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阿糖胞苷联合冬凌草甲素诱导U937细胞株凋亡的初步研究
目的:探讨阿糖胞苷联合冬凌草甲素诱导白血病细胞株U937凋亡的作用.方法:用阿糖胞苷和冬凌草甲素单药或两药联合处理U937细胞后,采用细胞计数检测细胞增殖,瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞术分析细胞磷脂酰丝氨酸外翻情况和线粒体膜电位变化,蛋白印迹法检测凋亡相关分子表达情况.结果:阿糖胞苷和冬凌草甲素单药均能抑制U937细胞增殖,而两药联合抑制作用更加明显,两者能协同诱导U937细胞凋亡,并明显促进细胞磷脂酰丝氨酸外翻和线粒体跨膜电位下降;两药联合较单药组还能明显诱导Caspase-9、Caspase-3活化及PARP的剪切.结论:阿糖胞苷与冬凌草甲素能够协同抑制U937细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能是主要通过线粒体途径介导.
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阿糖胞苷对U937细胞作用与端粒酶相关基因表达水平的研究
目的:检测不同浓度、不同时间阿糖胞苷(ctyarabine,Ara-C)作用U937细胞后其凋亡、坏死比例及端粒酶各组分基因mRNA水平的变化.方法:采用不同浓度Ara-C作用相同时间、同一浓度Ara-C作用不同时间处理U937细胞.通过流式细胞仪观察其凋亡和坏死细胞比例;RT-PCR方法检测端粒酶各组分基因人端粒酶催化亚基(hTERT)、人端粒酶RNA成分(hTR)和人端粒酶相关蛋白质(hTP1)mRNA水平变化.结果:体外小剂量(0～0.2μg/ml)Ara-C诱导U937细胞12 h,细胞凋亡和坏死比例及端粒酶各组分基因在mRNA水平上无明显变化.而2μg/ml和10μg/ml Ara-C组的细胞凋亡和坏死比例明显增加;端粒酶hTERT mRNA水平由0.70±0.08分别下调至0.52±0.06和0.40±0.05,而hTR、hTP1 mRNA无变化.10 μg/ml的Ara-C作用U937细胞后,细胞凋亡比例随时间延长而增加,12 h时达大值(14.35±2.86)%;细胞坏死比率随时间延长而增加,48 h坏死比例高为(52.28±11.90)%;同时hTERT基因mRNA水平随时间延长而逐渐降低,48 h达低值0.21±0.06;hTR、hTP1 mRNA水平无改变.结论:Ara-C能下调hTERT基因的mRNA水平,且有浓度和时间依赖性,其下调该基因水平主要与诱导细胞坏死有关,与细胞凋亡关系甚微.
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粒细胞集落刺激因子等三药联用对U937细胞作用机制的研究
目的:研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合低剂量阿糖胞苷(Ara-C)和阿克拉霉素(ACR)(CAG三药联用)体外对单核白血病细胞系U937细胞的作用机制.方法:以U937细胞株为实验模型,进行细胞计数和细胞形态观察,MTT法检测不同药物对U937细胞的抑瘤率,流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记膜联蛋白V(AnnexinV),细胞分化抗原CD14以及进行细胞周期分析.结果:经CAG作用48 h后,U937细胞数量明显减少,形态显示凋亡小体增多:早期凋亡标记AnnexinV明显增高,CD14表达轻度升高,与Ara-C联合ACR(CA)组比较,结果差异有显著性(P=0.000,0.007).细胞周期分析显示,CAG作用24h后,与CA组比较,S期细胞比例增高(P=0.032);48 h后比例下降,结果差异无显著性(P=0.589).结论:CAG三药联用的作用机制主要是通过G-CSF促使U937静止期细胞进入细胞周期S期,增加Ara-C、ACR对U937细胞的细胞毒性,以诱导细胞凋亡为主,轻度诱导分化.
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预激方案CAG治疗急性髓细胞白血病的疗效及作用机制
目的 观察含粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的预激方案在治疗初治急性髓细胞白血病(AML)中的疗效,并进一步研究其作用机制.方法 13例初治AML患者予以含G-CSF、低剂量阿糖胞苷(Ara-C)和阿克拉霉素(ACR)的CAG方案.以U937细胞株为体外实验模型,流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Annexin V以及进行细胞周期分析.结果 一疗程完全缓解率为46.2%(6/13),部分缓解率为38.5%(5/13),总有效率84.7%(11/13);二疗程完全缓解率为76.9%(10/13).体外实验中,经CAG处理后,早期凋亡标记Annexin V明显升高(P<0.01).细胞周期检测显示,CAG处理24 h后,S期细胞比例明显升高(P<0.05).结论 G-CSF可增加化疗药物对AML的疗效,其作用机制主要是通过G-CSF促使G0期白血病细胞进入细胞增殖周期,增加细胞周期特异性化疗药物的细胞毒性,诱导细胞凋亡是主要途径.
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曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用.方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化.结果:①荧光显微镜观察:分别作用45 min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA+TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白.免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA+TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA+TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P＜0.05);免疫印迹结果也显示,作用45 min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA+TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2 h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性.结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活.TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用.
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高效液湘色谱检测高密度脂蛋白转运荷脂巨噬细胞内胆固醇的生物学活性
目的 应用U937泡沫细胞模型建立一种新的检测高密度脂蛋白(HDL)外运细胞内胆固醇生物学活性的方法.方法 将U937细胞与100μg/Ml氧化低密度脂蛋白孵育36 h后,分别用不同浓度高密度脂蛋白处理24h,应用高效液相色谱(HPLC)检测细胞内胆固醇和胆固醇酯含量.结果 经氧化低密度脂蛋白处理后的U937细胞,HPLC检测细胞内总胆固醇增加,胆田醇酯含量大于胆固醇含量;经高密度脂蛋白处理后,细胞内胆固醇含量减少,不同厂家及不同批次的高密度脂蛋白外运胆固醇的生物学活性有所不同.结论 经氧化低密度脂蛋白处理后的U937细胞可以作为检测高密度脂蛋白外运胆固醇生物学活性的方法.
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稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的U937白血病细胞株的建立及初步特性分析
[目的]构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对U937细胞的影响.[方法]首先在空载体MSCV-IRES-GFP (MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进行病毒包装,并感染U937细胞,用流式细胞分选仪分选出绿色荧光细胞,获得U937-GFP和U937-p62稳定细胞株,利用流式细胞仪及Western blot分别检测GFP细胞的阳性率及p62蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定U937-GFP和U937-p62细胞的生长情况,流式细胞术检测髓系细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达情况.[结果]荧光显微镜观察结果显示,MIG和MPIG病毒感染后,U937-GFP和U937-p62细胞均表达绿色荧光蛋白;经流式细胞仪分选后,U937-GFP和U937-p62细胞中GFP阳性表达率分别达98.5％和87.3％.Western blot的结果显示U937-p62细胞中p62蛋白表达较U937-GFP显著升高.MTT实验结果显示,与U937-GFP细胞相比,U937-p62细胞的生长速率加快.流式结果显示U937-GFP细胞和U937-p62细胞表达细胞表面分化抗原CD1 1b及CD14无明显差异.[结论]成功构建了p62基因过表达的U937稳定细胞株,过表达p62可促进U937细胞增殖,并不能促进U937细胞的分化.
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维生素D3诱导的U937细胞中CD14表达的实验研究
目的: 探讨维生素D3诱导U937细胞上CD14蛋白的表达及其对内毒素(LPS)刺激的反应性.方法: 用0.1 μmol/L Vit D3与U937细胞共同培养24 h诱导CD14基因的表达, 并观察U937细胞对不同浓度的LPS刺激不同时间的反应性.结果: Vit D3能稳定诱导U937细胞表达CD14 mRNA和CD14蛋白.经Vit D3诱导的U937细胞对LPS刺激的敏感性显著增强, 表现为低浓度LPS刺激即能诱导该细胞核中NF-κB激活, 促进TNF-α mRNA的转录和表达, 并将表达的TNF-α释放入培养上清中.结论: Vit D3能诱导U937细胞中CD14基因和蛋白的表达, 并增加其对LPS刺激的反应性.
