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六种肿瘤细胞株BLM基因转录水平的研究
BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom's syndrome)的病因.BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sister chromatic exchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降.临床表现为免疫缺陷,恶性肿瘤易患体质等等.本研究对BLM基因在肿瘤细胞株和正常人中表达的差异进行研究,以期发现肿瘤新的发生机制,为寻找新的特异分子治疗靶点提供线索.应用PT-PCR方法检测正常人造血细胞和六种肿瘤细胞株中BLM基因的mRNA水平,并作序列检测.结果表明,六种肿瘤细胞株均高表达BLM mRNA,但未见BLM基因结构异常,而正常人表达量很低(P＜0.01).结论:在本研究中的6种肿瘤细胞株高表达BLM mRNA,肿瘤细胞株和正常人BLM mRNA表达水平有显著差异性.BLM异常可能参与肿瘤的发生或是导致耐药的原因之一.
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β-连环素在白血病细胞株的异常定位研究
β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子,其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一.由于造血细胞缺少典型的黏着连接(adherens junction,AJ),因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究.本研究探讨4种常见的白血病细胞株(Daudi, Jurkat, K562和Thp-1)中β-连环素蛋白的定位及β-连环素基因mRNA的表达水平,了解血液肿瘤中是否有β-连环素蛋白的定位异常,以期发现白血病新的发生机制,为寻找新的特异治疗靶点提供线索.用免疫细胞化学法检测β-连环素在白血病细胞系中的定位,用实时定量RT-PCR法测定β-连环素mRNA表达水平.结果表明:4种白血病细胞株有两种(Jurkat、Thp-1)存在β-连环素的异常定位,且β-连环素mRNA表达增高,但在Jurkat和Thp-1细胞中的β-连环素mRNA 低于Daudi和K562细胞.这4种白血病细胞株中β-连环素基因的mRNA表达水平与其异常定位无相关性.结论:β-连环素定位异常可能参与部分血液肿瘤的发生,引起β-连环素定位异常的机制并不是发生在转录水平.
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125I-脱氧尿嘧啶核苷对淋巴瘤细胞Raji和Daudi的杀伤作用
目的 探讨125I-脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)在淋巴瘤细胞Raji和Dandi中的特异性摄取及其杀伤效应.方法 测量Raji、Daudi细胞和细胞核在含不同放射性浓度125I-UdR的培养液中培养不同时间后的活度;用噻唑蓝(MTT)实验和碘化丙啶(PI)染色周期分析评价125I-UdR对Raji和Daudi细胞的杀伤作用.结果 Raji和Daudi细胞摄取125I-UdR的量明显高于Na125I对照组(P<0.05),在100 kBq/ml浓度时,Raji和Daudi细胞摄取125I-UdR的量分别为(14414±95)和(6916±53.69)Bq/106细胞,而对Na125I的摄取量分别为(68±3.8)和(324±32.8)Bq/106细胞;细胞和细胞核中125I-UdR的量随培养基中125I-UdR放射性浓度以及培养时间的增加而增加;125I-UdR组的存活分数明显低于Na125I对照组(P<0.05),以500 kBq/ml浓度培养48 h时,Raji和Dandi细胞125I-UdR组的存活分数分别为(19.78 ±1.39)%和(43.17 ±2.69)%,而Na125I组的存活分数分别为(79.10 ±1.79)%和(80.36±6.12)%;细胞存活分数有随培养基中放射性浓度增加而降低的趋势.结论 125I-UdR可被Raji和Daudi细胞特异性摄取并进入细胞核中,进而杀死细胞,其作用具有明显的时间-效应和剂量-效应关系.
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hGCN5在Burkkit淋巴瘤细胞株Daudi中的表达及TSA对细胞增殖凋亡的影响
目的:研究hGCN5(human general control of amino acid synthesis protein 5)在Burkkit淋巴瘤细胞株Daudi中的表达及曲古柳菌素A(TSA)对细胞增殖、凋亡的影响,探讨其抗肿瘤的分子机制.方法:采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用免疫细胞化学法和Western blot观察Daudi细胞hGCN5蛋白的表达.结果:TSA可明显抑制Daudi细胞增殖;TSA(50、100μg/L)使细胞积聚于G0/G1期;TSA(200μg/L)则使细胞周期受抑于S期,而对G2/M期的作用不明显;TSA(200、400μg/L)处理24h可以诱导细胞凋亡;免疫细胞化学和Westernblot结果均显示处理组hGCN5的吸光度比未处理组明显增加(P＜0.05).结论:TSA通过上调HATs家族成员中hGCN5的表达,实现对Daudi细胞的抗增殖作用.
