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TSA诱导MOLT-4细胞中p21WAF1/Cip-1表达的功能机制研究
为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAF1/Cip-1的表达及其功能,以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21WAF1/Cip-1的表达.结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导MOLT-4细胞发生G2/M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过程中,p21WAF1/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降.p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达规律与TSA诱导的细胞G2/M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂MG-132提升p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2/M阻滞反应而延缓凋亡.结论:蛋白酶体途径参与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAF1/Cip-1分子的降解调控;p21WAF1/Cip-1在TSA诱导的MOLT-4细胞G1/M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用.
关键词： TSA MOLT-4细胞 p21WAF1/Cip-1 G2/M阻滞 MG-132 -
辐射相关基因Necap2基因的克隆、表达及初步功能研究
目的 寻找辐射相关基因并探索其在辐射损伤中的作用.方法 应用表达谱基因芯片技术比较了骨髓造血细胞mRNA在8Gy照射小鼠及健康小鼠之间表达的差异,应用RT-PCR技术从小鼠骨髓细胞中克隆Necap2基因,并应用流式细胞术分析此基因的功能.结果 发现并克隆新的辐射相关基因Necap2,其在照射小鼠骨髓细胞中的表达量约是未照射小鼠的10倍.G2/M期阻滞是骨髓造血细胞辐射后一个特征性改变,因此我们探索Necap2对细胞周期的影响.研究发现Necap2基因细胞内表达可引起HEK 293细胞G2/M阻滞,S期减少,但对G0/G1期没有明显影响.结论 发现一个新的辐射相关基因Necap2,其在辐射过程中可以引起细胞G2/M期阻滞,在此过程中起到重要的调控作用.
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(±)2-(7,8,3',4',5'-五甲氧基)黄烷通过诱导周期阻滞和细胞凋亡抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖
目的 研究(±)2-(7,8,3',4',5'-五甲氧基)黄烷(PMF)体外对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制.方法 MTT法检测不同浓度PMF体外对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测PMF对细胞周期分布的影响;Western blot法检测PMF对凋亡相关蛋白PARP、caspase-3表达的影响.结果 不同浓度的PMF作用72 h可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖;PMF作用12 h可使SGC-7901细胞周期阻滞于G2/M期;PMF作用24 h细胞周期检测可见亚二倍体峰(SubG1),并可诱导细胞凋亡相关蛋白PARP、caspase-3的活化.结论 PMF体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其增殖抑制作用与诱导G2/M周期阻滞和细胞凋亡有关.
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莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G2/M期阻滞及其对Cdk1和CyclinB1蛋白表达的影响
目的:研究莱菔硫烷(SFN)在体外对人肝癌HepG-2细胞G2/M期的阻滞作用,并探讨其分子作用机制.方法:10、20、40μmol·L-1的SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48h后,采用流式细胞仪检测SFN对HepG2细胞周期的影响;Western Blot法检测SFN对HepG2细胞内Cdk1、p-Cdk1(Thr14)和CyclinB1蛋白表达的影响.结果:SFN作用于HepG-2细胞48h后,随着SFN浓度的增大,G2/M期细胞比例逐渐升高,当SFN浓度达到40μmol·L-1时,G2/M期细胞比例达到31.95%,且出现凋亡峰;随SFN浓度的增大,细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达量显著降低(P<0.01或P<0.05),同时p-Cdk1(Thr14)的表达显著升高(P<0.01或P<0.05).结论:SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞发生G2/M期阻滞;SFN可通过下调HepG-2细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达、上调p-Cdk1(Thr14)的蛋白表达水平,进而抑制Cdk1-CyclinBl复合物的形成和活化使人肝癌HepG-2细胞阻滞在G2/M期.
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二烯丙基二硫诱导肿瘤细胞G2/M期阻滞的分子机制
二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对乳腺癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、胃癌、白血病等许多肿瘤均有明显的抑制作用,其作用与G2/M期阻滞有关.DADS阻滞G2/M期的分子机制包括抑制p34cdc2的活性,激活MAPK信号通路,增加p21WAF1/cip1蛋白表达与ROS生成等.
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硝普钠促进辐射诱导的K562细胞凋亡的相关研究
目的:观察经不同剂量X射线及联合一氧化氮供体硝普钠在照射后不同时间点对K562细胞生长增殖及凋亡的影响,为提高肿瘤放射治疗效果提供理论依据.方法:以人红白血病细胞株K562细胞为研究对象,加入终浓度为0.1 mmol/L的硝普钠共孵育一段时间后,经不同剂量X射线照射.继续培养不同时间分别收获细胞样品.Mar法检测细胞增殖,AO/EB双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡和周期.结果:单纯辐射与硝普钠联合辐射对K562细胞的生长增殖均有一定的抑制作用并诱导其凋亡,且硝普钠与辐射联合作用时.X射线诱导K562细胞生长增殖抑制及细胞的凋亡率大于硝普钠和X射线单独作用之和,且随时间的延长及照射荆量的增加而增加;硝普钠对细胞周期的影响在照射前后小剂量(<4Gy)时没有明显差异.均以G/0G1期阻滞为主.只是在大剂量时有明显不同:8Gy、12 h时,照射前以G0G1期阻滞为主,照射后12 h出现明显的G2/M期阻滞,随照射剂量的增加G2/M期阻滞达到高峰,以后随时间的延长G2/M期阻滞逐渐解除,组间有统计学差异.结论:硝普钠在一定程度上可以抑制肿瘤细胞的生长增殖并促进辐射所致肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性.
关键词： 硝普钠 细胞凋亡 G2/M阻滞 人红白血痛细胞株K562 辐射敏感性 -
131I对甲状腺HTori 3细胞凋亡及周期的影响
目的 研究131I诱导人甲状腺HTori 3细胞凋亡、周期阻滞及其与Bcl-2、Fas等基因表达的关系.方法 HTori3细胞经1s1I照射后,MTT方法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;QRT-PCR及Western blot检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas的mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 MTT结果显示不同放射性活度(7.4、14.8、29.6 MBq/mL)的131I作用于HTori 3细胞不同时间(24、48、72、96 h)后,对HTori 3细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).14.8 MBq/mL131I作用于细胞24、48、72h后,出现明显的细胞凋亡(P＜0.05).14.8 MBq/mL131I作用细胞12、24、48 h后,G2/M期细胞所占百分比增加(P＜0.01).实时定量PCR及Western blot结果均显示抗凋亡基因Bel-2表达降低(P＜0.05),促凋亡基因Fas表达增加(P＜0.05).结论 131I能够通过诱导HTori 3细胞凋亡及G2/M期阻滞抑制细胞增殖,Bcl-2及Fas均参与了131I诱导HTori 3细胞凋亡的过程.
