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二烯丙基二硫对小鼠肾包膜下移植人胃癌细胞的生长抑制作用
二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜的主要有效成分,对多种肿瘤均有明显的抑制作用[1].本室体外研究表明:DADS可明显抑制人胃癌MGC803细胞生长[2],其机制与G2/M期阻滞和信号传导通路ERK/AP-1途径有关[3,4].本研究采用人肿瘤细胞肾包膜下移植模型,探讨DADS对体内生长的MGC803细胞的抑制作用.
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二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立
目的 寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型.方法 实验没未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNA Ladder、凋亡相关蛋白的检测.结果 3.6 mg·L-1DADS作用HL-60细胞1 d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6 d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%.DADS作用1、2 d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5 d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P＜0.05).DADS作用2～5 d撤药后再培养至d 6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P＜0.05).处理2～5 d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P＜0.05).处理组中DADS处理4 d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5 d撤药后再培养至d 6均出现明显梯状条带.Western blot结果表明,从作用2 d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调.结论 3.6 mg·L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2 d.
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二烯丙基二硫化物对酒精诱导的小鼠肝脏氧化应激损伤的拮抗作用研究
目的：研究二烯丙基二硫化物（ DADS ）对酒精诱导的小鼠肝脏氧化应激损伤的拮抗作用。方法 SPF级雄性昆明小鼠50只，随机分为对照组、模型组和3个剂量DADS干预组（n＝10）。 DADS干预组小鼠分别经口给予25、50、100 mg/kg体质量的DADS，其余2组动物给予等体积的玉米油，连续7 d。末次给药2 h后，模型组和DADS干预组小鼠经口连续给予3次5 g/kg体质量乙醇（每次间隔12 h）诱导肝脏急性氧化应激损伤；对照组小鼠给予等体积等能量的麦芽糖糊精溶液。4h后，处死动物。测定血清转氨酶活性，制备肝脏石蜡切片进行HE染色观察肝细胞结构改变，检测肝脏抗氧化指标变化进行分子机制探讨。结果与对照组比较，模型组小鼠血清ALT和AST活性显著升高（均P＜0．01）；与模型组比较，DADS干预组小鼠血清ALT和AST活性显著降低（均P＜0．01）。与对照组比较，模型组小鼠肝脏MDA含量显著增加，GSH含量和SOD、GPx、GR活性显著降低（ P＜0．05或P＜0．01）。与模型组比较，3个DADS干预组小鼠肝脏MDA含量分别下降了29．3％、42．3％和46．4％（P＜0．01），GSH的含量分别增加了44．1％、25．2％和49．4％（P＜0．05或P＜0．01）。与对照组比较，模型组小鼠肝脏HO-1的蛋白含量下降了53．41％（ P＜0．01）；与模型组比较，3个DADS干预组小鼠肝脏HO-1的蛋白含量分别增加了1．88、2．05和3．04倍（P＜0．01）。结论 DADS对急性酒精暴露诱导小鼠肝脏氧化应激损伤具有保护作用。
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二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制和细胞周期阻滞作用
二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜中一种有效的脂溶性成分,对多种肿瘤细胞有直接抑制作用[1].我们以人结肠癌HT-29细胞为研究对象来观察不同浓度的DADS对癌细胞生长抑制和细胞周期的调控作用,现报道如下.
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二烯丙基二硫增强胃癌细胞对5-Fu敏感性的研究
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对5-Fu诱导胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的作用及机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),测定DADS对5-Fu诱导MGC803细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测MGC803细胞Bcl-2,Bax,Mcl-1蛋白的表达情况.结果 1mg/L、3mg/L 的DADS分别与5-Fu联合应用,可增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制作用.DADS(1mg/L)能促进5-Fu诱导MGC803细胞的凋亡.DADS作用于MGC803细胞后,Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平下调,Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖方式.结论 ADS能增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其下调 Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关.
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二烯丙基二硫对Rail细胞化疗增敏的研究
目的 研究二烯丙二硫(diallyl disulfide,DADS)对长春新碱(VCR)作用于人淋巴瘤Raji细胞化疗增敏的作用及机制.方法 DADS (0.6251μg/ml、1.25μg/ml)及VCR(6.25,12.5,25.0μg/ml)单用及联合应用作用于Raji细胞,采用CCK-8(cell counting kit)法检测各自的抑制率,应用金氏公式求q值,评价联合用药效果;DADS(0.625μg/ml)、VCR(6.25,12.5,25.0μg/ml)及联合应用作用于Raji细胞,采用流失细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测细胞Bax及Bcl-2的表达情况.结果 无毒剂量的DADS(0.625μg/ml、1.25μg/mi)分别与VCR联合应用,可提高VCR对Raji细胞增殖抑制率.DADS(0.625μg/ml)提高VCR(6.25,12.5,25.0μg/nd)诱导Raji细胞凋亡率(P＜0.05).联合组Raji细胞Bcl-2蛋白表达水平比VCR单药组低(P＜0.05):Bax蛋白表达水平在联合组Raji细胞VCR单药组高(P＜0.05).结论 DADS能增强VCR对Raji细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用;可能机制与其下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关.
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大蒜内烯丙基硫在恶性肿瘤中的作用
大量流行病学研究显示,大蒜可以降低多种恶性肿瘤的发生率和死亡率,包括结肠癌、前列腺癌和胃癌等.大蒜的抗癌主要有效成分为烯丙基硫,其抗癌机制可能涉及调节信号转导通路、调控细胞周期、诱导细胞凋亡和分化,抑制肿瘤致癌基因的表达等.
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二烯丙基二硫联合X射线对人肾癌786-O细胞增殖、凋亡的影响及机制
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)处理联合X射线照射对人肾癌786-O细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将对数生长期的人肾癌786-O细胞随机分为对照组、DADS组、辐射组和联合组.DADS组加入5 μmol/L DADS;辐照组给予2 Gy X射线照射24 h;联合组加入5 μmol/L DADS预处理6 h,再给予2 Gy X射线照射24 h;对照组仅加入等量DMSO.采用克隆形成试验检测细胞克隆存活率,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,PI荧光染色观察细胞核形态变化,Western blotting法检测细胞Bax、Bcl-2蛋白相对表达量.结果 与对照组、DADS组比较,辐射组、联合组克隆形成率、细胞增殖率均降低,细胞凋亡率均升高,且联合组变化更明显(P均<0.05).对照组、DADS组细胞核形态均一,呈圆形,核内荧光均匀弥散,呈蓝色淡染;辐射组和联合组细胞凋亡明显,细胞核亮染,体积变小,并形成凋亡小体,且联合组细胞核形态变化更明显.对照组、DADS组、辐射组、联合组细胞Bax蛋白相对表达量依次升高、Bcl-2蛋白相对表达量依次降低,两组间比较P均<0.05.结论 DADS联合X射线照射可抑制人肾癌786-O细胞增殖,促进其凋亡;上调细胞Bax表达、下调Bcl-2表达可能是其作用机制.
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二烯丙基二硫对非小细胞肺癌细胞miR-200b表达的影响及意义
目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人非小细胞肺癌A549（A549细胞）miR-200b表达的影响及意义。方法常规培养A549细胞、人支气管上皮16HBE细胞，连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量；将A549细胞分别与终浓度为0、25、50、100、200、400μmol／L的DADS共培养，连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量。将常规培养的A549细胞随机分为五组，scramble 组转染miR-200b无关序列，miR-200b组转染miR-200b模拟物，空白组仅加培养液常规培养，DADS组加入200μmol／L DADS处理，DADS＋miR-200b组转染miR-200b模拟物的同时加入200μmol／L DADS处理，各组均连续培养48 h时，采用MTT法检测细胞增殖情况（OD值）。结果16HBE细胞miR-200b相对表达量为1．364±0．031，高于A549细胞的0．673±0．023（P＜0．05）；0、25、50、100、200、400μmol／L DADS处理A549细胞48 h时miR-200b相对表达量分别为0．673±0．023、0．752±0．019、0．805±0．011、1．041±0．049、1．176±0．046、1．342±0．051，各浓度间比较P均＜0．05。 scramble组、miR-200b组、空白组、DADS组、DADS＋miR-200b组OD值分别为0．740±0．027、0．552±0．024、0．735±0．021、0．561±0．027、0．462±0．026，miR-200b组、DADS组、DADS＋miR-200b组OD值均低于scramble组及空白组，DADS＋miR-200b组均低于DADS组及miR-200b组，组间比较P均＜0．05。结论 DADS能够上调A549细胞miR-200b表达，进而抑制细胞增殖，发挥抗肿瘤作用。
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二烯丙基二硫对视网膜母细胞瘤 Y79细胞生长、侵袭的影响及机制探讨
目的：观察二烯丙基二硫（ DADS）对视网膜母细胞瘤Y79细胞生长、侵袭的影响，并探讨其机制。方法培养人视网膜母细胞瘤Y79细胞，分为miRNA阴性对照组（转染40μmol／L scramble ）、miR-222 M组（转染40μmol／L miR-222-mimics）、DADS阴性对照组（加入10μmol／L DMSO）、DADS组（加入200μmol／L DADS）、DADS＋miR-222I组（转染40μmol／L miR-200b-inhibitors和200μmol／L DADS）。采用qRT-PCR法检测不同浓度DADS处理的Y79细胞中的miR-222，采用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞增殖和侵袭情况。结果0、25、50、100、200和400μmol／L不同浓度的DADS处理的Y79细胞中的miR-222相对表达量分别为2．823±0．250、2．343±0．226、1．955±0．267、1．567±0．096、0．875±0．189、0．718±0．126。 miRNA阴性对照组、miR-222M组、DADS阴性对照组、DADS组、DADS＋miR-222I组Y79细胞OD570值分别为0．727±0．167、0．949±0．070、0．712±0．178、0．497±0．126、0．351±0．102，Transwell 穿膜细胞数分别为128±8、179±16、127±12、76±8、45±14， miR-222 M组、DADS组、DADS＋miR-222 I组分别与miRNA阴性对照组、DADS阴性对照组比较，DADS组与DADS＋miR-222I组比较，P均＜0．05。结论 DADS通过下调miR-222的表达抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞的生长与侵袭。
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紫外线抵抗相关基因在二烯丙基二硫诱导人白血病 K562细胞自噬中的作用
目的：观察紫外线抵抗相关基因（UVRAG）在二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病 K562细胞自噬中的作用。方法以 K562细胞为细胞模型，利用透射电镜观察细胞的超微结构自噬体的形成；采用吖啶橙染色和荧光显微镜观察酸性囊泡的形成以检测 DADS 诱导 K562细胞自噬；RT-PCR 检测自噬相关基因UVRAG mRNA 的表达水平。结果透射电镜显示：与空白组和溶媒组比较，DADS（40 mg·L -1）处理组可观察到胞质内出现大量自噬体。吖啶橙染色荧光显微镜下可见到各 DADS 处理组 K562细胞胞浆中的酸性囊泡较空白组和溶媒组明显增多。RT-PCR 结果显示，DADS 作用 K562细胞12 h 后，各 DADS 处理组UVRAG mRNA 表达水平均高于空白组和溶媒组。结论 DADS 能诱导 K562细胞自噬，其机制可能与上调UVRAG mRNA 表达有关。
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C-jun在二烯丙基二硫诱导白血病细胞K562凋亡过程中的作用
目的 探讨c-jun在二烯丙基二硫(DADS)诱导白血病细胞K562凋亡中的作用及机制.方法 通过RT-PCR检测caspase3 mRNA的表达变化,观察DADS诱导K562细胞凋亡作用;RT-PCR从mRNA水平检测c-jun在DADS诱导K562细胞凋亡过程中的表达变化;免疫组化染色从蛋白水平检测p-c-jun(ser73)在DADS诱导K562细胞凋亡中的表达变化.结果 1)随DADS作用时间延长,caspase3的表达越来越强;2)在mRNA水平,DADS作用K562细胞3 h后,随DADS作用时间的延长,c-jun mRNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);3)在蛋白水平,DADS作用K562细胞24 h后,p-c-jun(ser73)的表达增加(P<0.05).结论 DADS诱导K562细胞凋亡呈时间依赖性,其机制可能与c-jun的ser73位点磷酸化有关.
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二烯丙基二硫诱导恶性胶质瘤U251细胞凋亡的作用及机制
目的 研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人恶性胶质瘤U251细胞凋亡的作用及其分子机制.方法 光学显微镜观察DADS作用后U251细胞凋亡形态学改变;流式细胞术检测DADS对U251细胞凋亡率的影响;Western blot和免疫细胞化学分别检测凋亡相关蛋白的表达.结果 光学显微镜下,DADS处理U251细胞后,细胞呈现凋亡形态改变.MTT法显示,15、30、45、60 mg/L DADS处理U251细胞48 h后,生长抑制率分别为22.01％、38.82％、49.23％、55.27％,与未处理组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术显示,15、30、45 mg/L DADS处理后,细胞凋亡率分别为(5.36±0.87)％、(28.36±3.15)％和(44.58±3.95)％,显著高于对照组(2.14±0.45)％(P＜0.05).免疫细胞化学显示,45 mg/L DADS处理48 h后,Bcl-2表达平均吸光度值(0.34±0.03)较未处理细胞(0.75±0.06)明显下降(P＜0.05);Bax表达平均吸光度值(0.63±0.04)高于未处理组(0.26±0.03) (P＜0.05);Caspase 3表达平均吸光度值(0.41±0.05)明显高于未处理组(0.19±0.02)(P＜0.05).Western blot检测显示,15、30与45mg/L DADS处理48 h后,Bcl-2蛋白灰度值比分别为(1.21±0.18)、(0.89±0.14)与(0.41±0.09),较未处理组(2.24±0.26)显著降低(P＜0.05);Bax和Caspase 3蛋白分别为(1.12±0.19)、(1.54±0.22)与(2.08±0.27)和(0.72±0.15)、(1.39±0.21)与(2.28±0.29),明显高于未处理组(0.33±0.08)和(0.14±0.06)(P＜0.05).结论 DADS可诱导恶性胶质瘤U251细胞凋亡,机制与下调Bcl-2,上调Bax、Caspase 3有关.
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二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞Aurora-A、Aurora-B表达的影响
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响.方法 体外培养SGC7901细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学分析DADS对SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响.结果 RT-PCR显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A、Aurora-B mRNA表达明显下调(P＜0.05)；Western blot显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A、Aurora-B蛋白表达水平呈时间依赖性下降(P＜0.05)；免疫细胞化学显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A和Aurora-B蛋白表达明显降低.结论 DADS可从基因和蛋白水平抑制SGC7901细胞Aurora-A、Aurora-B的表达.
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组蛋白乙酰化在二烯丙基二硫抑制CNE2细胞生长增殖中的作用
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)在抑制CNE2细胞生长增殖中,组蛋白乙酰化状态的改变情况.方法 采用MTT、细胞计数、细胞形态学和Western blot方法,分析DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用及与其调控细胞组蛋白乙酰化水平的关系.结果 MTT法、细胞计数显示,DADS能明显抑制CNE2细胞增殖,细胞群体倍增时间延长,呈浓度和时间依赖性;HE染色显示,DADS处理CNE2细胞48 h后,细胞异型性明显降低,核浆比明显减少;Western blot分析表明,90 μmol/L、140 μmol/L、240μmol/L和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞48 h后,组蛋白H3乙酰化的表达较对照组分别增加20%、32%、42%和30%,差异有统计学意义(P<0.05);组蛋白H4乙酰化程度较对照组差异无统计学意义.结论 DADS可抑制CNE2细胞生长增殖,其作用机制可能与组蛋白H3乙酰化水平提高有关.
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二烯丙基二硫阻滞人胃癌细胞周期的作用及机制
目的观察二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌MGC803细胞周期的影响及其机制.方法应用流式细胞术分析人胃癌MGC803细胞在DADS处理前后细胞周期分布的变化.采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶方法(SP)检测DADS处理前后p21WAF1、Rb、p53、p21ras、C-myc基因的表达.结果 20、25、30、35μ·ml-1DADS的不同浓度处理的MGC803细胞G1期细胞所占比例无影响,S期细胞数减少,而G2期细胞则明显增加,与未处理组比较有显著性差异(P<0.05).DADS作用后的MGC803细胞,p21WAF1表达明显增加,而Rb表达呈弱阳性,p53、p21ras、C-myc表达阴性.DMSO处理的MGC803细胞亦呈现同样改变.结论 DADS可以阻滞MGC803细胞于G2/M期.其作用机制可能与上调p21WAF1、Rb基因表达,下调p53、ras、C-myc基因表达有关.
关键词： 二烯丙基二硫 胃癌MGC803细胞 细胞周期 基因表达 -
Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡中的作用
目的:探讨Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡和细胞周期中的作用.方法:采用siRNA转染MCF-7细胞靶向干扰Chk1基因,采用Western blot检测Chk1蛋白表达;采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:转染Chkl siRNA后,乳腺癌细胞MCF-7中Chkl蛋白表达水平降低,明显低于对照组(P＜0.05).FCM检测结果显示,转染Chkl siRNA后,G2/M期乳腺癌细胞数量有所降低(P＜0.05),并且si-Chkl+ DADS组G2/M期比率明显低于NC siRNA+ DADS组(P＜0.05).Chk1基因沉默后,二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.0)％上升到(29.8±1.7)％.结论:siRNA抑制Chk1基因表达可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的敏感性.
关键词： 细胞周期检测点激酶1 RNA干扰 二烯丙基二硫 细胞凋亡 -
二烯丙基二硫诱导肿瘤细胞G2/M期阻滞的分子机制
二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对乳腺癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、胃癌、白血病等许多肿瘤均有明显的抑制作用,其作用与G2/M期阻滞有关.DADS阻滞G2/M期的分子机制包括抑制p34cdc2的活性,激活MAPK信号通路,增加p21WAF1/cip1蛋白表达与ROS生成等.
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二烯丙基二硫诱导人白血病K562细胞凋亡及其对Fas、FasL及caspase-8表达的影响
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度及不同作用时间DADS对K562细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测DADS作用48 h后Fas、FasL、caspase-8 mRNA的表达.结果 DADS可诱导K562细胞凋亡.DADS(作用细胞24 h)浓度从10 mg/L增至40 mg/L时,其对K562细胞的凋亡率由(11.60±0.83)%增至(37.94±0.87)%;DADS(40 mg/L浓度组)作用时间从24 h增至72 h,其对K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)%增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增加(P<0.05).DADS作用48 h后,Fas、caspase-8 mRNA表达水平较对照组上调;FasL mRNA较对照组下调(P<0.05).结论 DADS呈时间和浓度依赖性诱导白血病K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas、caspase-8,下调FasL有关.
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PI3K/AKT通路在二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究
目的：研究PI3K/AKT信号通路在二烯丙基二硫（DADS）诱导K562细胞凋亡中的作用。方法用10、20、40、80 mg/L DADS处理K562细胞48 h，采用吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）染色法倒置显微镜观察细胞形态学变化；AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率；Western blot技术检测AKT、p-AKT、Caspases-3蛋白的表达，并设置空白对照组和溶媒对照组。结果DADS作用K562细胞48 h后，细胞出现体积缩小、形态不规则、胞膜突出等凋亡特征。AO/EB染色显示：随DADS浓度增加，胞体缩小、胞核呈固缩状或圆珠状，染色质凝集，核染色呈橘红色的凋亡细胞数增多，以40 mg/L DADS组明显。10、20、40、80 mg/L DADS组的凋亡率均高于对照组（P<0.05）。各浓度DADS处理组的AKT蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）；随DADS浓度增加，p-AKT蛋白逐渐下降、Caspases 3蛋白逐渐升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 DADS诱导K562细胞发生凋亡，其机制可能与DADS抑制PI3K/AKT信号通路的表达相关。
关键词： 二烯丙基二硫 PI3K/Akt信号通路 凋亡 K562细胞
