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抑瘤素M促进小鼠诱导多能干细胞向心肌分化
目的 以小鼠诱导多能干细胞(miPSCs)为模型探讨抑瘤素M(OSM)在心肌细胞分化中的作用.方法 用拟胚体分化法,在分化前中期(0~6 d)加入OSM培养分化15 d,实时荧光定量PCR、Western blot与免疫荧光染色法检测心肌细胞特异性标志物.结果 OSM诱导miPSCs分化为心肌细胞的佳浓度为20 pmol/L,此时心肌肌钙蛋白T (cTnT)表达为对照组的7倍(P<0.05);诱导组心肌细胞特异性基因和蛋白全面高于对照组(P<0.05);心肌特异性标志物cTnT染色显阳性,且与对照组相比,诱导组cTnT阳性细胞比率明显增高(P<0.05).结论 抑瘤素M促进了miPSCs向心肌细胞的高效分化,为干细胞的心肌分化提供了一种有效的分化策略.
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维生素C明显提高小鼠诱导多能干细胞分化为心肌细胞的诱导效率
目的:将维生素C作为诱导剂,观察其对小鼠诱导多能干细胞(miPSC)分化为心肌细胞效率的影响,寻找一种更安全、更高效的诱导方法.方法:复苏miPSC,传代培养后,利用悬滴培养法使miPSC形成拟胚体(EBs),用含维生素C的分化培养基对其进行诱导分化,对照组不添加诱导剂,记录两组拟胚体出现搏动的时间、数量,计算分化率,观察维生素C作为诱导剂,对miPSC分化为心肌细胞效率的影响.结果:在用含10-4mmol/mL维生素C的分化培养基时,大概有62.5％的拟胚体出现搏动,而不加任何诱导剂组约有8.3％的拟胚体出现搏动.各组搏动拟胚体cTnT,a-actinin免疫染色阳性.结论:维生素C作为一种诱导剂,能显著提高miPSC分化为心肌细胞的效率,并且心肌特异性蛋白cTnT,a-actinin染色阳性,应用维生素C作为诱导剂,诱导miPSC向心肌细胞分化是一种非常理想的诱导方法.
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钠钙交换体启动子促进诱导多能干细胞向心肌细胞转化
背景：诱导多能干细胞治疗缺血性心脏病被认为是极具前景的方法，但目前仍未找到一种理想的诱导方式。目的：探讨钠钙交换体(NCX1)启动子诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的作用。
方法：构建含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒质粒，使用ViraPowerTM慢病毒包装系统共转染293FT细胞。收集病毒测定病毒滴度后感染小鼠诱导多能干细胞，并使用嘌呤霉素进行筛选。观察胚状体数量以及诱导多能干细胞的分化效率，使用RT-PCR、免疫荧光分析法检测心肌特异标记物。
结果与结论：成功构建了含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒，感染小鼠诱导多能干细胞后使用流式细胞仪分选NCX1+/GFP+细胞。与NCX1-/GFP-细胞相比，NCX1+/GFP+细胞在4 d即出现细胞分化和跳动，NCX1+细胞GATA4/MEF2c/Nkx2.5基因表达分别是NCX1-细胞的4.2，7.5，2.5倍，免疫荧光显示CX43和心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。结果表明，钠钙交换体1启动子可以促进小鼠诱导多能干细胞向心肌细胞分化。 -
Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系的建立及鉴定
[目的]建立Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系(iPSC).[方法]通过组织块贴壁法培养Cdyl-/-的胚胎成纤维细胞(MEF).将pMx-Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4和hrGVP五种质粒分别转染Plat-E细胞,收集病毒上清,感染Cdyl-/-MEF获得Cdyl-/-iPSC,并对Cdyl-/-iPS细胞的分子标记及体内外分化能力进行检测.[结果]取Cdyl-/-胎鼠皮肤,培养得到增殖旺盛的Cdyl-/-MEF.成功包装逆转求病毒并感染Cdyl-/-MEF,得到胚胎干细胞样的Cdyl-/-iPS细胞.该细胞表达AKP、Oct3/4、SSEA-1,在体内外可以分化为三胚层的细胞类型.[结论]Cdyl-/-iPS细胞具有自我更新和多向分化能力的特性.Cdyl-/-iPS细胞系的建立为研究Cdyl在小鼠早期胚胎发育中的功能提供一个良好的细胞模型.
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小鼠诱导多能干细胞与PHBHHx膜体外共培养的实验研究
目的 探讨小鼠诱导多能干细胞(miPSCs)与聚3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚物(PHBHHx)膜材料的体外相容性.方法 复苏miPSCs,培养传代后,分为两组,一组与PHBHHx膜材料在体外共培养,通过DAPI染色方法观察miPSCs在膜上的粘附情况,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定miPSCs在PHBHHx膜上的增殖,扫描电镜观察细胞与膜材料的复合情况;另一组用传统的培养皿培养miPSCs,CCK-8测定细胞活力.结果 小鼠诱导多能干细胞能够与PHBHHx膜材料良好的粘附和增殖,CCK-8实验测定细胞活力OD值结果显示PHBHHx膜显著大于传统的细胞培养皿培养(0.617±0.019 vs.0.312±0.004,P＜0.05).结论 PHBHHx与miPSCs体外共培养制成的细胞补片表面上有细胞粘附及增殖,与传统的细胞培养皿培养相比,PHBHHx膜培养在细胞的粘附和增殖中具有很大的优势,PHBHHx可作为干细胞治疗多种疾病的支架材料之一.
