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六种肿瘤细胞株BLM基因转录水平的研究
BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom's syndrome)的病因.BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sister chromatic exchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降.临床表现为免疫缺陷,恶性肿瘤易患体质等等.本研究对BLM基因在肿瘤细胞株和正常人中表达的差异进行研究,以期发现肿瘤新的发生机制,为寻找新的特异分子治疗靶点提供线索.应用PT-PCR方法检测正常人造血细胞和六种肿瘤细胞株中BLM基因的mRNA水平,并作序列检测.结果表明,六种肿瘤细胞株均高表达BLM mRNA,但未见BLM基因结构异常,而正常人表达量很低(P＜0.01).结论:在本研究中的6种肿瘤细胞株高表达BLM mRNA,肿瘤细胞株和正常人BLM mRNA表达水平有显著差异性.BLM异常可能参与肿瘤的发生或是导致耐药的原因之一.
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热疗联合化疗对Raji细胞的体外抑制及Bcl-2表达的作用
目的:观察热疗联合阿霉素对人B细胞淋巴瘤细胞系Raii的体外增殖的抑制作用、凋亡及Bcl-2表达的影响.方法:MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40 ℃、41 ℃及42 ℃,体外作用于Raji细胞.作用前及48h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及Bcl-2表达.观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果.结果:作用48h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度.单纯40 ℃、41 ℃及42 ℃热疗60 min对Raji细胞系有抑制作用(P＜0.01),热化疗组对Raji细胞有明显的抑制作用(P＜0.01),均随着温度的增高而增强.流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2的表达,热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间差异均有非常显著性意义(P＜0.01);Bcl-2蛋白的表达则下降,各组之间差异也有非常显著性意义(P＜0.01).结论:热疗联合阿霉素能增强对Raji细胞的体外抑制作用;提高肿瘤细胞的凋亡率,下调Bcl-2蛋白的表达.
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125I-脱氧尿嘧啶核苷对淋巴瘤细胞Raji和Daudi的杀伤作用
目的 探讨125I-脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)在淋巴瘤细胞Raji和Dandi中的特异性摄取及其杀伤效应.方法 测量Raji、Daudi细胞和细胞核在含不同放射性浓度125I-UdR的培养液中培养不同时间后的活度;用噻唑蓝(MTT)实验和碘化丙啶(PI)染色周期分析评价125I-UdR对Raji和Daudi细胞的杀伤作用.结果 Raji和Daudi细胞摄取125I-UdR的量明显高于Na125I对照组(P<0.05),在100 kBq/ml浓度时,Raji和Daudi细胞摄取125I-UdR的量分别为(14414±95)和(6916±53.69)Bq/106细胞,而对Na125I的摄取量分别为(68±3.8)和(324±32.8)Bq/106细胞;细胞和细胞核中125I-UdR的量随培养基中125I-UdR放射性浓度以及培养时间的增加而增加;125I-UdR组的存活分数明显低于Na125I对照组(P<0.05),以500 kBq/ml浓度培养48 h时,Raji和Dandi细胞125I-UdR组的存活分数分别为(19.78 ±1.39)%和(43.17 ±2.69)%,而Na125I组的存活分数分别为(79.10 ±1.79)%和(80.36±6.12)%;细胞存活分数有随培养基中放射性浓度增加而降低的趋势.结论 125I-UdR可被Raji和Daudi细胞特异性摄取并进入细胞核中,进而杀死细胞,其作用具有明显的时间-效应和剂量-效应关系.
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硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖凋亡和SHP-2基因表达的影响研究
目的 观察硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、Raji细胞增殖凋亡和SHP-2基因表达的影响.方法 利用淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞进行传代培养,用1.0、5.0、25.0和100.0 nmol/L不同浓度的硼替佐米进行处理,观察不同时间段细胞增殖抑制率和凋亡率,比较实验组和对照组SHP-2基因表达水平.结果 随着硼替佐米浓度增加,相同干预时间下的Jurkat细胞、Raji细胞抑制率增加;随着干预时间延长,相同硼替佐米浓度时,Jurkat细胞、Raji细胞抑制率也增加.随着硼替佐米浓度增加,相同干预时间下的Jurkat细胞、Raji细胞凋亡率增加;随着干预时间延长,干预浓度相同时,Jurkat细胞、Raji细胞凋亡率也增加.对照组的SHP-2表达量小于硼替佐米干预组,且干预时间相同时,随着浓度增加,SHP-2表达量升高;药物浓度相同,随着干预时间延长,SHP-2表达量升高.结论 硼替佐米可抑制淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、Raji细胞增殖,促进凋亡并提高SHP-2基因表达量,相关作用与浓度有关.
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p27kip1及其出核相关分子激活蛋白1辅因子在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系
目的 探讨p27kip1及其出核相关分子激活蛋白1(AP-1)的辅助因子Jab1在淋巴瘤细胞中的表达变化及相互关系.方法 采用血清饥饿合并释放方法同步化处理淋巴瘤细胞系Jurkat和Raji细胞,分别采用Western blot及RT-PCR技术检测p27kip1、Jab1在淋巴瘤细胞中的蛋白表达水平和mRNA表达水平变化;采用来普霉素B(LMB)刺激增殖过程中的淋巴瘤细胞,检测p27kip1、Jab1的表达变化;构建人Jab1基因的pcDNA3.1-myc-Jab1的真核表达质粒,脂质体转染Jurkat细胞,配合免疫荧光技术检测p27kip1的亚细胞定位情况;免疫沉淀检测Jurkat和Raji细胞中p27kip1与Jab1的结合情况.结果 血清饥饿导致Jurkat和Raji细胞生长周期停滞,p27kip1蛋白总量增加,Jab1蛋白总量减少.血清释放后两者的蛋白水平呈现相反的表达变化,而p27kip1 mRNA水平无明显改变.LMB可以抑制由血清释放引起的细胞增殖,在此过程中p27kip1表达上调,Jab1表达下调.转染Jab1真核表达质粒的Jurkat细胞p27kip1定位有明显的改变.免疫沉淀结果显示在Jurkat和Raji细胞中p27kip1与Jab1相互结合.结论 Jab1可能通过与p27kip1结合来介导p27kip1的核内外分布并影响其表达,进而影响p27kip1的功能状态,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长.
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survivin反义寡核苷酸诱导淋巴瘤细胞凋亡及对化疗药的增敏作用
目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对淋巴瘤细胞的增殖、凋亡及对化疗药物敏感性的影响.方法人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染淋巴瘤细胞株Raji后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、Westem blot检测survivin mRNA及蛋白的表达.结果①survivin ASODN抑制Raji细胞增殖呈时间和剂量依赖性;②survivin ASODN处理组Raji细胞凋亡率为33.0%,正义寡核苷酸(SODN)组为11.5%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组Raji细胞survivin蛋白及nRNA的表达水平显著下降;④survivin ASODN和Vm26联合处理组Raji细胞增殖受抑率为56.5%,显著高于单用survivin ASODN组的29.2%(P＜0.05)和单用Vm26处理组的26.9%(P＜0.05).结论 survivin ASODN能够抑制Raji细胞增殖、诱导凋亡,并能增加Raji细胞对化疗药物的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.
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夏枯草提取物联合化疗药物对淋巴瘤细胞增殖的影响
目的:研究中药夏枯草提取物(Prunella vulgaris Linn. extract,PVE)联合化疗药物对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响.方法:MTT法检测PVE分别联合紫杉醇(paclitaxel,TAX)、多柔比星(adriamycin,ADM)对Raji细胞的生长抑制率;FCM法检测PVE与TAX联合对Raji细胞周期分布及凋亡的影响;免疫组织化学法检测PVE对Raji细胞内survivin及caspase-3蛋白表达的影响.结果:PVE、TAX及ADM对淋巴瘤Raji细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PVE在0.8～0.000 8 μg/mL浓度范围内可增强TAX对Raji细胞的抑制作用(P<0.01);在0.08～0.000 8 μg/mL浓度范围内与ADM联合使用时细胞生长抑制率较单用ADM时明显增高(P<0.01).与TAX单用组比较,PVE与TAX联用组的S期细胞数下降,G2/M期细胞数明显升高.免疫组织化学检测结果显示,PVE(30 μg/mL)可使Raji细胞中caspase-3蛋白表达增强,survivin蛋白表达减弱.结论:PVE可增强Raji细胞对TAX及ADM的敏感性.
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新型核苷类似物FNC 对Raji细胞增殖、凋亡和Bcl-6、PRDM1、C-myc表达的影响
目的：研究2’-脱氧-2’-氟-4’-叠氮-核苷类似物（ FNC）对Raji细胞增殖的影响及其作用机制。方法：分别用0、0．035、0．350、3．500、35．000和350．000μmol/L的FNC处理 Raji 细胞24、48、72 h后，应用MTT法检测细胞增殖情况；分别用0、0．035、0．175、0．875、4．375μmol/L FNC处理Raji细胞48 h后用流式细胞术检测细胞周期及凋亡，用RT-PCR与Western blot 法分别检测细胞中Bcl-6、PRDM1、C-myc mRNA及蛋白的表达。结果：FNC可显著抑制Raji 细胞的增殖，呈明显的时间、剂量依赖性（ F浓度＝4869．984，F时间＝1785．062，F交互＝126．281， P均＜0．001）；FNC可诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期于G0/G1期（P＜0．05）；随着FNC浓度的增加，Raji细胞中Bcl-6、C-myc mRNA及蛋白的表达降低（F＝65．497、68．502和59．086、78．285，P均＜0．001），PRDM1 mRNA及蛋白的表达升高（F＝811．33、85．234，P均＜0．001）。结论：FNC可能通过下调Bcl-6、C-myc和上调PRDM1的表达，抑制Raji细胞的增殖，诱导细胞凋亡。
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姜黄素对Raji细胞的生长抑制及其作用机制
目的:研究姜黄素对淋巴瘤细胞系Raji的生长抑制作用及其分子机制.方法:以不同浓度(6.25～50μmol·L-1)的姜黄素作用于Raji细胞12～48 h,二甲基四氮唑法(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞凋亡率,RT-PCR法检测p53 mRNA的表达,并采用免疫组化法检测bcl-2和p53蛋白表达.结果:①姜黄素能以时间和剂量依赖方式抑制Raji细胞的增殖,24 h-IC50值为20.40 μmol·L-1;②姜黄素(≥12.5μmol·L-1)能诱导Raji细胞发生凋亡,此作用呈剂量依赖性;③RT-PCR结果显示姜黄素25μmol·L-1和50 μmol·L-1处理组能明显下调Raji细胞中p53 mRNA的表达;④免疫组化结果显示,姜黄素25μmol·L-1和50μmol·L-1处理组可抑制Raji细胞中bcl-2和p53蛋白的表达,此抑制作用也呈剂量依赖关系.结论:姜黄素能够显著抑制Raji细胞的生长,诱导其凋亡,其对bcl-2和p53在mRNA和蛋白水平表达的抑制可能是抗肿瘤的重要机制之一.
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热化疗对Raji细胞体外增敏作用的实验研究
目的 观察热疗联合阿霉素对人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞内的药物浓度变化及凋亡的影响.方法 MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40℃、41℃及42℃,体外作用于Raji细胞.作用前及48 h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及细胞内药物浓度的变化.观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果.结果 作用48 h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度.热化疗组对Raji细胞有明显的抑制作用(P＜0.01),随着温度的增高而增强;热化疗组细胞内的药物浓度明显增加(P＜0.01).结论 热疗联合阿霉素能增加Raji细胞内的药物浓度,提高肿瘤细胞的凋亡率.
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蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响. 方法: 不同浓度(0.5、1.0、5.0、10.0和50.0 μmol/L)的MG132处理Raji细胞24 h和48 h, MTT法检测细胞增殖情况;5.0 μmol/L MG132处理Raji细胞24 h,流式细胞术进行细胞凋亡率及细胞周期分析.结果: 浓度为1.0、5.0、10.0、50.0 μmol/L的MG132作用于Raji细胞24 h和48 h后,细胞增殖OD(A490 nm)值均显著低于对照组 (P<0.05),增殖抑制率(20.60±10.28)%～(60.40±2.75)%,随MG132浓度的增加和作用时间的延长细胞增殖抑制率增高,抑制作用呈现剂量和时间依赖性;5.0 μmol/L的MG132作用Raji细胞24 h后,实验组细胞凋亡率为25.86%,对照组为0.06%,实验组S期细胞比率(51.70%)较对照组(39.83%)上升,而G0/G1期细胞比率(33.54%)较对照组(46.04%)下降.结论: 蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制Raji细胞的增殖并诱导其发生凋亡和G2/M期阻滞.
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VES体外抑制Raji细胞增殖及机制的初步研究
目的观察维生素E琥珀酸酯(VES)体外对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期和细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)的影响.方法应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法,体外观察VES对Raji细胞的作用.结果 VES对Raji细胞的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生,具有剂量效应和时间效应关系,同时VES作用后,细胞内CDK2蛋白表达下降,细胞周期发生变化,细胞阻滞于G1期.结论 VES通过影响细胞周期调控因子CDK2的表达从而干扰细胞周期可能是其抗肿瘤的途径之一.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 Raji 细胞 细胞周期素依赖性激酶2 细胞周期 -
Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2 ASODN)联合Rituximab[CD20单克隆抗体(mAb)]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法:bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)检测bcl-2蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2 mRNA表达水平;用Raji细胞建立裸鼠B细胞淋巴瘤模型观察bcl-2 ASODN与Rituximab联合在体内的抗肿瘤效果. 结果:5～30 μmol/L bcl-2 和1 ～16 mg/L Rituximab单独应用均能抑制Raji细胞生长、诱导细胞凋亡、使bcl-2蛋白和bcl-2 mRNA表达降低, 但两者联合应用较单独应用抑制作用更为明显(P＜0.01).体内实验表明, bcl-2 ASODN与Rituximab联合应用较单独可有效抑制BALB/c裸鼠B细胞淋巴瘤的生长(P＜0.01).结论:bcl-2 ASODN联合Rituximab较分别单独应用可明显抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞生长, 促进细胞凋亡;其机制可能是通过联合下调bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA表达而起作用.
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磁性纳米铁联合多柔比星对Raji细胞的影响
目的 探讨磁性纳米Fe3O4颗粒(Fe3O4-MNP)联合多柔比星(ADM)对Raji细胞的影响.方法 采用MTT法检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p53和NF-KB的表达水平.结果 ADM及Fe3O4-MNP-ADM对Raji细胞的生长抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关(r=0.412,P=0.027;r=0.523,P=0.014)；12、24、48 h细胞凋亡率二者分别为8.76％比14.85％、35.08％比44.50％、44.00％比69.40％,差异有统计学意义(t值分别为-9.137、-4.808、-6.337,P值分别为0.012、0.041、0.024)；Western blot检测示ADM组与Fe3O4-MNP-ADM组NF-KB蛋白的灰度条带与内参比较分别为4.22±0.32、3.31±0.28,p53蛋白的条带灰度值分别为1.042±0.114、1.270±0.091,差异具有统计学意义(t=-54.416,P=0.035；t=33.963,P=0.047).结论 Fe3O4-MNP联合ADM能够有效抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与增强p53蛋白活化、抑制NF-κB通路的激活有关.
