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TSA体外抑制人肺癌细胞系A549细胞增殖及机制
目的 探讨TSA对人肺癌细胞系A549的作用及其对上皮间质转化(EMT)的调控机制.方法 用MTT实验分析TSA体外抑制A549细胞的增殖能力;用划痕实验检测细胞的迁移;用Western blot法检测EMT相关marker蛋白的表达.结果 TSA对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用(P＜0.01),TSA通过EMT途径抑制A549细胞的侵袭与迁移.结论 TSA可体外抑制A549细胞,其部分机制是通过抑制EMT途径实现的.
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结直肠SSA/P和TSA的临床病理学及免疫组化研究
目的 探讨广基锯齿状腺瘤/息肉(SSA/P)和传统锯齿状腺瘤(TSA)的临床病理学、免疫组化特征及癌变通路的意义.方法 收集病理诊断为结直肠锯齿状病变的病例共计291例,从中筛选出结直肠锯齿状腺瘤64例(SSA/P 41例,TSA 23例),收集临床相关资料和观察镜下病理学特征,同时进行MGMT、MLH1、β-catenin、p16、CDX2、RUNX3和Ki-67免疫组化染色.选取34例增生性息肉(HP)、24例正常肠组织和28例结直肠癌(CRC)作为对照,其中HP全部为微小泡型.结果 SSA/P和TSA均好发于左侧结肠.组织学显示,SSA/P锯齿状改变腺体紧靠黏膜肌层,基底隐窝呈倒“T”或“L”型分支；TSA腺体可见明显的锯齿状结构、异位隐窝和细胞异型增生,其中纤维绒毛状TSA(FSA)异型增生程度较高.免疫组化:Ki-67、β-catenin、p16和RUNX3表达阳性率,在SSA/P和TSA组与对照组之间比较差异显著(P＜0.05)；MLH1表达阳性率,在SSA/P与对照组HP和正常之间差异显著(P＜0.05),且阳性表达率呈递增趋势,支持广基锯齿状通路学说,提示HP是SSA/P的一种前期病变.结论 SSA/P和TSA是CRC的癌前病变,通过锯齿状通路发生恶变,具有较高恶性潜能,需要与HP加以区别.
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TSA诱导MOLT-4细胞中p21WAF1/Cip-1表达的功能机制研究
为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAF1/Cip-1的表达及其功能,以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21WAF1/Cip-1的表达.结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导MOLT-4细胞发生G2/M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过程中,p21WAF1/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降.p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达规律与TSA诱导的细胞G2/M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂MG-132提升p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2/M阻滞反应而延缓凋亡.结论:蛋白酶体途径参与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAF1/Cip-1分子的降解调控;p21WAF1/Cip-1在TSA诱导的MOLT-4细胞G1/M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用.
关键词： TSA MOLT-4细胞 p21WAF1/Cip-1 G2/M阻滞 MG-132 -
曲古抑菌素A增强细胞因子诱导的杀伤细胞对胰腺癌细胞株杀伤效果的体外研究
目的：研究细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞对胰腺癌细胞株的杀伤效果；探索曲古抑菌素A（TSA）增强其杀伤效果的机制。方法将胰腺癌细胞株分为2组。一组经100 mmol/L；200 mmol/L浓度的TSA处理24 h，另外一组为空白对照。分别使用流式细胞仪测定两组胰腺癌细胞株的MICA/B表达及使用乳酸脱氢酶法测定CIK细胞对两组胰腺癌细胞株的杀伤率。双变量相关性分析胰腺癌细胞株MICA/B的表达与CIK细胞对胰腺癌细胞株杀伤率的关系。结果经TSA处理24 h后的胰腺癌细胞株，其MICA/B表达相较对照组有明显的升高（P＝0.000），有统计学差异；在不同靶效比的情况下，CIK 细胞对经 TSA处理24 h后的胰腺癌细胞株的杀伤率有显著的提高（P＝0.000）；而相关性分析显示，CIK细胞对胰腺癌细胞株杀伤率的升高与胰腺癌细胞株MICA/B的表达呈正相关（P＜0.01）。结论 TSA可显著调高胰腺癌细胞株的MICA/B表达（P＜0.01），从而增强CIK细胞对胰腺癌细胞株的杀伤。
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医用大麻潜在的治疗作用
前脱口秀主持人Montel Williams,在General Mitchell国际机场被怀疑藏有毒品用具.据TSA(美国安全运输管理局)报道,一根用于吸大麻的管子被发现在Williams的行李箱内.
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hGCN5在Burkkit淋巴瘤细胞株Daudi中的表达及TSA对细胞增殖凋亡的影响
目的:研究hGCN5(human general control of amino acid synthesis protein 5)在Burkkit淋巴瘤细胞株Daudi中的表达及曲古柳菌素A(TSA)对细胞增殖、凋亡的影响,探讨其抗肿瘤的分子机制.方法:采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用免疫细胞化学法和Western blot观察Daudi细胞hGCN5蛋白的表达.结果:TSA可明显抑制Daudi细胞增殖;TSA(50、100μg/L)使细胞积聚于G0/G1期;TSA(200μg/L)则使细胞周期受抑于S期,而对G2/M期的作用不明显;TSA(200、400μg/L)处理24h可以诱导细胞凋亡;免疫细胞化学和Westernblot结果均显示处理组hGCN5的吸光度比未处理组明显增加(P＜0.05).结论:TSA通过上调HATs家族成员中hGCN5的表达,实现对Daudi细胞的抗增殖作用.
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TSA对非小细胞肺癌A549细胞放疗增敏性的研究
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDIs)trichostatinA(TSA)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞放疗敏感性的影响.方法:以5Gy γ-射线照射细胞,或同时以TSA处理细胞.采用MTT法检测细胞存活率,Armexin V-PI染色检测细胞凋亡,流式细胞仪检测caspase-3活性.结果:SGy γ-射线可轻度降低细胞存活率,仅有少量细胞发生凋亡,但同时以TSA和γ-射线处理细胞,细胞存活率明显下降,凋亡细胞显著增多,且明显提高活化的caspase-3水平.结论:TSA通过促进caspase-3激活增强A549细胞对γ-射线的敏感性.
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Ku70乙酰化介导TSA诱导的结肠癌细胞凋亡
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDI)trichostatin A(TSA)对Ku70的乙酰化及其在TSA诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法:以TSA处理结肠癌细胞HCT116和HT29细胞,采用免疫沉淀结合Western blot检测TSA对Ku70乙酰化的作用,流式细胞术检测TSA诱导的细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和细胞色素c(cytochrom c)的转位和表达.结果:TSA可引起结肠癌HCT116和HT29细胞Ku70乙酰化,并与凋亡密切相关,与对照组相比,HCT116凋亡率(P=0.007)和HT29细胞凋亡率(P=0.005)均显著增高,免疫共沉淀检测到TSA处理细胞后,Bax和Ku70之间的相互作用减弱,表明TSA引起的乙酰化促进Bax从Bax-Ku70复合物中释放,Westem blot结果显示TSA促进Bax由胞浆向线粒体转位,同时促进cytochrom c由线粒体向胞浆转位.结论:Ku70乙酰化作用介导了TSA诱导的结肠癌细胞凋亡.
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5-氮脱氧胞苷及曲古抑菌素A影响供核细胞H19基因表达的时间依赖性及浓度依赖性
目的:探讨甲基转移酶抑制剂--5-氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和组蛋白去乙酰基酶抑制剂--曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)影响供核细胞H19基因表达的时间依赖性和浓度依赖性.方法:用不同浓度5-aza-dC及TSA按不同作用时间处理供核细胞(鼠尾尖成纤维样细胞),利用实时定量PCR法检测处理后H19基因的表达.结果:不同浓度的5-aza-dC处理组之间H19的表达无明显差异,但延长作用时间可使H19表达增强;TSA使H19的表达下降,但无时间依赖性.结论:长时间低浓度的5-aza-dC能增强供核细胞中H19基因的表达,而TSA则使H19的表达减弱,为体细胞克隆中表观遗传修饰抑制剂的选择及后续基因印迹研究提供了依据.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗骨肉瘤活性的体内实验研究
目的 建立骨肉瘤MNNG/HOS裸小鼠模型,并研究曲古抑菌素A(TSA)体内抗肿瘤作用.方法 采取皮下悬液注射法,建立人骨肉瘤裸小鼠模型.人骨肉瘤MNNG/HOS细胞株体外传代培养后,将2×106细胞悬液注入裸小鼠股外侧皮下,观察肿瘤生长情况.荷瘤小鼠行小动物Micro-CT成像系统检查,肿瘤组织常规HE染色并镜检.相同方法建立此种骨肉瘤裸小鼠模型,待肿瘤直径达10～20 mm时,随机分为对照组(注射含体积分数5％DMSO的生理盐水),TSA组(注射TSA,1 mg/kg)和环磷酰胺(CTX)组(注射CTX,20 mg/kg),每隔3d注射1次,同时测量肿瘤直径及荷瘤鼠体质量,绘制肿瘤生长曲线及裸小鼠体质量变化曲线.结果 裸小鼠接种细胞株2周后,均有局部肿瘤形成.4周后,小动物Micro-CT成像系统可见骨质破坏,光镜下可见骨肉瘤细胞及其直接形成的肿瘤性骨样组织,骨肉瘤细胞在横纹肌间浸润性生长,成骨作用明显.在本实验建立的动物模型体内,TSA可明显抑制肿瘤的生长(P＜0.05),对照组与实验组无明显的体质量差异.结论 成功建立了骨肉瘤MNNG/HOS裸小鼠模型；TSA在骨肉瘤裸小鼠模型体内,可明显抑制肿瘤的生长.
关键词： 骨肉瘤 MNNG/HOS细胞株 动物模型 TSA -
4种肿瘤标志物在肺癌诊断中的应用评价
对于肺癌的辅助诊断和监测，常用的血清肿瘤标志物为:CEA、TSA、β2-MG、TUM等，鉴于它们均为非特异性的肿瘤相关抗原，检测肿瘤的敏感性及特异性均有限。我们将上述4种标志物进行联合测定和评价，并分析、比较不同的组合，以提高检测肺癌的敏感性。现报告如下。1 材料与方法1.1 健康人对照组 65例健康成人，男36例，女29例，年龄均在45～56岁。1.2 肺癌组经临床、实验室、影像学、病理学等确诊的58例肺癌患者，男46例，女12例，年龄均在42～70岁。1.3 术后组对肺癌组其中45例患者进行了术后6个月～2年的追踪检测，复诊时由CT及放射检查确定是否有转移或复发。
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TSA体外抑制Ⅱ型胶原诱导的抗原特异性T细胞增殖
目的:检测TSA对Ⅱ型胶原诱导的T细胞增殖的抑制作用.方法:采用CIA小鼠模型,收集引流淋巴结细胞.MTT法观察不同浓度TSA对T细胞的抑制作用,Annexin-v观察细胞凋亡情况.用Caspase 3试剂盒检测Caspase 3酶活性.结果:TSA呈时间和剂量依赖性抑制T细胞增殖,经20ng/TSA处理后,T细胞凋亡率增高,呈现时间依赖性效应关系.20ng/ml TSA作用T细胞后,实验组与对照组相比Caspase 3活性明显升高.结论:TSA可能通过上调Caspase 3活性,诱导细胞凋亡,从而抑制T细胞增殖.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA诱导人乳腺癌细胞凋亡及自噬
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素(TSA)对人乳腺癌细胞凋亡及自噬的作用及其可能的分子机制.方法 采用MTT法检测T47D细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Western blot法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达.结果 TSA对人乳腺癌细胞T47D具有增殖抑制作用(P ＜0.05);TSA诱导T47D细胞发生凋亡,下调BCL-2/Bax比值,上调Caspase-3的表达(P＜0.05);同时自噬相关蛋白LC3B及Beclin-1的表达也明显增加(P ＜0.05,P＜0.01).结论 TSA体外能抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制与诱导细胞凋亡和自噬作用有关.
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5-Aza-dC和TSA对肝细胞癌细胞株中3-OST-2甲基化和基因表达的影响
目的 探讨5-Aza-dC和TSA对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中3-OST-2甲基化水平、基因表达以及对核转录因子UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1,也称为ICBP90/NP95)表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测药物作用前后HCC细胞株中3-OST-2甲基化的状态改变;采用实时荧光定量RT-PCR法检测3-OST-2和UHRF1 mRNA的表达变化;采用细胞爬片免疫组化法检测UHRF1蛋白表达.结果 3-OST-2在HCC细胞株中呈完全甲基化状态,5-Aza-dC或TSA均能部分逆转3-OST-2甲基化,其mRNA表达分别增加2.7倍和4.9倍,两种药物联合处理后,3-OST-2甲基化被完全逆转,其mRNA表达增加9.1倍.5-Aza-dC或TSA均能降低UHRF1 mRNA和蛋白的表达,TSA比5-Aza-dC疗效更好(P<0.01),两种药物联用具有协同作用(P<0.01).结论 启动子甲基化和组蛋白修饰共同导致3-OST-2基因表达降低.5-Aza-dC和TSA单独作用均能部分逆转3-OST-2甲基化,增加其mRNA表达,抑制核蛋白UHRF1表达可能是其中机制之一.
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曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用
目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法 建立PC12细胞缺糖/缺氧 (oxygen and glucose deprivation,OGD) 损伤模型,1-640 nmol·L-1 TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide (PI)和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量.结果 与模型组相比,80 nmol·L-1 TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P＜0.05).结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤.
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曲古霉素A对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用
目的 探讨曲古霉素A(TSA)对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用.方法MTT法检测TSA处理宫颈癌HeLa细胞12、24、48、72 h的细胞毒性及TSA作用24 h的10%细胞抑制浓度(10%inhibition concentration,IC10)和半数抑制率IC50对HeLa细胞不同分割放疗方式的增敏效果；克隆形成法分析IC10的TSA对HeLa细胞放射增敏作用的影响,单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比(sensitive enhencement ratio,SER).结果0.05～0.8 μmol/L TSA对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈一定的时间-剂量依赖性,TSA作用24 h的IC10和IC50,分别为0.0312和0.5865.0.6μmol/L以上浓度及药物作用时间超过48 h的TSA对HeLa细胞的增殖抑制作用并无明显增加.IC10曲古霉素A的SER为1.6858,IC10的TSA对每次2.0Gy、1.0 Gy(×2)、0.5 Gy(×4)分割放射组的SER分别为1.4496、1.6410、1.9554.结论TSA对宫颈癌HeLa细胞具有良好的细胞毒性及放射增敏作用,且对低剂量多次分割放疗的增敏作用更强.
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曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其RASSF1A基因表达的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其RASSF1A基因表达调控的影响.方法 用 0.1、0.3、1.0μmol/L TSA分别处理人胃癌SGC-7901细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测RASSF1A mRNA和蛋白表达水平.结果 流式细胞仪分析表明,不同浓度TSA可诱导SGC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性(P<0.05).TSA干预前SGC-7901细胞无RASSF1A mRNA及蛋白表达,而不同浓度TSA处理SGC-7901细胞后,RASSF1AmRNA及蛋白表达分别上调,呈浓度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与RASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关.
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曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用.方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化.结果:①荧光显微镜观察:分别作用45 min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA+TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白.免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA+TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA+TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P＜0.05);免疫印迹结果也显示,作用45 min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA+TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2 h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性.结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活.TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用.
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TSA对发育期大鼠癫痫后脑损伤的保护作用及其机制
目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑素A( TSA)在癫痫后脑损伤发病中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组：对照组、海人酸(KA)组、小剂量TSA干预组(0.03 mg/kg)及大剂量TSA干预组(0.1 mg/kg)组,通过腹腔注射海人酸( KA)制作发育期大鼠癫痫模型,TSA于KA诱导癫痫前2 h腹腔注射给药,评估惊厥发作的等级及记录惊厥的潜伏期。癫痫后24 h处死大鼠,HE染色观察脑组织病理变化；TUNEL染色检测大鼠海马神经元细胞凋亡；CD68染色检测活化的小胶质细胞；Western blot检测IL-1β和TNF-α蛋白的表达。结果 KA组均达到Ⅳ~V级惊厥发作,而TSA干预组能减轻惊厥发作的等级和延长惊厥的潜伏期。 HE染色可见KA组明显的神经元凋亡及细胞水肿,伴有较多的炎症细胞浸润,而TSA干预组能减轻神经元凋亡及细胞水肿,同时减少炎症细胞浸润。与对照组比较,KA组神经元凋亡数、小胶质细胞活化数及炎症因子的表达均显著增加( P<0.05),而TSA能抑制KA诱导的改变。相对于0.03 mg/kg TSA干预组,0.1 mg/kg TSA干预组治疗作用更明显( P<0.05)。结论 TSA能抑制癫痫后海马神经元凋亡、小胶质细胞活化及炎症因子的表达,同时能减轻惊厥发作的等级和延长惊厥的潜伏期,从而对癫痫后脑损伤起到保护作用。
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TSA对人胃癌MKN-28细胞生物学行为及其RASSF1A基因表达的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌MKN-28细胞生物学行为及其RASSFIA基因表达调控的影响.方法 0.1、0.3、1.0μmol/L不同浓度的TSA分别处理人胃癌MKN-28细胞,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测RASSFIA mRNA和蛋白表达水平.结果 不同浓度的TSA处理MKN-28细胞后,细胞增殖受到明显抑制,细胞周期发生改变,使细胞阻滞于G1期,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性(P<0.05),细胞凋亡率无明显变化,差异无显著性(P>0.05).RT-PCR、Western blot显示MKN-28细胞无RASSF1A mRNA及蛋白表达,TSA处理后,KASSF1A mKNA及蛋白表达分别上调,呈浓度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA抑制人胃癌MKN-28细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,可能与KASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关.
