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癌基因DEK和转录因子AP-2α协同促进乳腺癌中HER2的高表达
目的 探讨癌基因DEK与转录因子AP-2α在乳腺癌变中的相互作用及在HER2过量表达、乳腺癌变中的病理学意义.方法 用Western blot检测组织中DEK、AP-2α和HER2蛋白水平之间的相关性;免疫共沉淀检测DEK和AP-2α在MDA-MB-453乳腺癌细胞中的相互作用;通过siRNA抑制MDA-MB-453细胞中DEK和AP-2α的表达,用半定量RT-PCR和Western blot检测HER2的表达.结果 乳腺癌组织中DEK、AP-2α和HER2的蛋白水平之间显示一定的相关性,DEK和AP-2α在MDA-MB-453细胞内有相互作用,siRNA抑制DEK和AP-2α的表达可协同抑制MDA-MB-453细胞中HER2 mRNA和蛋白的表达.结论 癌基因DEK和转录因子AP-2α协同促进乳腺癌中HER2的高表达.
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子宫内膜癌组织中AP-2α、eIF4E和MMP-9表达及临床意义
目的 探讨AP-2α、eIF4E和MMP-9在子宫内膜癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法分别检测70例子宫内膜癌组织及40例正常子宫内膜组织中AP-2α、eIF4E和MMP-9的蛋白表达差异,并探讨与临床病理特征之间的关系.结果 子宫内膜癌组织中AP-2α阳性表达率为45.7％,低于正常子宫内膜的75.0％ (P ＜0.05),eIF4E和MMP-9表达阳性率分别为71.4％和64.2％,高于正常子宫内膜组织中45.0％和40.0％ (P ＜0.05).在子宫内膜癌组织中AP-2α与MMP-9的表达呈负相关,eIF4E与MMP-9的表达呈正相关(P＜0.05).结论 AP-2α和eIF4E可能分别在转录和翻译阶段调控MMP-9的表达,共同参与子宫内膜癌的发生发展.
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AP-2α在烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中的表达及与肺间隔细胞凋亡的关系
目的 探讨熏烟所致慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺组织中AP 2α表达与肺间隔细胞凋亡的关系.方法 采用被动吸烟80 d来复制大鼠COPD模型,采用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡、Weslern blot法检测肺组织中活化的半胱天冬酶类3(Caspase-3)、免疫组织化学及Western blot法检测胞核中AP-2α蛋白的表达.结果 采用熏烟法成功复制了大鼠COPD模型.与对照组相比,COPD组大鼠肺组织中活化的Caspase-3增加,肺间隔细胞凋亡增多;肺组织中AP-2α的阳性率增加,胞核中AP-2α蛋白水平增加(P＜0.05).结论 AP-2α可能参与了烟雾暴露所致的大鼠肺间隔细胞凋亡及COPD的发生.
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乳癖霜外用对乳腺增生模型大鼠乳腺组织病理形态学和AP-2α、C-erbB-2表达的影响
目的 研究乳癖霜外用对乳腺增生模型大鼠乳腺组织病理形态学和AP-2α 、C-erbB-2蛋白表达水平的影响.方法 36只大鼠随机分为正常对照组、疾病模型组、三苯氧胺软膏组、乳癖霜小、中、大剂量组.通过雌、孕激素联合制造乳腺增生病大鼠模型,造模的同时给予不同的药物进行干预.30 d后观察各组大鼠乳腺组织病理学和脏器系数的改变,放射免疫法检测各组大鼠血清性激素的水平,Western印迹法测定各组大鼠乳腺组织AP-2α 蛋白的表达水平,免疫组化测定各组大鼠乳腺组织C-erbB-2蛋白的表达水平.结果 乳癖霜外用能降低乳腺增生模型大鼠的乳头直径和高度,改善模型大鼠乳腺组织病理形态学改变,调节血清性激素水平,降低模型大鼠乳腺组织中转录因子AP-2α 、癌基因C-erbB-2蛋白的表达水平,与模型组比较有统计学差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 乳癖霜外用对乳腺增生模型大鼠有显著的疗效,其作用机制可能为调节血清性激素水平及调节大鼠乳腺组织转录因子AP-2α 、原癌基因C-erbB-2蛋白的表达水平.
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AP-2α抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡的作用机制研究
目的 研究核转录因子AP-2α抑制胃癌细胞株BGC-823增殖活性及诱导凋亡的作用和机制.方法 收集临床胃癌及其癌旁组织标本30对,免疫印迹及荧光定量法检测AP-2α及Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因mRNA含量;生物软件预测AP-2α蛋白与KLF4基因启动子上的转录因子结合位点并进行验证.分别转染pcDH1-AP-2α及pshRNA-KLF4到BGC-823细胞,转染后48 h,确定细胞转染效率,免疫印迹法检测胞内AP-2α、KLF4、P53及BCL-2蛋白表达;噻唑蓝(4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide,MTT)检测基因干预后各组细胞增殖活性;流式法检测各组细胞凋亡情况.结果 所有检测的30对组织标本中,肿瘤中AP-2α表达和KLF4基因mRNA含量均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01,vs癌旁);生物软件预测显示,AP-2α在KLF4基因启动子上存在9个碱基"5′-GCCGCCGGC-3′"的理论结合位点,位点位于转录起始位点前52碱基处,荧光素酶活性检测证实AP-2α可以结合于预测位点并对下游基因的转录进行正调控;细胞转染后48 h,GFP计数显示,细胞瞬时转染效率约为85％,免疫印迹检测数据表明,AP-2α过表达导致KLF4和P53蛋白表达上调,BCL-2蛋白表达下调,而KLF4基因沉默则能够明显减弱AP-2α对KLF4或者P53蛋白表达的影响;细胞转染后24～72 h,pcDH1-AP-2α转染能够明显抑制BGC-823细胞对数期增殖活性,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α基因过表达对细胞增殖活性的抑制作用;pcDH1-AP-2α转染细胞后48 h,能够明显导致BGC-823细胞产生凋亡,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α过表达产生的诱导细胞凋亡的能力.结论 核转录因子AP-2α通过KLF4基因的转录调控对BGC-823细胞的增殖和凋亡产生影响.
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一类新的AP-2α转录共激活物Ku 70蛋白的鉴定
目的 鉴定新的AP-2α转录共激活物,为乳腺癌的防治寻找新的靶点.方法 以AP-2α为诱饵采用酵母双杂交技术寻找新的AP-2α结合蛋白,免疫共沉淀证实AP-2α与其结合蛋白的相互作用,免疫荧光技术检测AP-2α与其结合蛋白的亚细胞共定位.荧光素酶报导基因检测AP-2α结合蛋白对AP-2α转录活性的影响.结果 酵母双杂交技术鉴定出Ku 70蛋白为新的AP-2α结合蛋白.免疫共沉淀证实了AP-2α和Ku 70蛋白在细胞内的相互作用.亚细胞共定位研究显示AP-2α和Ku 70蛋白都定位于细胞核内.在功能上发现Ku70可以增强AP-2α的转录活性.结论 本研究首次揭示Ku70可以结合AP-2α并促进其转录活性,证明Ku70是一类新的AB-2α的转录共激活物,提示Ku70有望成为治疗AP-2α高表达乳腺癌的新靶点.
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子痫前期胎盘组织中AP-2α与滋养细胞凋亡、侵袭的相关性研究
目的:探讨子痫前期胎盘组织中AP-2α与滋养细胞凋亡、侵袭的相关性.方法:选取2015年11月～2017年10月间在本院分娩的子痫前期产妇68例作为子痫前期组,另取同期在本院进行分娩的健康产妇60例作为正常对照组.对比两组胎盘组织中AP-2α基因、凋亡相关基因、侵袭相关基因表达量的差异,进一步分析子痫前期胎盘组织中 AP-2α基因表达量与滋养细胞凋亡、侵袭活性的内在联系.结果:子痫前期胎盘组织中AP-2α mRNA的表达量高于正常对照组;凋亡相关基因Bcl 、Cx43 mRNA的表达量低于正常对照组,Bax 、Caspase7 、metastin mRNA 的表达量高于正常对照组;侵袭相关基因HIF-1α 、GPR30 、MEST 、Snail mRNA的表达量低于正常对照组,PEDF 、RECK mRNA 的表达量高于正常对照组(P＜0 .05) . Pearson检验发现,子痫前期胎盘组织中AP-2α基因表达量与滋养细胞凋亡相关基因、侵袭相关基因表达量均直接相关.结论:子痫前期产妇胎盘组织中AP-2α基因表达量异常增高,可正向调控滋养细胞的凋亡活力并负向调控其侵袭活力.
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CK2β与AP-2α在人胚肾细胞293FT中相互作用的研究
转录因子AP-2α参与哺乳动物的胚胎发育和癌症发生过程,许多研究已经表明它能与很多蛋白质发生相互作用.通过免疫共沉淀(CO-IP)实验发现AP-2α与酪蛋白激酶2的β亚基(CK2β)有相互作用,在后续的内源性免疫共沉淀实验中,又发现酪蛋白激酶2的催化亚基α(CK2α)也存在于CK2β与AP-2α这个复合物当中.结果有助于进一步研究CK2如何通过与AP-2α相互作用来调节AP-2α的转录活性.
