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色氨酰tRNA合成酶(TTS)的免疫调节作用
近年来,在自身免疫性疾病、移植排斥和抗肿瘤免疫中,免疫系统的过度激活和免疫耐受逐渐成为研究关注的热点.大量研究证实,吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶,其高表达在抑制T细胞免疫、诱导肿瘤免疫耐受中发挥重要的调节作用[1-2].研究显示,另一种色氨酸代谢酶——色氨酰tRNA合成酶(tryptophanyl-tRNA synthetase,TTS,TrpRS)能够催化色氨酸与其对应的tRNA结合,增加细胞内色氨酰tRNA储备,对抗IDO介导的色氨酸消耗,参与机体的免疫调节过程,与多种自身免疫性疾病及恶性肿瘤的发生、发展和预后密切相关,但其具体的调控机制尚未完全阐明.现就TTS参与的色氨酸代谢过程及其免疫调节作用作一综述.
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小鼠肝癌模型中CD4+CD25+调节性T细胞数量的改变和Foxp3的表达
调节性T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)是一类具有独特免疫调节功能的T淋巴细胞亚群.近年来,国内外认为Treg是形成肿瘤免疫耐受的关键细胞.Foxp3是一种新发现的转录因子,在Treg细胞上特异性表达,且在Treg细胞的发育和功能卜是必需的[1].
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吲哚胺2,3二氧化酶与肿瘤免疫耐受
肿瘤免疫耐受是一个获得性免疫应答的过程,许多机制参与调节.吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)是体内肝外色氧酸沿犬尿氨酸代谢的限速酶.其通过诱导"色氨酸删除"环境、色氨酸代谢产物的细胞毒性作用和调节Tregs等抑制T淋巴细胞增殖、活化,共同诱导肿瘤免疫耐受.抑制IDO可为今后肿瘤临床治疗提供新思路和方法.
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Lewis肺癌荷瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及髓样抑制细胞与肿瘤生长的关系
为研究Lewis肺癌荷瘤鼠CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞和Grl+CD11b+髓样抑制细胞(Gr1+CD11b+MDSC)比例变化特点,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用,建立了Lewis肺癌模型,观测肿瘤体积变化,绘制肿瘤体积变化曲线;采用流式细胞技术分别于模型建立第0、14、21天检测脾脏、肿瘤引流淋巴结两种细胞比例;荧光定量RT-PCR检测荷瘤小鼠肺组织Foxp3 mRNA的表达.结果表明,随着肿瘤的进行性生长,脾脏及肿瘤引流淋巴结CD4+CD25+Foxp3+Treg、Gr1+CD11b+MDSC比例均明显升高,其中以脾脏的变化为显著.在荷瘤第21天时,脾脏中两者比例分别为16.97%±1.86%,28.64%±2.32%,与正常对照组比较具有显著的意义.而在肿瘤引流淋巴结中两者细胞的比例分别为18.84%±3.48(P<0.01),3.46%±0.56(P<0.01).同时RT-PCR结果显示,Foxp3 mRNA在荷瘤鼠肺转移灶组织明显高于正常对照组(P<0.01);结论:CD4+CD25+Treg与Gr1+CD11b+MDSC诱导的肿瘤免疫抑制与肿瘤生长及转移密切相关.
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IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测
目的构建pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS两个荧光素酶报告基因载体,并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的启动序列ISRE4(4个串联的ISRE序列)和GAS7(7个串联的GAS序列),与pGL3-Enhancer连接成重组体pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体,在IFN-γ的诱导下,能启动细胞内荧光素酶的表达。结论 pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7的荧光素酶报告基因载体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。
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丁酸钠下调CNE2鼻咽癌细胞IFN-γ诱导的吲哚胺2,3双加氧酶表达并促进其乙酰化和泛素化
目的 探讨丁酸钠(NaB)对CNE2鼻咽癌细胞γ干扰素(IFN-γ)诱导的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)表达调控及分子机制.方法 采用Western blot法、免疫共沉淀等方法检测鼻咽癌细胞内IDO的表达及乙酰化、泛素化修饰情况.结果 与单独加IFN-γ对照组相比,Western blot结果显示,IFN-γ和NaB联合处理的CNE2细胞IDO蛋白表达增加;免疫共沉淀实验结果表明,联合处理CNE2细胞乙酰化IDO水平和泛素化IDO水平均明显增高;与NaB和IFN-γ联合处理的CNE2细胞相比,NaB、IFN-γ和硼替佐米(bortezomib)联合处理的CNE2细胞的IDO表达量增加.结论 NaB能以剂量依赖性的方式下调鼻咽癌细胞内IFN-γ诱导的IDO表达,IFN-γγ和NaB联合处理促进IDO的乙酰化和泛素化.