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VEGF通过上调CCN2促HUVEC迁移和血管生成
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导的成骨细胞中结缔组织生长因子(CTGF/CCN2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的影响.方法 用Real time PCR法及ELISA法检测VEGF诱导成骨细胞(OSE)中CCN2含量;制备成骨细胞(OSE)上清液;将细胞分为control组、OSE组和VEGF-OSE组(n=3).用小干扰RNA (siRNA)转染法抑制成骨细胞中CCN2的表达;Transwell法检测内皮细胞迁移;Matrigel实验检测管样结构形成能力.结果 VEGF呈时间和剂量依赖性上调成骨细胞中CCN2 mRNA和蛋白的表达;CCN2可促进内皮细胞的迁移和管样结构形成(P＜0.05),当CCN2被siRNA基因沉默或者加入CCN2抗体后,CCN2对内皮细胞迁移和管样结构形成的促进作用均受到明显抑制(P＜0.05).结论 VEGF通过上调成骨细胞中CCN2的表达,促内皮细胞(HUVECs)的迁移和血管生成.
关键词： VEGF CCN2 成骨细胞 人脐静脉血管内皮细胞 血管生成 -
CCN2对人牙髓干细胞增殖及分化的影响
目的：探讨CCN2对体外培养的人牙髓干细胞增殖、分化的影响。方法收集在延安大学附属医院口腔修复科因正畸或阻生而拔除的牙齿，酶消化法获得人牙髓干细胞，光镜下进行形态学观察，免疫荧光法检测细胞表面标志蛋白的表达。取对数生长期牙髓干细胞，加入不同浓度的CCN2将其分为CCN26.25、12.5、25、50、100μg/L组，同时设置阴性对照组；采用噻唑蓝(MTT)法检测CCN2对牙髓干细胞增殖作用的影响，通过碱性磷酸酶及Western blot检测CCN2对牙髓干细胞分化的影响。结果人牙髓干细胞呈集落状生长，免疫荧光法检测STRO-1呈阳性表达，CCN26.25、12.5、25、50、100μg/L组 OD值分别为(0.78±0.05)、(0.91±0.03)、(1.23±0.09)、(1.57±0.11)、(1.61±0.15)，均高于对照组(0.51±0.02)，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；细胞增殖实验表明，CCN2可显著促进牙髓干细胞的增殖；此外，CCN2可促进牙髓干细胞碱性磷酸酶的活性，并呈现浓度±赖关系，CCN26.25、12.5、25、50、100μg/L组OD值分别为(0.32±0.04)、(0.43±0.04)、(0.61±0.03)、(0.79±0.06)及(0.81±0.07)，与对照组(0.19±0.03)比较，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；Western blot结果表明，CCN2可诱导牙本质细胞特异性标志蛋白的表达。结论 CCN2可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞的分化。
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CCN2在椎间盘退变中的作用及分子机制研究进展
结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF/CCN2)是一种细胞间质分泌蛋白,于1991年由Bradham等[1]在人脐静脉内皮细胞培养基中首次发现,而后的研究发现CCN2在各种不同类型的细胞中均有表达,如成纤维细胞,血管内皮细胞,血管平滑肌细胞,成骨细胞,软骨细胞等.目前的研究表明,该蛋白的许多功能是组织特异性的,在骨科方面,CCN2是骨细胞、软骨细胞生成、增殖、分化、迁移、粘附及代谢的主要调节因子,在促进生长板软骨细胞、关节软骨细胞等软骨细胞增殖、分化、凋亡及调节细胞外基质合成方面发挥重要作用[2].
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CCN2在软骨内成骨过程中作用的研究进展
在软骨内成骨过程中，由骨髓间充质干细胞分化而来的软骨细胞首先形成生长板软骨，随着软骨中血管的产生，软骨逐渐被骨组织所替代。躯干骨和四肢骨以及骨折后的骨痂主要是通过软骨内成骨完成生长发育和修复，此过程受到许多生长因子以及激素的影响，包括印第安刺猬蛋白（Indian hedgehog, Ihh）、甲状旁腺激素相关蛋白（parahthy-roid hormone-related protein, PTHrP）、骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins, BMPs）、转化生长因子-β（transforming growth factor β, TGF-β）、CCN2（CCN family member 2）等。其中CCN2是CCN(cys-teine-rich61, connective tissue growth factor, nephrob-lastoma-overexpressed)家族蛋白的成员之一，主要在生理状态下的肥大软骨细胞（hypertrophic chondro-cytes）中表达，分别作用于软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞，在软骨内成骨的各个阶段发挥重要作用。近年来，学者们对CCN2的多功能调控作用和分子机制给予广泛关注，本文对CCN2在软骨内成骨作用的研究进展作一综述。
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CKD患者尿沉渣中CCN2/CCN3mRNA检测的临床意义探讨
目的:探讨慢性肾脏疾病(CKD)患者尿沉渣中CCN2(结缔组织生长因子,CTGF)和CCN3(肾母细胞瘤过度表达因子,NOV)mRNA检测及其在监测肾脏损伤中的意义.方法:研究包括35名非糖尿病的CKD患者和12名健康成人.尿沉渣中CCN2/CCN3 mRNA的检测采用Real time-PCR方法.35例CKD患者中17例患者接受了肾活检,这些肾活检组织的肾小球病变程度经PAS染色后评估.结果:CKD患者组尿CCN2/CCN3 mRNA的表达较正常对照组显著升高,而其尿沉渣mRNA的水平与患者的蛋白尿水平并不相关,尿沉渣CCN3mRNA的水平与肾小球病变程度呈负相关.此外,尿沉渣中CCN2/CCN3的比率与肾小球硬化的程度密切相关.结论:尿沉渣中CCN2/CCN3mRNA的比值与CKD患者的肾小球硬化程度密切相关,提示该项检测可能成为非创伤性评估CKD患者肾脏病变程度的有效检查手段.
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CCN2及APC蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨CCN2及APC蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP技术检测正常结直肠黏膜组织、癌旁组织、结直肠腺瘤、非转移性结直肠癌、转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)及远处转移癌组织各30例中CCN2蛋白及APC蛋白的表达情况;结合结直肠癌患者的临床病理参数进行分析.结果 非转移性结直肠癌、mCRC及远处转移组织中CCN2蛋白的表达率分别为76.67%、73.33%和70.00%;而在癌旁组织、结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织中的表达率分别为6.67%、23.33%和0.00%,差异有统计学意义(2=74.263,P=0.000);APC蛋白在非转移性结直肠癌、mCRC及远处转移组织中均表现为低表达(表达率分别为26.67%、23.33%和16.67%),在癌旁组织、结直肠腺瘤、正常结直肠黏膜组织中均表现为高表达,分别为86.67%、76.67%和90.00%,差异有统计学意义(2=70.00,P=0.000);CCN2表达与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大径和肿瘤组织病理分型无明显关系(P＞0.05),而与肿瘤的TNM分期及5年生存率相关(分别为2=4.689,P=0.03;2=4.13,P=0.042); APC蛋白表达与CCN2表达呈明显负相关(rs=-0.467,P=0.001).结论 CCN2基因是一种癌基因,CCN2在结直肠癌中表达与结直肠癌临床病理指标有关系,CCN2可考虑作为诊断结直肠癌或判断结直肠癌预后的指标; CCN2在结直肠癌中表达与APC有关,且可能受Wnt信号通路的调节.
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CCN2基因在结直肠癌中的表达及其临床意义的研究
目的 研究CCN2在结直肠癌中的表达及其与临床、病理指标的关系.方法 用免疫组化方法检测结直肠癌60例,结直肠癌肝转移、结直肠腺瘤、癌旁组织及正常结直肠粘膜组织各30例样本中CCN2的表达.结果 (1)在结直肠癌和结直肠癌肝转移组织中CCN2蛋白均表现为高表达,分别为75.00%和70.00%;而在结直肠腺瘤、癌旁组织、正常结直肠粘膜组织表达低,分别为23.33%、6.67%、0.00%;差异有极显著性(P＜0.01);(2)结直肠癌组织中CCN2表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移及5年生存率作比较差异有显著性(P＜0.05).结论 CCN2基因可能作为结直肠癌的一个癌基因并参与结直肠癌的发生、发展,可考虑作为诊断结直肠癌或判断结直肠癌预后的指标.
