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神经干细胞定向分化过程中编码基因表达谱分析
目的 探索小鼠神经干细胞定向分化为神经元及胶质细胞过程中重要发育基因的表达变化.方法 1)神经干细胞培养及定向分化诱导培养;2)分化神经元、星形胶质细胞的流式分选;3)针对编码基因表达谱芯片的生物信息学分析,包括基因功能聚类、通路分析等.结果 1)经细胞分选获得神经干细胞、神经元、星形胶质细胞;2)Sox2、Nestin等神经干细胞、神经元及星形胶质细胞的标志性基因表达谱式明显;3)Wnt通路、Insulin通路、P53通路活性的改变在定向分化细胞类群中存在细胞特异性.结论 神经干细胞的分化过程是一个多基因通路综合变化的复杂网络.
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p53通路微小RNA在卵巢癌细胞和浆液性卵巢癌组织中的表达及意义
目的 探讨微小RNA (miRNA) miR-449a、miR-449b和miR-192家族是否与miR-34家族一样可作为p53通路成员,在卵巢癌中发挥作用.方法 以DNA损伤药物阿霉素处理p53野生型卵巢癌A2780细胞,采用Western blot法检测A2780细胞中p53蛋白的表达改变,采用实时定量PCR法检测激活p53后miR-449a/b、miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-192和miR-194的表达.在P53突变型卵巢癌SKOV3.ipl细胞中过表达miRNA,检测SKOV3.ipl细胞的细胞周期改变.采用实时定量PCR法检测miR-449a/b、miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-192和miR-194在正常输卵管以及不同分级分期的浆液性卵巢癌组织中的表达.结果 在阿霉素处理后24h,卵巢癌A2780细胞中p53蛋白的表达明显升高,miR-34b、miR-34c、miR-449a/b的表达约升高19 ～ 21倍,但miR-192和miR-194的表达未见明显变化.转染miR-449b和miR-34c后,SKOV3.ipl细胞出现G1期阻滞.miR-449a/b在浆液性卵巢癌组织中的表达改变与miR-34b和miR-34c基本平行,它们在高级别和晚期浆液性卵巢癌组织中的表达水平,显著低于正常输卵管组织以及低级别和早期浆液性卵巢癌组织；miR-192、miR-194和miR-34a在卵巢癌组织中的表达未发现明显的特征,在正常输卵管组织中的表达也明显低于miR-449a/b、miR-34b和miR-34c.结论 miR-449a/b与miR-34b、miR-34c作为抑癌基因,在p53通路中发挥协同作用,它们的功能缺失与浆液性卵巢癌的发生、发展密切相关.
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G2～M期DNA损伤检验点与卵巢癌的关系
G2～M期是细胞生长的终末环节,是各种致癌和抑癌因素作用的必经之路.DNA损伤与肿瘤的发生关系密切,如果细胞在有丝分裂之前不能维持自身基因组的稳定性,损伤的基因就会随着细胞分裂遗传给子代细胞,终导致恶变.G2～M期DNA损伤检验点是细胞周期运行至有丝分裂前细胞自我修复的后时机,CDK1是细胞周期G2～M期检验点的核心因子.近年研究表明,参与G2～M期DNA损伤检验点的细胞因子与卵巢癌关系密切,综述近年G2～M期DNA损伤检验点与卵巢癌关系的研究.
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电离辐射对细胞应激反应相关信号转导的影响
电离辐射作为一种特殊的外界损伤刺激因素,与其他因素诱导细胞应激反应相比,既有其共性,也有其特殊性,其特殊性在于诱发应激反应的分子机制可能有区别,尤其是对于信号转导途径的影响.电离辐射使细胞内的水分子辐解产生活性氧和自由基等或直接损伤DNA等靶分子,并以此为信号,通过启动相关的信号转导系统如MAPK通路、p53通路等而诱发细胞应激反应.
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伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
目的 探讨伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究.方法 以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,随机分为空白组、伏立诺他高剂量组、中剂量组和低剂量组共4组,采用CCK-8法测定SKOV3细胞增殖情况,Western blot检测SKOV3细胞H3K4ac和H3K27ac蛋白表达情况,Real-time PCR检测SKOV3细胞Bax mRNA、Bcl-2 mR-NA、p53 mRNA、CyclinD1 mRNA表达.结果 CCK-8法测定结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组增殖明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05).RT-PCR结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中Bcl-2 mRNA和CyclinD1mRNA表达明显降低,Bax mRNA和p53 mRNA表达明显升高.Western blot结果显示与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中H3K4ac和H3K27ac蛋白表达明显增加.结论 伏立诺他抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与抑制组蛋白去乙酰化酶活性,激活p53凋亡通路有关.
关键词： 卵巢癌SKOV3 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 伏立诺他 P53通路 -
P53、MDM2、P21、P16在云锡矿粉诱导的人支气管上皮恶性转化细胞中的表达
[目的]研究P53通路相关蛋白在云锡矿粉诱导的细胞恶性转化过程中的变化情况.[方法]采用免疫荧光细胞化学染色技术分别检测正常人支气管上皮细胞株(BEAS-2B)、矿粉作用后第25代细胞(BEAS-MD-25)及软琼脂克隆形成细胞(BEAS-MD-C)中P53、MDM2、P21、P16的表达.[结果]P53、MDM2蛋白在BEAS-2B细胞中表达呈阴性,而在BEAA-MD-25及BEAS-MD-C细胞中均呈阳性;P21、P16蛋白在BEAS-2B细胞中表达呈阳性,随细胞转化进程表达不断下降;在BEAS-MD-25细胞中呈弱阳性;在BEAS-MD-C中呈阴性.[结论]转化细胞中P53、MDM2、P21、P16的表达异常,提示其P53通路已发生改变,第25代细胞P53蛋白的阳性表达,提示P53基因异常可能是细胞发生恶性转化的关键步骤之一.
关键词： P53通路 免疫荧光 细胞转化 人支气管上皮细胞株BEAS-2B -
澳洲茄碱对黑色素瘤细胞的抑制作用
目的：研究澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤细胞的抑制作用及其机制。方法：采用MTT法检测了澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤B16细胞株的抑制效果；以稍高于半致死剂量的澳洲茄碱处理B16细胞48h后，进行荧光定量PCR，分析药物及其溶媒对B16细胞中p53通路的激活情况。结果：澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤B16癌细胞有明显的抑制作用，并呈现剂量和时间依赖性；其48h IC50约为35μg／mL；SYBR绿色荧光定量PCR数据显示，澳洲茄碱的处理显著提高了癌细胞中p53通路的下游因子Puma基因的表达水平（ P﹤0.05）。结论：澳洲茄碱能明显抑制黑色素瘤B16癌细胞的生长，并能显著激活p53通路，这很可能是导致黑色素瘤细胞死亡的主要原因。
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P53途径在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用
目的 探讨辛伐他汀处理后的P53通路和细胞周期的分子水平变化,以说明P53途径在辛伐他汀抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡中的作用.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞仪检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测P53通路和细胞周期相关基因的变化.采用免疫组化LDP法检测P21蛋白变化的水平.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数P53通路基因和细胞周期相关基因出现差异表达.P21蛋白随药物作用时间的延长,表达上调.结论 P53通路可能在辛伐他汀诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡发生的过程中起重要作用.
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辛伐他汀依赖p53通路对K562细胞G1期调节的分子机制
目的 探讨辛伐他汀体外处理后的K562细胞p53通路和K562细胞C1期的分子水平的变化.以说明辛伐他汀是否依赖p53通路参与K562细胞细胞周期G0/G1期停滞的调控和抑制K562细胞增殖.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测K562细胞p53通路和细胞周期G1期相关基因表达的变化.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期.明显诱导K562细胞凋亡,大多数p53通路基因和细胞周期相关基因的变化出现差异表达.结论 辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的p53通路,抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡.
