠可诱导HT-29细胞凋亡,且具有时间和剂量依赖关系,经1mmol/L、3mmol/L、5mmol/L丁酸钠作用48小时,HT-29细胞凋亡率分别为5.7%、7.8%、12.1%,对照细胞仅为2.8%,差异显著(P＜0.05).结论:丁酸钠可诱导HT-29细胞凋亡.这可能是丁酸钠对结肠肿瘤有预防作用的机制之一.
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丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏TLR4表达的影响
目的 探讨丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)表达的影响.方法 将180只健康小鼠(体重20±5g)随机分成正常组、模型组、阳性对照组、丁酸钠低剂量组、丁酸钠中剂量组、丁酸钠高剂量组,每组30只.腹腔注射戊巴比妥(40mg/kg)麻醉小鼠,后5组小鼠给予腹腔内注射LPS4mg/kg诱导建立内毒素血症肝脏损伤模型.注入LPS前1、12、24、36h和注入后12、24、36h,对此5组动物分别蛤予生理盐水、10mg/kg盐酸地塞米松、0.4mg/kg丁酸钠溶液、2mg/kg丁酸钠溶液和10mg/kg丁酸钠溶液,正常组给予同等体积生理盐水.在LPS注入后48h解剖肝脏,观察肝细胞形态学改变,分光光度法测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量,real-time PCR和ELISA分析TLR4、核转录因子-KB(nuclear factor-κB,NF-KB)和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达.结果 与模型组相比,丁酸钠处理组小鼠肝细胞损伤程度减轻,以丁酸钠高剂量组为显著;与模型组比较,丁酸钠高剂量组血清中ALT、AST和ALP含量分别减少了54.03％、61.72％和46.15％ (P＜0.01);TLR4、NF-κB和TNF-α mRNA水平分别减少了61.48％、64.51％争50.34％(P＜0.01);ELISA结果显示,TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白水平分别减少了57.82％、46.17％和61.5％(P＜0.01).免疫组化结果表明,丁酸钠处理组TLR4表达水平较模型组明显降低,其中以高剂量组为显著.结论 丁酸钠对内毒素血症小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与下调TLR4的表达有关.
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丁酸钠对肝癌HepG2细胞株Bcl-2表达的影响
目的:研究丁酸钠(NaB)引起HepG2细胞凋亡的作用及其分子机制.方法:用不同浓度丁酸钠处理HepG2细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA的表达丰度;Hochest3342核染色后观察HepG2细胞核凋亡形态的变化;原位切口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果:丁酸钠在mRNA水平明显抑制Bcl-2基因的转录;荧光显微镜下可见丁酸钠处理后细胞核出现高度凝聚、边缘化,并可见凋亡小体出现;TUNEL法证明出现细胞凋亡.结论:丁酸钠通过下调Bcl-2的转录和表达,诱导肝癌HepG2细胞的凋亡.
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丁酸钠下调CNE2鼻咽癌细胞IFN-γ诱导的吲哚胺2,3双加氧酶表达并促进其乙酰化和泛素化
目的 探讨丁酸钠(NaB)对CNE2鼻咽癌细胞γ干扰素(IFN-γ)诱导的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)表达调控及分子机制.方法 采用Western blot法、免疫共沉淀等方法检测鼻咽癌细胞内IDO的表达及乙酰化、泛素化修饰情况.结果 与单独加IFN-γ对照组相比,Western blot结果显示,IFN-γ和NaB联合处理的CNE2细胞IDO蛋白表达增加;免疫共沉淀实验结果表明,联合处理CNE2细胞乙酰化IDO水平和泛素化IDO水平均明显增高;与NaB和IFN-γ联合处理的CNE2细胞相比,NaB、IFN-γ和硼替佐米(bortezomib)联合处理的CNE2细胞的IDO表达量增加.结论 NaB能以剂量依赖性的方式下调鼻咽癌细胞内IFN-γ诱导的IDO表达,IFN-γγ和NaB联合处理促进IDO的乙酰化和泛素化.
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丁酸钠对人胃癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用机制研究
目的:研究丁酸钠对人胃癌细胞系生长的抑制和诱导凋亡作用,探讨其作用机制.方法:以不同浓度的丁酸钠对体外培养的人胃癌细胞系SGC-7901进行处理,应用MTT法检测对细胞生长的抑制情况;应用免疫组化法观察对凋亡相关基因P21WAF1表达的影响.结果:不同浓度的丁酸钠均可抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制率具有剂量和时间依赖性;P21WAF1在丁酸钠作用的细胞中的表达高于未进行处理的细胞.结论:丁酸钠可抑制体外培养的人胃癌细胞生长,诱导癌细胞发生凋亡.
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丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡的研究
目的:观察丁酸钠诱导培养的乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响.方法:用终浓度分别为0、1.25、2.5、5.0、10.0mmol/L的丁酸钠处理MCF-7细胞48h,用MTT比色法分析丁酸钠对细胞的抑制率,倒置显微镜观察细胞生长情况的改变,流式细胞术,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡.结果:不同浓度的丁酸钠对MCF-7细胞有明显的抑制作用,光镜下观察到细胞贴壁性随作用时间延长而下降;流式细胞术检测不同浓度丁酸钠处理细胞的凋亡率分别为4.8%、9.4%、26.1%和51.9%;TUNEL检测可见阳性细胞胞体缩小,核固缩,呈棕黄色或褐色颗粒;DNA琼脂糖凝胶电泳检测到10mmol/L处理细胞出现"DNA ladders".结论:丁酸钠可以诱导MCF-7细胞发生凋亡.
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HMGB1在大肠癌组织中的表达及其意义
目的:研究大肠癌组织中高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)的表达,并探讨其与癌分化程度、肿瘤大小以及转移的关系.加入不同浓度丁酸钠后,观察SW620细胞中HMGB1的表达情况,以及不同药物浓度对癌细胞增殖活性的影响,从而探讨HMGB1与大肠癌细胞增殖活性的关系.方法:免疫组织化学法检测70例大肠癌组织、70例癌旁组织、70例正常大肠组织HMGB1蛋白表达;培养SW620细胞,MTT法检测SW620细胞增殖情况,计算抑制率,绘制抑制率曲线;免疫细胞化学法检测HMGB1蛋白表达情况.结果:HMGB1在大肠癌中呈强阳性表达(80.0%),在癌旁组织中仅有微弱表达,正常大肠组织无表达;HMGB1的阳性率与癌分化程度无关(P＞0.05);与肿瘤的大小、浸润、淋巴及血道转移呈正相关(P＜0.01);加入不同浓度丁酸钠后,对SW620细胞生长均有抑制作用,且丁酸钠的抑制作用与药物浓度和作用时间呈现一定的正相关;同时,随着药物浓度的增加,HMGB1的表达也有所下降.结论:HMGB1在大肠癌中呈强阳性表达,HMGB1与大肠癌的转移与增殖有着密切的联系,可作为大肠癌生长、转移及预后的重要判定指标.
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丁酸钠对大肠癌HT-29细胞形态及其生长曲线的影响
目的观察体外培养的HT-29细胞在丁酸钠作用后形态学及生长曲线的变化.初步探讨丁酸钠对结肠癌细胞的凋亡诱导作用.方法利用相差显微镜、可变投射显微镜、电镜观察细胞形态学变化,MTT法检测HT-29细胞生长情况.结果丁酸钠作用后的HT-29细胞形态发生改变,表现为细胞体积变小、形状变圆,细胞核固缩,脱壁细胞逐渐增多,细胞膜突起减少 ,核内染色质呈团块状积聚于核膜下,并可见凋亡小体.丁酸钠2.5、5和10mM对HT-29细胞生长均有抑制作用,并呈浓度、时间依赖性.结论细胞形态学的变化初步显示了丁酸钠对结肠癌细胞具有凋亡诱导作用.
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丁酸钠对牙周膜干细胞增殖能力的影响
目的:探究丁酸钠(NaB)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖能力的影响.方法:体外分离培养hPDLSCs,分别采用含NaB终浓度为0、40、200、1 000、5 000 μmol/L的NaB α-MEM处理72 h后,倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态改变;MTT法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞仪检测不同浓度NaB对细胞周期的影响.结果:40、200 μmol/L的NaB对hPDLSCs的形态均无明显影响,而当NaB浓度为1 000、5 000 μmol/L时,其细胞数目均较对照组明显减少,细胞形态也发生了明显变化,表现为扁平、伸长或多角状,且浓度越大变化越明显;当NaB浓度低于200 μmol/L时对hPDLSCs的增殖能力均无明显影响(P＞0.05),而当NaB浓度为1 000、5 000 μmol/L时,hPDLSCs增殖能力明显被抑制(P＜0.05),其中5 000 μmol/L组的抑制作用强(P＜ 0.05);40 ～5 000 μmol/L NaB作用于hPDLSCs后,浓度依赖性地增加G2/M期细胞的比例.结论:一定浓度范围的NaB能影响hPDLSCs的形态和能力,使细胞周期停滞于G2/M期.
关键词： 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 组蛋白去乙酰化酶 丁酸钠 增殖能力 -
丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中NDRG2的表达及意义
目的:研究丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中抑癌候选基因NDRG2的表达特点及意义.方法:采用丁酸钠诱导结肠癌HT29,SW480,SW620细胞分化,通过碱性磷酸酶(AKP)测定和透射电镜评价结肠癌细胞的分化程度,应用Real time BT-PCR和Western Blot法测定不同分化点(0,1,2,3,4,5,6 d)NDRG2 mRNA和蛋白的表达特点.结果:经丁酸钠作用24 h-6 d后,结肠癌细胞中NDRG2基因mRNA和蛋白水平均显著高于对照组水平.结论:丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中NDRG2表达显著升高,提示NDRG2是参与结肠癌细胞分化的相关基因.
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丁酸钠对食管癌细胞增殖的影响
目的:观察丁酸钠对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期及NDRG1蛋白表达的影响.方法:采用0.5 mmol/L丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞,用MTT法检测处理不同时间时细胞增殖的变化,采用流式细胞仪检测细胞周期的变化,采用免疫组化方法检测NDRG1蛋白表达的变化.结果:①MTT实验结果显示,丁酸钠作用1～5 d时各组吸光度均低于对照组,经统计学处理差异有显著性意义(P＜0.05);丁酸钠不同作用时间的细胞增殖抑制率分别为:1 d组21.2%,3 d组23.5%,5 d组25.6%,且随作用时间延长抑制率升高.②细胞周期检测结果为(%):G1期细胞:对照组57.00±1.10,1 d组63.10±0.78,3 d组67.20±0.58,5 d组69.70±0.64;S期细胞:对照组25.30±0.27,1 d组20.20±0.66,3 d组20.40±0.82,5 d组20.90±0.50;M期细胞:对照组17.20±1.00,1 d组16.70±0.69,3 d组12.10±0.41,5 d组9.40±0.23.各组G1期结果分别与对照组结果比较,差异有显著性意义(P＜0.01).③丁酸钠可上调NDRG1蛋白表达水平,随作用时间增长蛋白表达增强.结论:丁酸钠可抑制食管癌细胞增殖,这一作用可能与NDRG1蛋白表达增加有关.
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丁酸钠对大鼠放射性肠损伤的保护作用
目的 构建放射性肠损伤大鼠模型,观察丁酸钠对肠损伤的保护作用.方法 SPF级成年SD大鼠90只,分为对照组、模型组和丁酸钠组,每组各30只.除对照组外,造模大鼠暴露腹部上至胸骨剑突下至耻骨联合,VarianClinic600直线加速器6MV高能X射线定位照射,其余部位用5 cm厚铅砖屏蔽,单次照射,总吸收剂量10 Gy.造模前3d,丁酸钠组SD大鼠ig 40 mg/kg丁酸钠,1次/d,照射后继续给药3d,对照组和模型组ig生理盐水.多普勒血流仪检测肠黏膜血流量;FITC荧光标记的葡聚糖检测肠黏膜血管通透性;ELISA法检测外周血浆二胺氧化酶(DAO)活性和肠组织一氧化氮(NO)水平;肠黏膜组织切片HE染色,显微镜下测量肠黏膜绒毛高度、黏膜厚度.结果 丁酸钠组造模成功率为83.3％,显著低于模型组的100％ (P＜0.05).模型组和丁酸钠组肠黏膜血流量、黏膜绒毛高度和黏膜厚度显著低于对照组(P＜0.05、0.01),丁酸钠组肠黏膜血流量、黏膜绒毛高度和黏膜厚度显著高于模型组(P＜0.05).模型组和丁酸钠组肠黏膜葡聚糖、DAO和NO显著高于对照组(P＜0.05),丁酸钠组肠黏膜葡聚糖、DAO和NO显著低于模型组(P＜0.05).结论 丁酸钠可以增加放射性肠损伤大鼠肠黏膜血流量,降低NO表达,发挥肠黏膜保护作用.
