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抑瘤素M及其受体在IBD患者中的表达以及与抗TNF治疗中耐受反应发生的关系分析
目的 研究抑瘤素M(OSM)及其受体(OSMR)在IBD患者中的表达以及与抗TNF治疗中耐受反应发生的关系.方法 选取我院接受的61例溃疡性结肠炎患者,采用实时荧光定量PCR方法,分别检测患者炎症程度不同的结肠部位的OSM和OSM受体的表达情况;所有患者均接受英夫利昔单抗进行抗TNF治疗,观察在治疗过程中OSM和OSMR表达情况与抗TNF治疗耐受反应出现的相关性.结果 与健康对照组相比,OSM和OSMR在患者非炎症部位结肠组织表达无显著性差异(P>0.05),炎症部位和溃疡部位结肠组织表达差异有统计学意义(P<0.01).此外,OSM和OSMR的表达与抗TNF治疗过程中耐受反应的出现呈正相关.结论 OSM和OSMR在IBD患者的结肠组织中高表达,且其表达量与抗TNF治疗耐受反应的出现密切相关.OSM和OSMR对IBD患者抗TNF治疗中耐受反应发生的诊断具有一定的潜在应用价值.
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抑瘤素M促进小鼠诱导多能干细胞向心肌分化
目的 以小鼠诱导多能干细胞(miPSCs)为模型探讨抑瘤素M(OSM)在心肌细胞分化中的作用.方法 用拟胚体分化法,在分化前中期(0~6 d)加入OSM培养分化15 d,实时荧光定量PCR、Western blot与免疫荧光染色法检测心肌细胞特异性标志物.结果 OSM诱导miPSCs分化为心肌细胞的佳浓度为20 pmol/L,此时心肌肌钙蛋白T (cTnT)表达为对照组的7倍(P<0.05);诱导组心肌细胞特异性基因和蛋白全面高于对照组(P<0.05);心肌特异性标志物cTnT染色显阳性,且与对照组相比,诱导组cTnT阳性细胞比率明显增高(P<0.05).结论 抑瘤素M促进了miPSCs向心肌细胞的高效分化,为干细胞的心肌分化提供了一种有效的分化策略.
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Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响
目的 构建表达人白血病抑制因子(LIF)和抑瘤素M(OSM)双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞,并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34+.造血干/祖细胞体外增殖和分化的影响.方法 以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ为基础,将OSM基因片段酶切后插入,构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ -OSM.将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化,获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoter△-OSM,通过包装,收获重组腺病毒(AdLIF-OSM).将重组腺病毒感染饲养层细胞,经RT-PCR、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达；体外与CD34+造血干/祖细胞共培养后,通过Transwell法和细胞计数检测,比较各实验组干/祖细胞体外扩增与分化情况.结果 测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确；转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达；外源LIF和OSM基因在造血干/祖细胞体外培养中能够发挥作用.结论 成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体(Ad-LIF-OSM),Ad-LIF-OSM在造血干/祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,并延缓其分化.
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抑瘤素M与肝脏再生、肝脏疾病关系的研究进展
抑瘤素M(oncostatin M,OSM)是一种多功能细胞因子,属白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)家族成员,在这些所有成员中,OSM与白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)在结构和功能上为接近.OSM有Ⅰ型和Ⅱ型两种类型受体(OSMreceptor,OSMR),OSM通过与受体结合启动JAK-STAT及MAPK信号通路从而介导其生物学作用.OSM除具有抑制某些肿瘤细胞生长功效外,还可作用于其他多种细胞,参与众多的生理病理过程,在多种疾病中发挥重要作用,包括调节炎症反应、刺激造血、调节胆固醇代谢、保护神经系统等.新近研究表明,在肝脏疾病中,OSM参与肝脏再生,并与病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化、肝细胞癌等的发生发展和转归密切相关.此文就OSM与肝脏疾病关系的研究进展进行综述.
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重组腺病毒载体介导HOSM基因对肝癌细胞体外增殖的抑制作用
目的:构建含人抑瘤素M(human oncostatin M,HOSM)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体AD-HOSM,观察其对人肝癌细胞株HepG2在体外生长抑制情况.方法:通过同源重组方法构建含HOSM基因的缺陷型重组腺病毒载体AD-HOSM,用报告基因AD-GFP检测腺病毒的对人肝癌细胞系的转染效率:人肝癌细胞株HepG2转染含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD-HOSM后,用RT-PCR法检测外源HOSM基因在其中的表达;台盼蓝染色、细胞计数法检测AD-HOSM对HepG2的体外增殖抑制情况.结果:成功构建了重组腺病毒载体AD-HOSM,AD-HOSM对肝癌细胞HepG2有较高的转染效率,并且转染效率与病毒的剂量呈正相关.AD-HOSM感染HepG2细胞48h,HOSM基因在转染细胞能有效的表达.体外试验示,AD-HOSM转染的细胞的增殖却受到明显的抑制.结论:重组腺病毒介导HOSM表达能有效抑制HepG2在体外的增殖,提示重组腺病毒介导的HOSM基因治疗可能成为肝癌治疗的候选方案.
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抑瘤素M的研究进展
动脉粥样硬化（ AS）是心血管疾病重要的发病基础，是涉及多方面的复杂病理过程，主要病理机制是慢性血管炎症反应、平滑肌细胞增殖与迁移、细胞凋亡及新血管形成等，许多与炎症相关的标志物已被作为监测AS和心血管疾病风险的新靶点，其中抑瘤素M（ OSM）在AS中的作用逐渐受到重视。现已证实OSM除了在黑色素瘤、肝脏再生和慢性炎症如风湿性关节炎、肺和皮肤炎性疾病中具有生物效应，在AS疾病中也发挥作用，本文对OSM在AS发生发展中的作用进行了综述。
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抑瘤素M在高血糖致人主动脉平滑肌细胞增殖中的作用
目的 研究高血糖对人巨噬细胞中抑瘤素M表达的影响以及抑瘤素M对人主动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法 采用佛波酯孵育人单核/巨噬细胞系THP-1细胞,诱导其分化为巨噬细胞.应用人细胞因子抗体芯片筛选出受高血糖(15 mmol/L)调控的人巨噬细胞源性细胞因子,并经Western blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)技术验证.运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)明确人主动脉内皮细胞、平滑肌细胞及巨噬细胞中是否存在抑瘤素M受体GP130-OSMRβ二聚体及GP130-LIFR二聚体表达.运用细胞增殖实验(XTT法)研究抑瘤素M对人主动脉平滑肌细胞增殖的影响.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 佛波酯孵育48 h可诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞.细胞因子芯片结果显示高血糖可上调抑瘤素M在巨噬细胞中的表达,并为Western blot及ELISA所证实.RT-PCR显示人主动脉内皮细胞、平滑肌细胞及巨噬细胞均可表达GP130-OSMRβ二聚体及GP130-LIFR二聚体.XTT法证实抑瘤素M可促进血管平滑肌细胞增殖,与0μg/L抑瘤素M(吸光度为0.468±0.032)相比,5μg/L(吸光度为0.503±0.026)、10μg/L(吸光度为0.520±0.027)、20μg/L抑瘤素M(吸光度为0.513±0.026)人主动脉平滑肌细胞增殖均明显增加(F=10.40,P<0.05).结论 高血糖可促进巨噬细胞中抑瘤素M的表达和分泌.抑瘤素M通过与人主动脉平滑肌细胞中的受体结合而促进血管平滑肌细胞的增殖,进而部分参与糖尿病大血管病变的发生发展.
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抑瘤素M在心肌再生中的功能机理
目前心血管疾病已然成为中国居民死亡的重要因素.由于人的心肌受损后不能再生,因而对于罹患心梗、心衰等疾病的患者来说,诱导受损心肌再生是一种潜在的治疗方案.若能使受损心肌再生从而大限度地恢复心脏结构和生理上的完整性,必会为广大患者带来福音.有研究报道抑瘤素M能够促进心肌细胞分泌促使巨噬细胞向心肌受损位置迁移的胰岛再生源蛋白3β并可以介导心肌的去分化.这就需要我们深入研究OSM的作用机理,了解OSM是通过怎样的方式使心肌再生的.
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重组腺病毒载体介导人OSM 基因对胰腺癌细胞增殖的抑制作用及对裸鼠致瘤性的影响
目的构建了含人抑瘤素M(human oncostatin M,hosm)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,观察其对胰腺癌细胞株BxPC3在体外生长抑制情况及在裸鼠致瘤性改变的作用,为胰腺癌的基因治疗提供参考.方法用含hosm基因的缺陷型腺病毒载体转染人胰腺癌细胞株,用RT-PCR法检测外源hosm基因在其中的表达;苔盘蓝染色、细胞计数法检测ad-hosm对BxPC3的体外增殖抑制情况;裸鼠皮下接种转染ad-hosm的BxPC3 ,观察其对肿瘤形成率的影响.结果 hosm基因在转染细胞能有效的表达.体外试验示ad-hosm能明显抑制BxPC3的生长,ad-hosm能抑制BxPC3在裸鼠中的成瘤作用.结论重组腺病毒介导hosm基因表达能有效抑制BxPC3在体外、体内的增殖,提示重组腺病毒介导的hosm基因治疗可能成为胰腺癌治疗的侯选方案.
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外伤性脑出血患者术后病原菌感染对神经生长因子及抑瘤素M水平的影响研究
目的：分析外伤性脑出血患者术后感染病原菌分布，并探讨感染后患者血清中神经生长因子和抑瘤素M水平的变化，为临床治疗提供参考依据。方法对2011年2月－2014年7月诊治的160例外伤性脑出血感染患者设为感染组，分析患者感染后血清中神经生长因子和抑瘤素M 水平的变化，同期选取健康体检者160名为对照组，外伤性脑出血未感染患者160例为未感染组，对比3组抑瘤素M变化，数据采用SPSS 20．0软件进行统计分析。结果160例感染患者主要感染部位以呼吸道感染为主，共33例占20．63％；共分离病原菌160株，以革兰阴性菌为主，共83株占51．88％；感染病原菌后患者神经生长因子、表皮生长因子、转化生长因子及抑瘤素M水平明显降低，且与对照组和未感染组患者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论外伤性脑出血患者术后容易感染，且感染后患者血清中神经生长因子及抑瘤素M水平明显降低。
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抑瘤素M在毕赤酵母中的表达及活性鉴定
目的：构建抑瘤素M (oncostatin M，OSM)的酵母表达体系。方法：将人OSM cDNA连入pPIC9K酵母表达载体，转染毕赤酵母(Pichia pastoris)，用MD和MM营养缺陷型培养基筛选具有正确表型的重组转化子，用RNA印迹法和蛋白质印迹法鉴定酵母转化菌株中OSM mRNA转录和OSM相对分子质量。MTT法鉴定OSM蛋白对人黑素瘤细胞生长的抑制活性。结果：构建的毕赤酵母体系可实现人OSM分泌表达，表达量占外分泌蛋白的70%以上。表达蛋白相对分子质量约30 000，对黑素瘤细胞生长可产生明显抑制作用。结论：OSM的酵母分泌表达体系表达量可观，表达蛋白集中于培养液上清，便于纯化，是日后进行OSM大规模制备的可行途径。
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抑瘤素M与糖尿病及其血管并发症
抑瘤素M(OSM)是白细胞介素-6超家族成员,是一种多功能的细胞因子,参与细胞生长、分化、炎性反应、造血过程以及组织重塑等多种生物学过程.近年来研究发现,OSM与糖尿病及其血管并发症密切相关,确切的机制尚不清楚,可能是通过自分泌和旁分泌的方式,促进自身和其他细胞因子的分泌,参与胰岛素抵抗、肥胖等的发生,从而导致糖尿病及其血管损伤.
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抑瘤素M通过诱导衰老抑制肝癌细胞增殖
目的:通过分析抑瘤素M(oncostatin M,OSM)对肝癌细胞生长的效应,研究其影响细胞增殖的分子机制.方法:OSM处理SMMC-7721和HepG2肝癌细胞系,观察细胞的增殖速率和形态变化,结合特异性β-半乳糖苷酶染色和细胞周期分析,研究OSM是否通过诱导肝癌细胞进入衰老状态来抑制其增殖;进一步通过监测细胞周期抑制蛋白p16、p21、p27和癌基因c-Myc的表达变化,分析OSM诱导细胞衰老的原因.结果:OSM可以抑制肝癌细胞系生长,且抑制率呈现一定剂量依赖性;细胞形态变化和β-半乳糖苷酶染色进一步证实OSM可诱导细胞衰老.细胞周期分析表明OSM阻滞肝癌细胞于G0/G1期,并伴随p21和p27周期抑制蛋白的表达增高.后,通过分析STAT3信号途径下游癌基因c-Myc的转录与蛋白水平,表明OSM可能是通过癌基因的激活而诱导细胞的衰老.结论:由癌基因激活而导致的细胞衰老,是机体的一种防御机制.OSM通过激活STAT3信号途径、上调癌基因c-Myc表达的同时,也加速了细胞的衰老,从而终表现为对肝癌细胞增殖的抑制作用.
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抑瘤素M对人胃癌细胞迁移及COX-2表达的影响
研究抑瘤素M(oncostatin M,OSM)对人胃癌细胞株MKN-28体外侵袭能力和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响,探讨其在胃癌浸润转移中的作用及可能机制.运用Transwell小室法检测OSM对胃癌细胞迁移的影响;将靶向COX-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)瞬时转染胃癌细胞,采用蛋白印迹法(western blot)和MTT法分析转染后胃癌细胞COX-2蛋白表达情况和细胞生长情况;荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分别检测25 ng/ml的OSM对胃癌细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响.研究发现,25 ng/ml OSM能促进胃癌细胞的迁移(P＜0.05).用针对COX-2的siRNA转染胃癌细胞后,COX-2蛋白表达降低,细胞生长变慢.经25 ng/ml OSM作用的胃癌细胞COX-2mRNA及蛋白的表达升高(P＜0.05).结果提示,一定剂量的OSM可能通过诱导COX-2的表达,促进胃癌细胞侵袭和转移.
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抑瘤素及其受体在高脂饮食大鼠肾组织中的表达和意义
目的:探讨抑瘤素M(OSM)及其受体(OSMR)在高脂饮食大鼠肾组织中的表达和意义. 方法:随机将30只SD大鼠分为对照组(n=15)和高脂组(n=15).对照组以普通饲料喂养,高脂组以高脂饲料喂养,12周时检测大鼠24h尿蛋白定量、尿肌酐,计算内生肌酐清除率(Ccr),检测血清总胆固醇(CH)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FPG).放射免疫法测空腹胰岛素水平(FINS),ELISA法测血清OSM水平;光镜观察肾组织病理改变,免疫组化法观察肾组织OSM、OSMR的表达,Western Blot检测肾组织OSM及OSMR蛋白表达. 结果:12周时,与对照组相比高脂组大鼠血脂水平、血糖、胰岛素抵抗指数(IRI)、24h尿蛋白定量、血清OSM浓度明显升高(P＜0.05),Ccr无明显变化(P＞0.05).光镜下高脂组肾小球系膜细胞及基质稍增多,肾小管上皮细胞淡染、浊肿、体积增大、胞质增多,未见明显的空泡颗粒.免疫组化及Western Blot均显示高脂组较对照组肾组织OSM及OSMR表达明显增多,高脂组血清OSM浓度和24h尿蛋白定量、CH、TG及IRI呈高度正相关(P＜0.01),与FPG有相关性(P＜0.05). 结论:炎症因子OSM及OSMR在高脂饮食大鼠肾脏表达明显增多,可能通过促进炎症反应、介导胰岛素抵抗形成参与脂质肾损害的病理过程.
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STAT蛋白在抑瘤素M诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用
目的 探讨STAT蛋白在抑瘤素M(oncostatin M,OSM)诱导的肾小管上皮细胞表型转化及分泌功能中的作用.方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞,分为对照组(C组)、OSM(20 ng/ml)组(OSM组)、OSM+雷帕霉素(100 ng/ml)组(OSM+R组)和OSM+氟达拉滨(100 ng/ml)组(OSM+F组).培养72 h后收集细胞及上清液,透射电镜观察细胞超微结构改变;免疫细胞化学和Western blot法检测CK18、d-SMA蛋白表达;采用Western blot法检测信号转导及转录激活因子(STAT1、STAT3、p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验测定细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的分泌.结果 与对照组相比,细胞经OSM刺激后CK18的表达下调,而α-SMA的表达上调并分泌过多的细胞外基质蛋白Col Ⅰ和FN;此外,OSM还可磷酸化激活STAT1和STAT3.OSM的上述作用可被雷帕霉素和氟达拉滨所阻断.结论 OSM具有促纤维化特性,而STAT1和STAT3信号活化在OSM介导的纤维化进程中发挥同等重要的作用.
关键词： 肾小管上皮细胞 抑瘤素M 信号转导及转录激活因子 上皮-间质转化 -
SOCS-3对OSM诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 观察细胞因子信号传导抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling,SOCS-3)对抑瘤素M(oncostatin M,OSM)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响.方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),用Lipofectamine 2000分别转染pCR3.1/SOCS-3表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆,应用OSM(10 ng/ml)进行刺激.培养48 h后收集细胞及上清液,采用Western blot检测SOCS-3、CK18、α-SMA和磷酸化信号传导及转录激活因子3(phospho-Signal transducers andactivators of transcription 3,p-STAT3)的表达;采用酶联免疫吸附实验测定细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的分泌;采用RT-PCR检测SOCS-3 mRNA的表达.结果 与对照组相比,OSM刺激组肾小管上皮细胞α-SMA和p-STAT3蛋白表达增加,细胞培养上清液Col Ⅰ和FN的分泌增加,而CK18蛋白表达减少.SOCS-3过表达能抑制OSM刺激引起的α-SMA和p-STAT3蛋白表达,减少Col Ⅰ和FN的分泌,同时能够部分恢复OSM刺激引起的CK18蛋白表达.结论 SOCS-3过表达能抑制OSM诱导的肾小管上皮细胞转分化,此过程可能与p-STAT3的磷酸化受抑有关.
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重组腺病毒介导HOSM基因在胰腺癌细胞中的表达
目的重组腺病毒介导HOSM基因转染胰腺癌细胞后,用RT-PCR方法检测外源性HOSM基因的表达情况.方法构建了含人抑瘤素M(OSM,oncostatin M)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体ad-HSOM,以ad-HOSM转染胰腺癌细胞株后,提取细胞的总RNA,用RT-PCR法检测HOSM基因在胰腺癌中的表达.结果 HOSM基因在转染细胞中有效的表达.结论 RT-PCR法能有效的检测外源性HOSM基因在胰腺癌中的表达,为重组腺病毒介导HOSM基因用于胰腺癌治疗的实验研究奠定了基础.
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重组抑瘤素M抑制肿瘤细胞增殖转移的研究
目的:考察重组表达的抑瘤素M (oncostatin M, OSM)对肿瘤细胞增殖转移的抑制能力.方法:在大肠杆菌中重组表达了人抑瘤素M,并通过MTT检测实验、软琼脂克隆形成抑制实验、粘附抑制实验、细胞移动能分析实验和浸润杯实验来考察重组hOSM对高转移人肺腺癌细胞95-D增殖和侵袭转移过程的抑制能力.结果:重组hOSM在上述体外模型中能以较低浓度有效抑制95-D肿瘤细胞的增殖和转移.结论:原核表达的人抑瘤素M在对肺癌的临床治疗中具有潜在的应用价值.
关键词： 抑瘤素M 高转移人肺腺癌细胞95-D 浸润转移 肿瘤 -
抑瘤素M在膝关节骨关节炎中的表达
目的 检测抑瘤素M(OSM)在骨关节炎(OA)和正常滑膜组织中的表达差异,探讨OSM在骨关节炎发病中的作用.方法 术中留取33例OA严重病变组、10例OA轻微病变组、8例正常对照组的滑膜组织.采用实时定量PCR技术检测各组膝关节滑膜组织中OSM的表达,免疫组织化学法检测各组滑膜组织中OSM的分布与表达.结果 在膝关节滑膜组织中,OA严重病变组、OA轻微病变组和正常对照组均能检测出OSM阳性表达且与病情严重程度呈正相关,差异有统计学意义(P＜0.05).OA轻微病变组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 OA患者滑膜细胞高表达OSM与病情相关.OSM在骨关节炎的发病过程中起到重要作用.
