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大蒜有效成分诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
对大蒜有效成分DAS、DADS、DATS、Ajoene诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展近况进行综述.大蒜有效成分可诱导白血病细胞、胃癌细胞、肺腺癌细胞、结肠癌细胞、神经癌细胞、膀胱癌细胞、皮肤癌、乳腺癌、前列腺以及鼻咽癌等肿瘤细胞凋亡.其主要作用机制是通过影响肿瘤细胞的生长周期,影响癌基因与抑癌基因的表达,改变酶活性以及通过改变细胞内离子浓度等途径诱导肿瘤细胞凋亡.大蒜是一种很有前景的抗肿瘤药物.
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二烯丙基二硫下调uP A和MMP 9抑制乳腺癌细胞侵袭迁移
目的：研究大蒜提取物二烯丙基二硫( DADS)对MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞侵袭迁移的作用。方法采用不同浓度(0,100,200,400μmol/L) DADS处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭能力的影响；划痕愈合实验观察DADS对细胞迁移能力的改变；western blot检测两种细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂( uPA)和基质金属蛋白酶9( MMP9)的表达。结果 Tran-swell实验发现DADS呈浓度依赖性抑制 MCF-7和 MDA-MB-231两种乳腺癌细胞的侵袭,划痕愈合实验则发现DADS呈浓度依赖性抑制两种乳腺癌细胞的迁移。与此同时,Western blot结果显示DADS可浓度依赖性下调侵袭迁移相关蛋白uPA和MMP9的表达。结论 DADS可下调uPA和MMP9表达,抑制乳腺癌细胞侵袭迁移。
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二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响
观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病 HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响.DADS (1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达.与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05).与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应.DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关.
关键词： 二烯丙基二硫 钙网蛋白 人白血病HL-60细胞 细胞增殖 -
DADS上调RORα抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭
目的研究二烯丙基二硫( DADS)是否通过上调维甲酸相关孤核受体α( RORα)表达抑制人胃癌MGC803细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭。方法实验组分为6组,对照组,空载体组, RORα干扰组( miR-RORα),DADS组,空载体联合DADS组,miR-RORα联合DADS组。 Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3蛋白表达。 MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验分别检测细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭的改变。结果 DADS处理细胞24 h后,与对照组和空载体组比较,DADS上调RORα和TIMP3、下调MMP-9蛋白表达。干扰组较对照组与空载体组RORα表达明显下调。与DADS处理组比较,干扰RORα表达上调MMP-9、下调TIMP3蛋白表达。 MTT实验显示,DADS抑制MGC803细胞增殖,而干扰RORα表达促进增殖。流式细胞术显示,DADS诱导G2/M期阻滞,下调RORα削弱其作用。迁移实验显示,DADS处理组迁移距离明显减少。 RORα干扰组迁移距离明显高于对照组和空载体组。侵袭实验显示,DADS处理组较对照组和空载体组穿膜细胞明显减少。干扰组穿膜细胞明显多于对照组和空载体组。干扰RORα表达降低DADS对细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 DADS上调TIMP3表达,下调MMP-9表达,抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,其作用机制与上调RORα表达有关。
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二烯丙基二硫对人胃癌细胞RORα蛋白表达的影响
目的 研究二烯丙基二硫( DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)蛋白表达变化情况.方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα蛋白水平的表达；半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24h后,细胞形态学发生明显改变；RORα蛋白在人胃癌MKN28、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组相比表达明显上调；半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24h后,RORα蛋白表达在MGC803、MKN28细胞中的(0.97±0.01)、(0.91±0.01)较对照组的(0.44±0.02)、(0.72±0.01)显著上调(P ＜0.01或P＜0.05);Western blot分析及灰度扫描显示,DAD5处理人胃癌MGC803、MKN28细胞8、12和24h后,RORα蛋白表达分别为(0.71±0.03)和(0.79±0.01)、(0.87±0.01)和(0.88±0.02)以及(1.31±0.01)和( 0.96±0.02)较未处理组的(0.32±0.01)和(0.68±0.02)明显上调,差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα蛋白表达有关.
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二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)是否上调维甲酸相关孤核受体α(ROR α)抑制人胃癌细胞株MGC803细胞上皮-间质转化(EMT).方法 相差显微镜观察MGC803细胞形态的改变.逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT的相关分子表达.裸鼠实验检测DADS与沉默RORα对移植瘤生长的影响.结果 相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803细胞大小与形状差异更明显.DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降.RT-PCR与Western blot显示,DADS处理后较处理前各组RORαmRNA与蛋白表达上调(P＜0.05).DADS作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显(P＜0.05).RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子(Snail)和波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达上调,而E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA与蛋白下调(P＜0.05).DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin mRNA与蛋白下调和E-cadherin mRNA与蛋白上调(P＜0.05).免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱.DADS作用后,结果相反.裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加(P＜0.05),增殖细胞核抗原(Ki-67)、Snail、CD34及Vimentin阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低.DADS处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强.结论 DADS通过上调RORα可体内外抑制人胃癌MGC803细胞EMT.
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二烯丙基二硫对人胃癌 MGC803细胞作用的研究
目的研究二烯丙基二硫 (DADS)对人胃癌 MGC803细胞的作用.方法采用 MTT法和流式细胞仪检测 DADS对 MGC803细胞的生长抑制作用和细胞周期分布的影响.结果 DADS对 MGC803细胞有明显生长抑制作用, 30、 60、 90 mg/L DADS分别作用于 MGC803细胞 72 h后,抑制率为( 31.58± 2.20)%、( 53.87± 4.50)%和( 81.58± 1.70)%;随着 DADS浓度的增加, MGC803细胞的 G0/G1期比率下降 ,G2/M期的细胞比率逐渐上升.结论 DADS对 MGC803细胞具有生长抑制作用且能使其细胞周期阻滞于 G2/M期.
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二烯丙基二硫对人结肠癌SW480细胞周期的阻滞作用
背景与目的:前期研究表明,二烯丙基二硫(diallyl disulfide.DADS)能有效在体内外抑制人结肠癌细胞增殖,并将细胞阻滞于G2/M期.本实验旨在进一步探讨DADS对人结肠癌SW480细胞周期阻滞作用的可能机制.方法:采用MTT、细胞计数法检测DADS对SW480细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DADS对SW480细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测DADS作用后PCNA、P53表达情况,蛋白印迹法分析P21WAF1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)表达的改变.结果:不同浓度DADS作用SW480细胞24、48、72 h后.对细胞增殖的抑制作用及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加.流式细胞仪分析结果显示,DADS作用SW480细胞后,G0/G1期细胞含量降低.S期细胞比例变化不大,而G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加和处理时间的延长,其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).DADS作用后.免疫细胞化学检测显示,PCNA、P53蛋白表达明显下降.蛋白印迹分析显示,DADS作用SW480细胞后,Cyclin BI蛋白表达明显下降,P21WAF1蛋白的表达明显升高,均呈时间效应关系.结论:DADS可能通过下调PCNA、P53、Cyclin B1蛋白表达.上调P21WAF1蛋白表达引起SW480细胞G2/M期阻滞.
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二烯丙基二硫对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖的影响
背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞增殖,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少.本实验旨在研究DADS对裸鼠体内人结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为DADS组及对照组.观察DADS作用后移植瘤体积和重量的变化,通过光镜和电镜观察移植瘤细胞形态学变化,通过免疫组织化学和形态定量图像分析系统检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化,用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布.结果:DADS在体内能明显抑制移植瘤的生长,相对肿瘤增殖率为49.85%;组织学分析显示DADS组瘤细胞异型性降低,核质比下降,胞浆内细胞器丰富,部分胞核呈退行性变,可见凋亡小体;免疫组化示两组移植瘤组织PCNA蛋白均有阳性表达,DADS组(149.02±4.26)与对照组(178.86±7.69)比较,裸鼠移植瘤组织内PCNA蛋白表达明显减弱(P＜0.05);流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞中G2/M期细胞为18.8%,与对照组比较,DADS组G2/M期细胞(38.6%)显著增多.结论:DADS可体内抑制人结肠癌SW480细胞增殖,使癌细胞阻滞于G2/M期.
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p38通路在二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用
背景与目的:研究表明p38通路参与了细胞G2/M期阻滞过程的调控,但对其调控机制研究很少.本研究旨在探讨p38通路在二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用及其机制.方法:采用MTT法检测MGC803细胞的生长活性;流式细胞仪检测药物对细胞周期分布的影响;Western blot法检测药物对P38蛋白、磷酸化P38蛋白、Cdc25C蛋白的表达.结果:MTT法检测结果显示,P38特异性抑制剂SB203580可拮抗DADS对MGC803细胞的抑制增殖作用.流式细胞仪分析表明,30 mg/L的DADS处理MGC803细胞24 h后,G2/M期的比率为39.4%,高于对照组的9.3%(P＜0.05);但用SB203580抑制P38的活性后,DADS诱导的G2/M期比率从39.4%降到21.2%(P＜0.05).Western blot结果表明,DADS处理MGC803细胞后,p38通路快速激活,磷酸化P38的表达与对照组相比,在20 min内升高3.52倍,而P38总蛋白量没有发生明显改变;DADS作用24 h后,Cdc25C磷酸酶表达降低了62%,而用SB203580抑制剂后,DADS对Cdc25C的抑制作用可以部分逆转(P＜0.05).结论:DADS可能通过激活p38通路使部分MGC803细胞停滞在G2/M期,p38通路调节Cdc25C磷酸酶的表达在DADS诱导MGC803细胞G2/M期阻滞中起着重要作用.
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二烯丙基二硫对AD模型小鼠学习记忆能力和海马突触的影响
目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对阿尔茨海默病（AD）小鼠学习记忆能力及海马突触的影响。方法侧脑室立体定位术注射凝集态Aβ1-42制备AD模型小鼠，随机分成四组AD模型组，低中高DADS剂量组，分别灌服0、10、50和100 mg/kg/d的DADS。1个月后各组小鼠进行Morris水迷宫检测学习记忆能力、银染和电镜检测海马CA1区树突棘和突触的结构、蛋白印迹和RT-PCR检测海马内PSD95和SYP蛋白和基因的表达。结果与AD模型组相比，水迷宫检测显示中高剂量DADS组小鼠学习记忆能力增强，银染和电镜检测显示海马CA1区树突棘和突触增多，蛋白印迹和RT-PCR检测显示海马PSD95和SYP表达增多。结论随着DADS剂量的增加，AD小鼠的学习记忆能力得到改善，海马内树突棘和突触增多。
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JAK／STAT 途径活化与白血病细胞增殖之间的关系
目的：探讨JAK／STAT途径活化与白血病HL－60细胞增殖的相关性。方法分别利用二烯丙基二硫（ DADS）、ATRA、AG490处理体外培养的HL－60细胞，检测给药前后抗原CD11b分化能力、NBT还原能力；Western blot法检测JAK／STAT家族中与DADS诱导增殖相关的蛋白表达情况；免疫组化法检测转录因子c－jun、c－fos、c－myc、STAT的蛋白表达水平。结果 DADS可显著提高HL－60细胞分化能力；随着DADS浓度增加， NBT还原能力下降，且低于ATRA、AG490处理组；经不同浓度DADS处理， HL－60细胞中JAK／STAT家族成员JAK1／STAT3磷酸化水平随DADS浓度升高而降低；经免疫组化分析显示，STAT3、c－myc的蛋白水平受DADS抑制，而c－fos、c－jun的蛋白则可受DADS作用表达升高。结论 DADS通过激活JAK／STAT信号通路抑制白血病HL－60细胞增殖。
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二烯丙基二硫诱导HT-29细胞差异表达cDNA文库的构建
目的:构建二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人结肠癌HT-29细胞差异表达cDNA文库,以期寻找、克隆DADS特异性作用靶点基因.方法:用120 μmol/L的DADS处理人结肠癌HT-29细胞,从DADS处理组及对照组HT-29细胞中提取poly A+RNA,应用高效、灵敏的抑制性消减杂交(SSH)技术构建DADS诱导人结肠癌细胞差异表达cDNA消减文库,再转染大肠杆菌进行文库扩增.结果:成功构建具有高消减效率的DADS诱导人结肠癌细胞差异表达cDNA文库,文库扩增得到了500个克隆,随机挑取100个制备质粒,酶切分析均得到150-1 300 bp大小插入片段,这些片段可能就是载有高度特异性的目的片段.结论:建立了DADS诱导人结肠癌细胞差异表达cDNA文库,为进一步寻找、克隆DADS特异性作用靶点基因奠定了基础.
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DADS上调miR-200b抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭
目的 探索miR-200b和二烯丙基二硫(DADS)相关的抑瘤机制,为揭示DADS抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的内在分子机制提供理论依据.方法 采用qRT-PCR分别检测不同浓度的DADS对Y79细胞miR-200b表达的影响,DADS分别设置六种浓度:0 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L和400 μmol/L.MTT和Transwell侵袭实验分别检测DADS和miR-200b对Y79细胞生长及侵袭能力的影响,将实验设置成五个组,即miRNA阴性对照组(瞬时转染scramble 40μmol/L);miR-200b组(瞬时转染miR-200b-mimics 40μmol/L);DADS阴性对照组(DMSO 10μmol/L,即mock组);DADS组(DADS 200μmol/L)和DADS+miR-200b组(瞬时共转染miR-200b-mimics 40μmol/L)和DADS (200μmol/L).结果 DADS可上调Y79细胞中miR-200b的表达,且其呈剂量依赖性(P<0.05);在MTT实验中,miR-200b组的OD值(0.549±0.057)较miRNA阴性对照组(0.737±0.135)明显降低;DADS组的OD值(0.508±0.064)较DADS阴性对照组(0.722±0.145)明显降低;而DADS+miR-200b组的OD值(0.362±0.081)较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组降低为显著(P<0.05),即DADS可以通过上调miR-200b抑制Y79细胞的增殖能力.在Transwell侵袭实验中,外源性的高表达miR-200b组(105±13)较miRNA阴性对照组(162±12)能够显著抑制Y79细胞的穿膜细胞数,DADS组(102±13)较DADS阴性对照组(154±8)能够显著降低Y79的穿膜细胞数,且DADS+miR-200b组(77±8),细胞穿膜细胞数较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组减少显著(P<0.05),即DADS通过上调miR-200b抑制Y79细胞侵袭.结论 DADS通过上调miR-200b的表达抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长及侵袭.
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DADS对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响
目的：探讨二烯丙基二硫(DADS)对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响。方法将人骨肉瘤U-20S细胞随机分为DADS处理组与空白组，DADS处理组又分为15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L 4个不同浓度小组，每组分别作用于U-20S细胞24 h、48 h、72 h后进行相关检测，每组实验重复3次。采用MTT比色法测量不同的吸光值以检测DADS对人骨肉瘤细胞U-20S的抑制作用；Annexin V-FITC/PI染色法及流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期变化情况；Transwell侵袭实验通过计量同一视野下细胞数量以检测细胞侵袭能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTT比色法结果显示，浓度为60 mg/L DADS处理组作用于U-20S细胞24 h后其吸光值比对照组低(P<0.05)。随着浓度的增加，DADS对骨肉瘤细胞抑制作用无明显增强，表明DADS对骨肉瘤细胞有抑制作用，但并不呈剂量-效应依赖关系；染色法及流式细胞术结果显示，60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h凋亡率为15.89%，高于空白组细胞的8.65%；60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h，G2/M期的细胞为10.44%，高于空白组G2/M期的细胞8.18%(P<0.05)；侵袭试验结果显示，DADS处理组细胞计数为(63±2)个，较空白组细胞计数(104±3)个显著减少(P<0.05)，表明DADS处理组能抑制细胞侵袭能力；细胞划痕试验结果显示，60 mg/L DADS处理组细胞划痕之间的距离大于空白组，以作用48 h抑制作用为显著(P<0.05)，表明DADS (浓度为60 mg/L)能抑制U-20S细胞的迁移，并且随着时间的增加，48 h抑制作用更加显著。结论 DADS能抑制骨肉瘤细胞株U-20S增殖，诱导细胞凋亡，抑制细胞的侵袭和转移。
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DADS对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响
目的:探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS) 诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用.方法:采用MTT、细胞计数法,观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用;施用流式细胞术检测不同浓度DADS对SW480细胞的凋亡率.结果:MTT法显示,DADS能明显抑制SW480细胞生长增殖,呈浓度和时间依赖性,细胞生长增殖速度明显减慢.细胞计数表明,当DADS浓度增加时,SW480细胞群体倍增时间延长,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05).流式细胞仪分析显示,随着DADS处理浓度增加,使SW480细胞凋亡率逐渐增高,差异有显著性意义(P<0.05).结论:DADS具有诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用.
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siRNA 沉默 Chk1基因对二烯丙基二硫诱导胃癌细胞 SGC -7901凋亡敏感性的影响
目的：探讨 siRNA 沉默 Chk1基因表达对二烯丙基二硫诱导胃癌细胞 SGC -7901凋亡和细胞周期的影响。方法：采用 RNA 干扰技术在胃癌细胞 SGC -7901中将 Chk1基因沉默，Western blot 检测转染前后Chk1蛋白表达的变化，流式细胞术检测 Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导胃癌细胞凋亡及细胞周期变化的影响。结果：转染 Chk1 siRNA 后，胃癌细胞 SGC -7901中 Chk1蛋白表达受抑制，明显低于对照组（ P ＜0.05）。FCM 检测结果显示：si - Chk1组较空白对照组 G2∕ M 期百分比有所降低（P ＜0.05），si - Chk1＋ DADS组 G2∕ M 期比例明显低于 Empty vector ＋ DADS 组（P ＜0.05）。siRNA 沉默 Chk1基因使二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由（15.2±1.0）%上升到（30.9±1.9）%。结论：siRNA 沉默 Chk1基因可明显消除 G2∕ M 期阻滞，并显著增强二烯丙基二硫诱导胃癌细胞 SGC -7901凋亡的敏感性，提示 Chk1可作为二烯丙基二硫治疗胃癌的有效增敏靶点。
关键词： 细胞周期检测点激酶 1 RNA 干扰 二烯丙基二硫 细胞凋亡 -
4种有机溶剂溶解甲瓒颗粒的效果比较
自Mosmann等依据细胞能量代谢与DNA合成水平相平行的原理,建立了四甲基偶氮蓝(MTT)比色法测定细胞活性以来,以其快捷、简便和少污染等特点受到重视,并在肿瘤体外药敏实验中被广泛应用.
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二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞周期G2/M期阻滞及机制
目的：研究二烯丙基二硫（Dial yl disulfide，DADS）诱导人髓系白血病细胞株HL-60细胞周期阻滞的分子机制。方法：用不同浓度的DADS处理HL-60细胞0，6，12，24，48 h后，用MTT法、细胞集落培养检测细胞增殖活性；用流式细胞术和有丝分裂指数检测细胞增殖周期；蛋白印迹法检测细胞内p53、p21、及Cdc2激酶的表达和磷酸化水平。结果：不同浓度的DADS对HL-60细胞增殖均有抑制作用，抑制率随着浓度明显增加，且有组间差异（P<0.05），20μM DADS与10 nM ATRA抑制细胞增殖活性相近(P>0.05)；20μMDADS处理HL-60细胞12h后出现细胞周期G2/M期阻滞，此时细胞有丝分裂指数明显下降（P<0.05）；同时，p53表达没有改变而p21及磷酸化cdc2蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论：DADS能诱导人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖周期G2/M期阻滞，p21的活化及cdc2磷酸化可能是DADS诱导细胞周期阻滞的分子机制之一。
